食品中兽药残留检验

1、第七章 食品中兽药残留检验食品中兽药残留检验第1页一 、概述经典兽药是指用于预防和治疗畜禽疾病药品。不过，伴随集约化养殖生产开展，一些化学、生物药用成份被开发成含有一些功效动物保健品或饲料添加剂，也属于兽药范围。兽药主要用途有防病治病、促进生长、提升生产性能、改进动物性食品品质等。兽药残留(residues of veterinary drug)是指用药后蓄积或存留于畜禽机体或产品(如鸡蛋、奶品、肉品等)中原型药品或其代谢产物，包含与兽药相关杂质残留。食品中兽药残留检验第2页兽药最高残留限量(MRLVD)是指某种兽药在食物中或食物表面产生最高允许兽药残留量(单位gkg，以鲜重计)。 兽药残留可

2、分为7类：抗生素类;驱肠虫药类;生长促进剂类;抗原虫药类;灭锥虫药类;镇静剂类;-肾上腺素能受体阻断剂年农业部颁布动物性食品中最高残留限量要求： 可用于食品动物，不需要制订最高残留量限量药品有88种 可用于食品动物，需要制订最高残留限量药品有94种 能够使用，但不得在动物性食品中检出兽药残留药品有9种 禁止使用，且在动物性食品中不得检出药品有31种食品中兽药残留检验第3页兽药残留产生原因 养殖步骤用药不妥是产生兽药残留最主要原因。产生兽药残留主要原因大致有以下几个方面 非法使用违禁或淘汰药品 不恪守休药期要求 滥用药品 违反相关标签要求 屠宰前用药 食品中兽药残留检验第4页兽药残留危害1.毒性

3、作用：急、慢性中毒，致畸、致突变或致癌作用（简称“三致”作用）2.耐药性3.过敏反应4.激素样作用5.污染环境影响生态食品中兽药残留检验第5页兽药残留分析技术兽药残留分析是复杂混合物中痕量组分分析技术。残留分析既需要精细微量操作伎俩,又需要高灵敏痕量检测技术。样品分离纯化技术（提取和净化方法）简单化、微型化和自动化，提升了提取或净化效率及自动化水平。如固相萃取法（SPE）、固相微萃取（SPME），超临界流体萃取(SFE)、微波萃取法（MAE）、免疫亲和色谱（IAC）技术、基质固相分散（MSPD）技术，凝胶渗透色谱（GPC）净化，分子印迹技术等。在定量分析上新技术包含毛细管电泳、超临界流体色谱、

4、液相色谱-质谱联用技术、免疫分析技术和生物传感器等。食品中兽药残留检验第6页样本前处理 1. 1提取 提取是使用适当溶剂将待测物连同部分样本基质从固态样本转至易于净化或分析液态,通常可除去99%样本杂质。依据样本性质选择溶剂,如脂肪或水分含量。使用水溶性有机溶剂(乙腈、甲醇、丙酮等)有许多优点:溶剂和动物样本易混合,提取速度快;溶剂溶解作用强;提取液pH值能够调整,适用范围广;提取同时兼脱蛋白和脱脂;待测物在样本提取液中均匀分布,可只移取部分上清液或滤液进行分析,无需 重复提取将待测物全部转出。 食品中兽药残留检验第7页1. 2净化 净化即将待测物与提取液中样本干扰杂质分离。兽药残留分析中惯用

5、净化方法是液- 液分配和固相萃取。 液- 液分配:等体积分配体系中溶质分配平衡后溶解在非极性或极性较弱溶剂中溶质百分比称为p值,利用p值能够选择萃取系统、计算萃取次数和抽出率。经过调整溶液pH值、极性、离子对形成等伎俩选择性地改变待测物p值.固相萃取: 其基本原理与开放式柱色谱相同。固相萃取中样本与微细颗粒填料(70150m)接触面积大,净化速度快,分离效能高;操作简便,溶剂用量少,回收率高。薄层色谱 :含有直观、速度快、样本容量大和分离效能高(颗粒3050 m)等优点。但对紫外- 可见区无吸收待测物却难以定位,有些待测物可经过标准品显色来处理。 食品中兽药残留检验第8页1. 3浓缩 浓缩是待

6、测物富集或转溶惯用方法。前处理中以浓缩过程待测物损失最大。应防止样品液被直接蒸干,不然待测物可能附着于器皿上或与样本基质结合使回收率下降,高极性待测物如磺胺类药品较为严重。 1. 4衍生化 衍生化提升检测灵敏度和选择性已成为残留分析中衍生化最主要目标,如给待测物连接强电负性基团以适于气相色谱电子捕捉检测器检测、HPLC紫外或荧光衍生化等。 食品中兽药残留检验第9页测定方法 气相色谱法 ：气相色谱法有许多高灵敏、通用性或专一性强检测器供选取,如氢焰离子化检测( FID) 、氮磷检测器(NPD)等,检测限普通为g/kg级。不过大多数兽药极性或沸点偏高,需繁琐衍生化步骤,限制了GC应用。 食品中兽药

7、残留检验第10页 几乎全部化合物均可用HPLC进行测定。HPLC分离机制与常规柱色谱相同,但填料愈加精细(510m) ,可重复进样,分析速度快。HPLC至今仍缺乏可满足兽药残留分析要求通用型检测器。紫外检测器(UVD)最普及,其次是荧光检测器和电化学检测器。大部分抗生素在高于230 nm光谱区无吸收,而在低于230 nm紫外区许多样本基质和流动相产生干扰,需衍生化后测定,限制了紫外检测器应用。(大多数动物源性食品中兽药残留分析采取HPLC法，不过对于一些兽药残留，HPLC检出限达不到要求） 高效液相色谱法 食品中兽药残留检验第11页 HPTLC出现使TLC进入了复兴时期,现已成为仅次于HPLC

8、和GC残留分析方法。HPTLC斑点原位扫描定量、定性和高效分离材料(310m) 。改变了常规TLC在灵敏度和重现性方面不足,但保持了TLC简便、快速和样品容量大优点,可使用正相或反相板,分辨率几乎与HPLC相当。HPTLC在兽药残留快速筛选性检测方面应用广泛。 高效薄层色谱(HPTLC) 食品中兽药残留检验第12页超临界流体色谱( SFC) SFC可填补GC和HPLC不足,但不可能取代二者。SFC最大优点是能够方便地连接各种灵敏检测器(MS, ECD等) ,如猪组织中磺胺类药品等抗菌素残留SFC -MS分析。食品中兽药残留检验第13页 CZE是20世纪90 年代以来研究最活跃分析技术之一。CZ

9、E不一样于传统凝胶电泳技术, CZE使用直径仅2550m毛细管而不用载体,待测组分在高压(2030 kV)下泳动,截面积小,热量和泳速均匀。所以, CZE兼有高压电泳高速、高分辨和HPLC灵活、高效优点,柱效高达106塔板/m。向电解质中加入超临界胶束浓度表面活性剂,如十二烷基硫酸钠( SDS) ,即为毛细管胶束电动色谱( cap illarymi - cellarelectrokineticchromatography,CMEC) ,分离范围可扩展至中性或两性分子,分离效能亦深入提升。CZE将在简化样本前处理、多残留分析和分析自动化方面发挥主要作用。当前CZE主要问题是样品量太小,限制了检测

10、灵敏度。毛细管区域电泳(CZE)食品中兽药残留检验第14页免疫分析技术 免疫分析是以抗原与抗体特异性、可逆性结合反应为基础新型分析技术。兽药残留免疫分析方法建立步骤包含待测物选择、半抗原及人工抗原合成、抗体制备和测定方法建立免疫分析技术不论作为兽药残留分析检测伎俩还是样本净化方法,都能使分析过程尤其是前处理步骤大大简化。当前几乎全部主要兽药已建立或试图建立免疫测定法(多数是ELISA) ,ELISA 缺点在于影响原因较多，易出现假阳性结果。食品中兽药残留检验第15页色谱-质谱连用技术 药品残留研究中，惯用色谱法含有高效分离能力和高灵敏度定量检测能力，但仅显示色谱峰和保留值，不能提供待测物残留组

11、分结构信息或对未知化合物进行结构判定。质谱等含有很强结构判定能力，但只适合用于纯物质分析，本身不具备分离能力，二者结合尤其是联用仪器能够集高效分离和结构判定于一体，是生物样品复杂混合物中痕量组分定性和定量分析最有效伎俩之一。 兽药多残留IAC 分离纯化技术是LC-MS-MS 和GC-MS 检测兽药残留时最有效分离纯化伎俩。建立动物性食品中药品多残留定量确证检测技术（IAC-GC-MS、IAC-LC-MS-MS），是残留分析研究领域一个主要发展方向。食品中兽药残留检验第16页一.抗生素类药品 这类药品多为天然发酵产物，是临床应用最多一类抗菌药品，如青霉素类、氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类、螺旋

12、霉素、链霉素、土霉素、金霉素等。青霉素类最轻易引发超敏反应，四环素类、链霉素有时也能引发超敏反应。轻至中度超敏反应普通表现为短时间内出现血压下降、皮疹、身体发烧、血管神经性水肿、血清病样反应等，极度超敏反应可能造成过敏性休克甚至死亡。长久摄入含氨基糖苷类残留超标动物性食品，可损害听力及肾脏功效。食品中兽药残留检验第17页四环素类 四环素类抗生素是由放线菌产生一类广谱抗生素，包含金霉素、土霉素、四环素等，其结构均含并四苯基本骨架。广泛用于各种细菌及立克次氏体、衣原体、支原体等所致之感染。名称理化性质用途土霉素OTC淡黄色粉末,盐酸盐易溶于水,溶液不稳定,临用现配腹泻、气喘病、产道疾病等金霉素CT

13、C盐酸盐为黄色结晶，微溶于水，水溶液不稳定与土霉素相同四环素TC盐酸盐为黄色结晶粉末，有引湿性，溶于水腹泻、气喘病、产道疾病等食品中兽药残留检验第18页欧盟与中国关于四环素类抗生素最大残留限量（GB/T5009.116-)食品中兽药残留检验第19页氯霉素类抗生素 包含有氯霉素、甲砜霉素及无味氯霉素等。（现已被禁用氯霉素对哺乳动物大肠杆菌病基本失去治疗作用，且能抑制蛋白质合成和骨髓造血功效，造成血小板降低性紫斑、粒细胞缺乏症、再生障碍性贫血和溶血性贫血。）检测见GB/T18932.19-食品中兽药残留检验第20页二.磺胺类药品 主要用于抗菌消炎，如磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺眯、菌得清、新诺明等

14、。近年来，磺胺类药品在动物性食品中残留超标现象，在全部兽药当中是最严重。长久摄入含磺胺类药品残留动物性食品后，药品可不停在体内蓄积。磺胺类药主要经肾脏排出，在尿中浓度较高，其溶解度又较低，尤其当尿液偏酸性时，可在肾盂、输尿管或膀胱内析出结晶，产生刺激和阻塞，造成泌尿系统损伤，引发结晶尿、血尿、管型尿等。 食品中兽药残留检验第21页三.硝基呋喃类药品 主要用于抗菌消炎，如呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等。经过食品摄入超量硝基呋喃类残留后，对人体造成危害主要是胃肠反应和超敏反应。剂量过大或肾功效不全者，可引发严重毒性反应，主要表现为周围神经炎、嗜酸性白细胞增多、溶血性贫血等。长久摄人可引发不可逆性末

15、端神经损害，如感觉异常、疼痛及肌肉萎缩等， 中国和欧美大多数国家要求禁止使用这类兽药，在动物性食品和饲料中不得检出。食品中兽药残留检验第22页盐酸克伦特仑残留检验 一个平喘药。该药品既不是兽药，也不是饲料添加剂，而是肾上腺类神经兴奋剂.能够促进瘦肉生长抑制肥肉生长饲料添加剂。理化特征：白色或类白色结晶粉末，无臭、味苦，熔点161，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。检测方法GB/T 5009.192- 食品中兽药残留检验第23页四.抗寄生虫类药品 主要用于驱虫或杀虫，而惯用苯并咪唑类抗寄生虫药品有丙硫苯咪唑、丙氧咪唑、噻苯咪唑、甲苯咪唑、丁苯咪唑等。食用残留有苯并咪唑类药品动物性食品，对人主

16、要潜在危害是致畸作用和致突变作用。对于妊娠期孕妇有可能发生胎儿畸形，如短肢、兔唇等；对全部消费者来说，可能因为其致突变作用使消费者发生癌变和性染色体畸变，从而其后代有发生畸形危险。食品中兽药残留检验第24页五.激素类药品 这类药品主要用于提升动物繁殖和加紧生长发育速度，使用于动物激素有性激素和皮质激素，而以性激素最惯用，如孕酮、睾酮、雌二醇等。正常情况下，动物性食品中天然存在性激素含量是很低，因而不会干扰消费者激素代谢和生理机能。 但摄入性激素残留超标动物性食品，可能会影响消费者正常生理机能，并含有一定致癌性，可能造成儿童早熟、儿童发育异常、儿童异性趋向等。食品中兽药残留检验第25页二.我国出

17、口食品到国外检出问题：90年输欧冻兔肉因农残超标，被拒之门外，致出口量从7万吨锐减至2万吨90年出口日本冻鸡肉，被检出克球酚残留，上万吨货在日本被扣留，国内库存上万吨货不能出口96年因残留监控和防疫体系方面问题，欧盟从当年8月1日起禁止中国全部禽肉进口，直到年5月才对中国开放市场。受其涉及，我国出口到日本冻鸡腿出口价格从 2100/T降到1450/T食品中兽药残留检验第26页三、怎样应对兽药残留 加紧立法，健全兽药使使用方法规中华人民共和国商品检验法、食品卫生法、动物防疫法、兽药管理条例建立健全畜产品质量标准体系和药品残留监控、监测体系建设兽药安全监测信息网络加强药品残留检测工作大力推广绿色畜产品生产技术加大对畜牧业相关行业