微生物的实验室培养

1、课题1微生物的实验室培养专题2微生物的培养与应用2022.01.14【学习目标】1. 通过自主学习和精讲点拨掌握培养基的种类和 成分。2.通过合作探究和精讲点拨掌握无菌操作技术及 常见灭菌、消毒方法。3.通过自主学习掌握固体培养基制备的方法步骤。从社会中来 向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，再经过发酵就可以制成酸奶。 一般家庭自制酸奶可能会导致肠胃不适，主要原因是有杂菌混入。 那么怎么才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？这需要应用无菌技术和微生物的培养技术 微生物的基本培养技术2、实验室培养微生物条件1）提供微生物生长繁殖所需营养和环境条件培养基2）确保其它微生物无法混入无菌

2、技术1、 微生物结构简单、形体微小，眼睛看不到，若想得到 纯净的微生物，就必须对其进行培养和分离。高压蒸汽灭菌一、培养基1、概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。3、类型：固体培养基液体培养基有 无 琼脂分离、计数、鉴定等扩大培养、工业生产2、作用：用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。阅读P14回答长有酵母菌菌落盛有液体培养基（ 提供微生物繁殖所需各种营养， 异养微生物的能源）液体培养基表面生长均匀混浊生长沉淀生长选择培养基:在培养基中加入（缺少）某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长。用以菌种的分离。4.培养基的种类鉴

3、别培养基:在培养基中加入某种指示剂或化学药品。用以菌种的鉴别。 按用途不同划分:例：大肠杆菌伊红和美蓝培养基菌落呈深紫色，并带有金属光泽代谢产物培养基中加氨苄青霉素具有抗氨苄青霉素能力的菌落选择出没有抗氨苄青霉素能力的细菌选择培养基培养基+氨苄青霉素培养基 没有抗氨苄青霉素能力的菌落被淘汰怎样选择出没有抗氨苄青霉素能力的细菌?加入青霉素：加入高浓度食盐：不加氮源：不加含碳有机物：分离出酵母菌、霉菌等真菌(青霉素能杀死细菌、放线菌)分离出金黄色葡萄球菌分离出固氮菌 分离出自养型微生物选择培养基举例？牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。分析营养构成？培养基组分提供的主要营

4、养牛肉膏 5g蛋白胨 10gNacl 5gH2O 定容至1000ml琼脂 20.0g1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方碳源、氮源、磷酸盐和维生素氢元素、氧元素无机盐碳源、氮源和维生素凝固剂4、培养基的营养构成:（1）基本成分：碳源、氮源、水、无机盐1）碳源：无机碳源：CO2、CO32-、HCO3-有机碳源：葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物2）氮源：无机氮源：NH4、NO3-、NH3等有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源3）无机盐：Ca、K 、Mg为大量元素Zn、Cu、Mn、Co、Mo等微量元素凡是能够为微生物提供C、

5、N等元素的营养物质。表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成组分含量提供的主要营养牛肉膏5g碳源、磷酸盐和维生素等蛋白胨10g氮源和维生素等NaCl5g无机盐H2O定容至1000ml水特殊营养物质：维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等（牛肉膏、蛋白胨中含有）（2）还需满足微生物对 pH、特殊营养物质、氧气的需求例如:培养乳酸菌要添加维生素；培养霉菌要调酸性；培养细菌要调至中性或弱碱性 ；培养厌氧菌要提供无氧条件。二、无菌技术泛指在培养微生物的操作中，避免杂菌污染的方法。主要包括消毒和灭菌两个方面：消毒对操作的空间、操作者的衣着和手灭菌培养细菌用的培养基与培养皿玻棒、试管、烧瓶、吸管和接种环等

6、还要注意：避免已经灭菌的材料用具与周围物品接触为了避免周围环境微生物污染，操作应在超净工作台并在酒精灯火焰旁进行。2.无菌范围：实验操作空间消毒操作者的手、衣着消毒实验用具灭菌实验操作过程:酒精灯火焰旁操作超净工作台二、无菌技术泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。防止外来杂菌的污染1.无菌的意义：（主要包括消毒和灭菌）1、消毒使用较为温和的物理、化学或生物等方法，杀死物体表面或内部一部分微生物。（1）概念：（2）消毒的方法：煮沸消毒法： 100煮沸5-6min。巴氏消毒法： 62-65下煮30min 或 80-90下煮30s-1min。 化学药剂消毒法：用70%酒精擦拭双手；氯气

7、消毒水源。 紫外线消毒法：用紫外灯照射接种室、接种箱、超净工作台资料卡常用的消毒和灭菌方法2、灭菌 （1）概念：指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。（2）灭菌的方法： 灼烧灭菌：酒精灯火焰灼烧效果：最彻底 原理：使微生物燃烧 对象：接种工具如接种环、接种针，以及接种过 程中的试管口或瓶口等易被污染部位芽孢 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。 芽孢壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。 孢子细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的无性生殖细胞。能直接发育成新个体。 原理：

8、使微生物细胞膜破坏、蛋白质变性和原生质干燥等 对象：耐高温，需保持干燥的物品，适用于 玻璃器皿 (如试管、培养皿、吸管、注射器) 金属器具 (如针头、 镊子、剪刀等)的灭菌干热灭菌：干热灭菌箱内160-170 下加热1-2h 原理：高温蒸汽破坏蛋白质、核酸等结构使其变性 优点：操作简便，效果可靠，可以杀灭所有的生物，包括最耐热的 某些微生物的休眠体。基本保持培养基的营养成分不被破坏。 对象：培养基等注：使用后的培养基必须灭菌后 才能丢弃，以免污染环境。湿热灭菌：高压蒸汽灭菌锅内100kPa、121 下维持15-30min高压蒸汽灭菌锅2、灭菌 （1）概念：（2）灭菌的方法： 灼烧灭菌干热灭菌湿

9、热灭菌 160-170 下加热2-3h。100kPa、121 下维持15-30min.类型适用范围操作方法消毒灭菌较为温和理化方法，杀死部分微生物（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法日常生活100 煮沸56 min巴氏消毒法不耐高温的液体6265 煮30 min或80-90 煮30s-1 min化学药剂生物活体、水源等擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源紫外线紫外线照射30 min灼烧灭菌接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧干热灭菌耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等物品放入干热灭菌箱,160170

10、 加热23h湿热灭菌培养基、培养皿等,生产和实验室常用高压蒸汽灭菌锅内,100 kPa,温度121 ,1530 min3.无菌的方法：消毒与灭菌接种室、接种箱，超净工作台【例3】关于灭菌和消毒的下列说法不正确的是() A灭菌是指杀死环境中的所有微生物，包括芽孢和孢子 B灭菌和消毒实质上是相同的 C接种环用灼烧法灭菌 D常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等课堂练习【例4】培养基、培养皿、接种针、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是()化学消毒灼烧灭菌干热灭菌紫外线消毒高压蒸汽灭菌巴氏消毒法A. B C D微生物实验室培养的基本操作程序1、器具的灭菌2、培养基的配

11、制3、培养基的灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养7、菌种的保存三、实验操作大肠杆菌的纯化培养制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌例如：1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O 定容至1000mlNacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g琼脂 20.0g1.计算：培养基用量依配方计算各成分的用量2.称量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解取纸蛋白胨、NaCl琼脂、搅拌补水定容4.调pH、分装、封口：5.灭菌：6.倒平板：加棉塞、包牛皮纸、橡皮筋勒紧培养基高压蒸汽灭菌，培养皿干热灭菌制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算称量溶化调

12、节pH灭菌倒平板无菌检查计算称量溶化调节pH灭菌倒平板无菌检查12342.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。3.用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约1020mL)倒入培养皿，左手立即盖上皿盖。4.等待平板冷却凝固（约需510min）。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。1.将培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拨出棉塞。倒平板注意事项：温度：50左右操作：在酒精灯火焰附近冷凝后平板倒置防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基7.无菌检查：37的恒温箱中培养12h24h ，无杂菌污染才可用来接种. 培养基灭菌后，需冷却到什么时候，才能用来倒平板？约50为什么这样操作？为什么平板需倒置？酵母菌的纯培养探究-实践分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。1、菌落：2、纯培养：采用平板划线法和稀释涂布平板法将单个微生物分散在固体培养基上，之后得到的单菌落一般是由单个微生物形成的纯培养物。3、原理：微生物群分散或稀释单个细胞单个菌落繁殖方法步骤1、制备培养基1）配制培养基称取去皮马铃薯