志贺菌氏属危害评估报告

1、志贺菌氏属检验标准操作程序与危害评估报告1危害程度分级1.1评估对象及分类等级志贺菌氏属又称痢疾杆菌，可引起人类细菌性痢疾。根据中华人民共和国传染病防治法，由志贺氏菌属引起的传染病列为乙类传染病。在卫生部颁布的人间传染的病原微生物名录中志贺氏菌属被列为第三类病原微生物。1.2生物安全实验室级别要求志贺氏菌属所有的实验活动均应在BSL-2实验室操作。2背景资料2.1 一般生物学特性2.1.1形态与染色特性本属细菌为两侧平行、末端钝圆的短杆菌，2 3umX0.50.7um与其他肠道杆菌相似。 无荚膜，无鞭毛，不形成芽抱，革兰氏阴性，个别菌带有菌毛。2.1.2培养特性需氧或兼性厌氧，但厌氧时生长不很

2、旺盛。对营养要求不高，在普通琼脂培养基上易于 生长。在10c 40r范围内可生长。最适温度为37r左右。最适pH值为7. 2。在固体培 养基上，培养1824小时后.形成圆形、隆起、透明，直径23mm、表面光滑、湿润、 边缘整齐的菌落。2.2在外界环境的稳定性抵抗力较弱，在一般情况下。本属细菌在染菌的衣物中，室温暗处可存活546日。在 泥土中，于室温暗处可存活912日。志贺氏菌经55C加热1小时、或0. 5%石炭酸作用 6小时或1 %石炭酸作用1530分钟即可杀死。2.3致病性志贺氏杆菌是侵入性细菌，只需千个、百个、甚至几个就可能引起疾病发生，与大肠埃 希氏菌不同。后者需要食入大量细菌才会引起中

3、毒。菌体进入体内后侵入空肠粘膜上皮细胞 繁殖，产生外毒素，菌体破坏后产生内毒素作用于肠壁、肠壁粘膜和肠壁植物性神经。2.4传播途径实验室传播途径为经口传播。3志贺氏菌检验程序3.1米样按照采样原则对食品进行采集。3.2增菌称取样品25g加入到装有225ml GN增菌液的500mL三角瓶中，如果是固体食品应用 均质器以800010000转/分打碎1分钟，或用研钵加灭菌砂磨碎。粉状食品用灭菌金属匙 或玻璃棒研磨使其乳化。在36+1C的条件下培养68小时。3.3分离培养用接种环挑取增菌液1环，划线接种于HE平板或S. S琼脂平伴一个，麦康凯琼脂平 板或伊红美兰琼脂平板一个，于361C培养1824小时

4、。志贺氏菌在这些培养基上出现无 色透明不发酵乳糖的菌落。3.4生化试验挑取平板上的可疑菌落；接种三糖铁和半固体培养基各1管。志贺氏菌在三糖铁培养基 中表现为底层产酸、不产气，斜面声碱，不产H2S。无动力，固体管内沿穿刺线生长。3.5血清学试验挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。先用四种志贺氏菌多价血清检查。4可能造成实验室感染的因素与防范措施4.1实验样品的前处理4.1.1分类针对目前实验室实际工作情况，根据被检样品的污染程度，可分为高污染样品和低污 染样品。4.1.1.1高污染样品通过流行病学调查证明为疑似的食品样品。志贺氏菌属纯培养物或冻干种、质控、鉴定样品。4.1.1.2低污染样品

5、委托检验食品样品。可能受污染的水样和环境。4.1.2可能造成实验室感染的因素待检样品的取样、增菌培养、分离等操作均可污染实验室，对实验人员造成感染。4.1.3采取措施高污染样品操作可借助生物安全柜等防止气溶胶的污染。注意安全防护，准备好消毒剂，随时准备对溅出物等进行消毒处理。4.2接种培养在细菌传代等实验活动中需要接种培养。在此活动中试管开封、样品接种、吸管移取、 混合等步骤可能产生气溶胶。大量培养物的溅出、泼洒和容器的破碎等因素可能造成工作台 面污染，拟采取防护措施包括：4.2.1在工作台面应当放置一块浸有消毒液的布或吸有消毒液的纸，使用后将其高压灭菌， 避免感染性物质的扩散。4.2.2为了

6、避免转移物质洒落，微生物接种环应完全封闭，手柄的长度应小于6cm以减小振 动。4.2.3用封闭式微型电加热器消毒接种环能够避免在酒精灯的明火上加热所引起的感染性物 质暴溅，最好使用不需要进行消毒的一次性接种环。4.2.4样品容器尽可能使用塑料制品，样品容器应当坚固。正确地用盖子或盖子盖好后应无 泄露。在容器外部不能有泄漏物。4.2.5在实验过程中所有样品都应妥善放置，尽可能保持直立，防止倾倒。4.3实验仪器实验过程中涉及的所有仪器设备表面可能受污染，每次操作完毕均应做相应的消毒处 理。例如生物安全柜，遇突然停电等情况，应马上停止实验拉下前挡风板至少两小时。打开 紫外灯消毒至少30分钟。打开前挡

7、风板，用适当消毒剂对工作台面、侧壁及后壁进行消毒 处理后才能正常使用。4.4培养物与实验室废弃物处置实验后所有相关的培养物及实验相关物品，应在操作结束后经高压灭菌后统一按医疗垃 圾处理。4.5室内空气、实验用品以及操作台面污染所有实验操作过程中若有易形成气溶胶的操作，需针对所有操作空间用紫外灯消毒。必 要时对实验用品和操作台面消毒。5工作人员素质实验室人员必须熟悉相关生物安全知识，经过生物安全培训，才能上岗。6评估结论6.1各种实验活动的防护措施实验时，未经实验室主任同意，限制或禁止进入实验室。凡涉及到活的沙门氏菌属的操作都应在生物安全等级BSL-2实验室内操作。对于高污染样本，操作时应按生物安全二级实验室防护级别进行个人防护。不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。所有的操作过程应尽量细心，避免产生和溅出气溶胶。打碎的器皿不能直接用手处理，必须用其它工具处理，如刷子、夹子或镊子等。为了确保安全，实验过程中产生的废液和使用过的耗材等必须经高压处理后才允许出实 验室进行集中处理。6.2感染控制和医疗检测对于实验室人员应进行定期的培训和健康检查，以确保安全的实验室环境和工作人员的 身体健康。对已知暴露和出现感染症状的实验室工作人员，应立即隔离，立即治疗，服用针对性的 抗生素，症状严重者应先