农药生测杀菌剂课件

1、 第二章 杀菌剂的毒力测定方法 完整的杀菌剂生物测定技术： 药剂毒力测定、 定性定量分析、 防治效果测定 杀菌剂室内毒力测定与田间药效： 很一致 趋势一致 不一致一致的情况： 多菌灵对由镰刀菌引起的麦类赤霉病和恶苗病。不一致的情况： 多菌灵对同样是由镰刀菌引起的棉枯黄、萎病菌。完全不一致的情况： 室内毒力测定，完全不表现活性 如：嘧啶胺类化合物在室内，以100ug/ml对灰霉病菌孢子没有抑制作用； 300ug/ml对菌丝生长也不能抑制； 1ug/ml的浓度在田间使用时，却能很好的防治灰霉病。新类型的杀菌剂： 影响病菌的致病过程； 影响寄主的抗病性；第一节 杀菌剂的培养基毒力测定1 孢子萌发试验

2、法 以观察供试病菌孢子是否萌发，来判定杀菌剂的毒力大小。 基本方法：将供试药剂以一定方法附着在载玻片上，然后将病菌孢子悬浮液滴在其上（或将药液与病菌孢子悬浮液混合滴于载玻片上），于保湿、定温的条件下保持一定时间，然后镜检观察孢子萌发数量。孢子萌发试验法的注意事项：1 ） 洁净的用具； 载玻片表面必须对供试菌无毒、对孢子萌发无促进作用、并能使液滴扩散一致。2 ） 药剂附着： 混合滴加、先后滴加、精密喷布3 ） 供试菌种 菌种纯、能产生大量孢子、孢子体形大，在显微镜下易观查、 4 ） 孢了悬浮液的配制 尽可能的使供试菌产生大量孢子（培养基、培养条件、培养方法和时间） 单位容积内的孢子数： 5000

3、0个/ml左右，依孢子大小，一般在低倍镜下（接目镜X 10，接物镜X10），每个视野20-30个孢子。 有些孢子较大时还可以适当降低。7）结果统计 不用药的对照处理，理论上的孢子萌发率应为100%，若不为100%，要对药剂处理的孢子萌发率进行校正。 如果对照孢子萌发率在80%以上时： 处理萌发率（%） 校正萌发率=-X100% 对照萌发率（%） 如果对照的孢子萌发率低于80%，应视为试验失败，需重做。2 生长速率测定法 原理：将不同浓度的药液与溶化的培养基混合，制成带毒培养基平面，在平面上接种病原菌，以病原菌生长速度快慢判定药剂毒力大小。生长速率测定法注意事项：1）带毒培养基的制作 应先加药液

4、再加培养基（1：9）；对一些受热易分解的药剂则要待培养基冷却到50度左右时再加入。2）接种病原菌 如果是菌丝接种，打孔制作菌饼时取材要从种菌皿的外缘开始，避免使用中心区的菌丝。 如果是孢子液接种，用接种针蘸取孢子液后，在带药培养基上划一直线。3）结果检查 菌饼接种的结果检查： 测菌落直径，对每个菌落采取十字交叉法测两个直径，以其均数代表菌落大小。 CK菌落直径-处理菌落直径抑制生长率=-X100% CK菌落直径 处理菌落直径-菌饼直径抑制生长率=（1- -）X100% CK菌落直径-菌饼直径 如： 滤纸片附着法 将真菌孢子悬浮液用一定方法附着于滤纸上，使其接触不同浓度的药剂，放在一条件下培养一

5、定时间后，观察菌丝生长情况。 滤纸打孔 干热灭菌（1301h ） 酒精消毒（70-80% 20-30min） 接孢子液 带菌滤纸片入药液浸渍（10min） 置于培养基 （2-3d） 观察有无菌丝产生 4 稀释法 在液体或固体培养基中加入含有一系列浓度的供试药剂，并接种供试菌进行培养，一定时间后，把具有使病菌发育完全停止的最低浓度称之为抗菌力的指标。（此法可用于抗菌素的定量测定，也即效价测定）。 药剂抗菌力也即药剂毒力。6 扩散法 原理：在已接种的培养基上加少量的抗菌物质，使其接触培养基和病原菌，经一定时间培养后，接触部分的周围由于抗菌物质的扩散，而产生抑菌圈（或抑菌带），其大小与药剂浓度有关系

6、，以此来比较杀菌剂的毒力大小。 此法主要用于抗生素的效价测定。农用抗生素的效价 效价是衡量抗生素有效成份和质量好坏的一个指标。 对于一般纯净而稳定的物质，可以用重量或体积来表示它的含量，但抗生素的成品中有效成份的含量不可能达到100%，而且在加工、贮存过程中有效成份还会遭到破坏，为了保证杀菌效果，必须规定抗菌素效能的标准。世界卫生组织（WHO）规定： 以纯净的苄青霉素钠盐的含量作为衡量抗菌素效能的标准，按重量1ug为1个单位。 由于过去在青霉素研究工作中，都是采用的稀释单位，为避免重新换算的麻烦，就决定1个牛津单位相当于0.6ug苄青霉素钠盐所具有的抗菌效能作为1 个国际单位。所以1mg苄青霉

7、素钠盐就相当于1667个国际单位。目前，抗菌素效价的衡量单位可分为两类： 1） 稀释单位： 将1mg抗菌素配成系列稀释液，对某一细菌能抑制其生长的最高稀释度，即为1mg抗菌素所含的单位。 如：1mg抗生素经稀释成一系列浓度后测试，抑制病菌的最高稀释度为3600倍，那么，这个抗菌素的效价就是3600个国际单位。 2） 重量单位 将纯净的抗菌素直接作为抗菌素效能的衡量单位。即按WHO规定1ug相当于1 个单位。 如：纯净的链霉素1mg就可以直接标注成1000个单位。1.2 叶片接种试验 在附着有药剂的作物叶片上接种病原菌，一定时间后观察发病情况，以判断药剂效果。1.3 幼苗接种试验（盆栽试验） 对

8、幼苗经接种、喷布药剂后，一般应将幼苗置于接种箱或适当的保湿器中一定时间，然后才能取出放到有阳光处或温室内观察。2 种子用杀菌剂的效力测定 种子及病菌：从上一年重发病田中采集带病种子。 土壤：用田间土壤装钵 处理：拌种、浸种凉干后播种 效果观察：出苗后对全部播下的种子都要进行调查，包括出苗未出苗的。3 土壤杀菌剂的效力测定 土壤杀菌剂是一类在缓冲作用很大的土壤中表现杀菌效力的杀菌剂。 这个测定必须结合土壤进行。3.1 直接法 将风干的土用8目筛过筛，装入灭菌的玻璃管内，装土厚2.5cm，放入供试菌菌丝或菌核，再装入土2.5cm ，然后注入5ml 供试药剂室温下培养24h后，取出供试菌菌丝或菌核放在培养基上培养，看能否正常生长。3.2 盆栽试验 将灭菌土放入盆钵，再放入先前培养好的菌核，菌核上再覆盖2cm左右的灭菌土，播种施药，看出苗后的发病情况。4 果实杀菌剂的效力测定 主要是果实防腐剂的测定。