黄芩苷的提取和分离纯化

1、黄苓甘的提取和分离纯化姓名：黄 冰 专业：药 化 学号：2111140006黄苓中黄苓甘的提取和精制-、实验目的1掌握从黄苓中提取、精制黄苓昔的原理、方法及操作要点2掌握黄苓昔的结构鉴定原理及方法。二、实验原理0H0HOH 0黄苓昔为一连有葡萄糖醛酸结构的黄酮化合物，具有一定的脂溶性，所以在提取时可以选择一定浓度的乙醇溶液作为提取液。黄苓昔为葡萄糖醛酸甘，具有弱酸性，其可在碱性溶液中 溶解，形成钠盐，在提取液中加酸酸化，使黄苓昔游离析由 利用黄苓昔能溶于碱，不溶于酸的性质使之与酸性杂质分离，进行精制本实验选用了 60%乙醇回流提取，酸沉、碱溶、酸沉的方 法进行精制，并对精制品进行了简单的定性鉴

2、别，没有对照 品，所以没做定量实验。三、实验材料与仪器材料：黄苓干燥根， 硅胶G薄层层析板仪器：UV2550紫外可见分光光度计（日本岛津），Spectrum 100傅立叶红外光谱仪，旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），LXJ- II离心沉淀机（上海医用分析仪器厂），200g摇摆式高速中 药粉碎机，电子天平，循环水式真空泵，抽滤装置，圆底烧瓶（500ml）,水浴锅，冷凝管，索氏提取器，层析缸试齐ij: 2mol/L盐酸，60%乙醇，10%氢氧化钠，乙酸乙酯， 甲醇，甲酸四、实验步骤1黄苓昔的提取将黄苓干燥根粉碎，称取粗粉100g,装入1L的圆底烧瓶， 加入4倍量即400ml的60%乙醇，搅拌均匀，

3、90c回流提取 1h o提取完进行抽滤，将滤渣倒入圆底烧瓶中， 加300ml 60% 乙醇继续回流 30min ,重复上一步再回流 30min。合并3次 滤液，65 c减压浓缩至无醇味，将水液水浴加热到 80 C,用2mol/L的盐酸调 PH至12,保温 30min ,室温静置 12h, 沉淀，2000r/min离心2min ,弃上清，向沉淀中加 10倍水量即700ml,搅拌均匀，力口 10%氢氧化钠调PH至7,静置1h, 2000r/min离心2min ,弃沉淀，将上清液加热至 40 C,搅拌 均匀，加入等体积即700ml的60%乙醇，静置1h,2000r/min 离心2min ,弃沉淀，将

4、上清液水浴加热至80 C,用2mol/L的盐酸调PH至12,保温30min ,室温静置1h,沉淀，离 心，弃上清液，得粗黄苓甘湿重43g o2黄苓昔的精制向粗黄苓昔中加入 7倍水量即300ml,水浴加热至70 C, 10%氢氧化钠调PH至7,完全溶解后，用2mol/L的盐酸调 PH至6,加乙醇至含醇量 70% ,未由现明显沉淀，所以没 过滤，用2mol/L的盐酸调 PH至12, 70 c保温20min ,静 置过夜。次日，沉淀很少，又 80c保温30min ,离心，弃上 清，得精制品，向圆底烧瓶中加入约60倍量甲醇，将精制品装入索氏提取器的滤纸中，加热回流至提取液颜色很浅， 趁热抽滤，滤液减压

5、浓缩一半，冷却，静置，结晶析生，静 置30min ,过滤，甲醇洗涤，得黄苓昔再精制品。用 40倍 量甲醇加热回流溶解，重复上述步骤可得黄苓昔重结晶。3黄苓昔的薄层层析吸附剂：硅胶 G薄层层析板，厚 0.250.3mm展开剂：乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(7: 2: 0.5: 0.5 v/v/v) 样品配成合适浓度的甲醇液，用点样毛细管点样，每点一次要等到干了才能点下次，点样斑点直径不大于2mm o层析缸用展开剂饱和 20min后，将点样板垂直放入层析缸， 上 行展开，展层完毕后，取由，晾干，放在 254nm紫外灯下 观察。4黄苓昔的紫外吸收图谱取少量黄苓昔重结晶样品于50ml容量瓶中，加甲醇溶解至

6、颜色微黄，用紫外分光光度计在200-400nm进行紫外扫描。5黄苓昔的红外吸收图谱精确称取0.100g的澳化钾，压片测红外作为背景， 再精确 称取0.100g的澳化钾，加入极少量样品一起研成细粉， 压片， 测红外吸收图谱。五、实验结果1黄苓甘得率（%户M/M0 x 100%式中：M 一所得黄苓音精品重量M0一提取时用黄苓的重量本实验甲M为0.132g, M0为100g,所以收率为0.132% o2薄层层析3紫外光谱图1 最大吸收波长的牖定由下图可知在200-400nm由下图可知在200-400nm内最大吸收波长为278nm ,与文献中（上图）的标准品的最大吸收波长一致4红外光谱黄苓昔红外图谱3

7、339 cm-1,宽峰：-OH伸缩振动3030 cm-1左右：苯环=CH伸缩振动2900 cm-1： C-H伸缩振动1611、1575、1478、1450cm-1 :苯环骨架振动1736 cm-1 : C=O伸缩振动（葡萄糖醛酸）1667cm-1： C=O伸缩振动（叱喃酮环）1363 cm-1 : C-O伸缩振动1078 cm-1: C-O-C的对称和不对称伸缩振动900690 cm-1多个吸收峰：苯环取代六、讨论1由薄层板上的斑点可以看由虽然得到了一个比较明显的 斑点，结合紫外图谱应该是黄苓昔，但是斑点上方有小淡 斑存在，证明得到的结晶不是很纯。2红外图谱与文献中标准品的图谱大部分吻合，不一

8、致的 原因可能是：黄苓产地不一样；本实验中得到的黄苓昔纯 度不局。3本实验中产率不高，原因可能有：粗粉未浸泡；静置时 间短；调PH时温度控制不好。4黄苓昔在一定温度和湿度下能酶水解成黄苓素及葡萄糖 醛酸。黄苓素分子中具有临三酚羟基，性质不稳定，在空气 中易氧化成醍式结构显绿色。所以在储藏及提取过程中应注意防止黄苓昔的酶解、氧化，以减少有效成分的破坏。5在用酸、碱进行提取纯化黄酮类化合物时，应当注意温 度和碱度都不宜过高，以免破坏黄酮类化合物的母核。酸化 时，酸度也不宜过高，否则酸会与黄酮类化合物生成盐而溶 解。 TOC o 1-5 h z 6黄苓昔在黄苓中以竣酸盐存在 ，可以被溶剂溶生，传统的 提取方法以水做提取溶剂，但是黄苓昔只能微溶于热水，而且，在水煎煮白过程中,引入了大量的水溶性杂质。黄苓昔 为一连有葡萄糖醛酸结构的黄酮化合物，具有一定的脂溶性所以在提取时可以选择一定浓度的乙醇溶液作为提取液，不仅大大增加它的溶生率，并且可以抑制象糅质、蛋白、粘液 等高分子杂质的溶生,便于过滤纯化。文献指由中等浓度 （