Thermo 分支杆菌药敏检测操作细节

1、ThermoFisher Scientific分支杆菌药敏检测细节介绍目录分枝杆菌药敏MIC板条介绍 -结核分枝杆菌药敏板 -速生长分枝杆菌药敏板 -慢生长分枝杆菌药敏板板条操作流程与注意细节结果判读与解释报告结核与非结核分枝杆菌药敏检测结核分枝杆菌MIC药敏板条快速生长分枝杆菌MIC药敏板慢生长分枝杆菌MIC药敏板结核与非结核分枝杆菌MIC药敏检测名称药敏检测对象特点结核分枝杆菌MIC药敏板结核分枝杆菌4种一线药，8种二线药每种药各有7-8个浓度最快10天就能出结果慢速生长分枝杆菌MIC药敏板缓慢生长的非结核分枝杆菌13种药每种药各有7-8个浓度7-14天出结果快速生长分枝杆菌MIC药敏板快

2、速生长的分枝杆菌、诺卡氏菌、需氧放线菌15种药每种药各有7-8个浓度2-5天出结果Sensititre结核分枝杆菌MIC药敏检测板（MYCOTBI）包括一线和二线药物（12种）一线药物链霉素,异烟肼, 乙胺丁醇, 利福平二线药物氧氟沙星，莫西沙星，阿米卡星，利福布汀，对氨基水杨酸，乙硫异烟胺，环丝氨酸，卡那霉素真实的MIC检测Sensititre结核分枝杆菌MIC药敏检测板（MYCOTBI）OFLMXFRIFAMISTRRFBPASETHCYCINHKANEMB32816163216644025644032OFLMXFRIFAMISTRRFBPASETHCYCINHKANEMB16488168

3、322012822016OFLMXFRIFAMISTRRFBPASETHCYCINHKANEMB8244841610641108OFLMXFRIFAMISTRRFBPASETHCYCINHKANEMB41224285320.554OFLMXFRIFAMISTRRFBPASETHCYCINHKANEMB20.5112142.5160.252.52OFLMXFRIFAMISTRRFBPASETHCYCINHKANEMB10.250.50.510.521.280.121.21OFLMXFRIFAMISTRRFBPASETHCYCINHKANEMB0.50.120.250.250.50.2510.64

4、0.060.60.5OFLMXFRIFAMISTRRFBPASETHCYCINHPOSPOS0.250.060.120.120.250.120.50.320.03CONCON抗生素OFL氧氟沙星MXF莫西沙星RIF利福平AMI阿米卡星STR链霉素RFB利福布汀PAS对氨基水杨酸ETH乙硫异烟胺CYC环丝氨酸INH异烟肼KAN卡那霉素POS阳性对照EMB乙胺丁醇快速生长分枝杆菌的MIC药敏测试 RAPMYCO：适用于偶发分枝杆菌群（偶发分枝杆菌、外来分枝杆菌和偶发分枝杆菌第三生物变种）、龟分枝杆菌、脓肿分支杆菌、产粘液分枝杆菌和耻垢分枝杆菌群（耻垢分枝杆菌、顾德分支杆菌和沃林斯基分枝杆菌）、诺卡

5、氏菌属和其它有氧放线菌药敏检测生长时间7天Amikacin阿米卡星1-64Amoxicillin / clavulanic acid阿莫西林/克拉维酸2/1-64/32Cefepime头孢吡肟1-32Cefoxitin头孢西丁4-128Ceftriaxone头孢曲松4-64Ciprofloxacin环丙沙星0.12-4Clarithromycin克拉霉素0.03-16Doxycycline强力霉素0.12-16Imipenem亚胺培南2-64Linezolid利奈唑胺1-32Minocycline米诺环素1-8Moxifloxacin莫西沙星0.25-8Tigecycline替加环素0.015

6、-4Tobramycin妥布霉素1-16Trimethoprim / sulfamethoxazole甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲恶唑0.25/4.75-8/152快速生长的分枝杆菌MIC药敏板15种抗生素，适用于快生长分枝杆菌、诺卡氏菌、需氧放线菌，如M. fortuitum group 偶然分枝杆菌群M. chelonae/abscessus group 龟/脓肿分枝杆菌群M. smegmatis group 耻垢分枝杆菌群Amikacin阿米卡星1 - 64Ciprofloxacin环丙沙星0.12-16Clarithromycin克拉霉素0.06 - 64Doxycycline强力霉素0.12

7、 - 16Ethambutol乙胺丁醇0.5-16Ethionamide乙硫异烟胺0.3 - 20Isoniazid异烟井0.25-8Linezolid利奈唑胺1 - 64Moxifloxacin莫西沙星0.12 - 8Rifampin利福布汀0.12 - 8Rifabutin 利福平0.25 - 8Streptomycin链霉素0.5 - 64Trimethoprim / sulfamethoxazole甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲恶唑0.12/2.38 - 8/152缓慢生长分枝杆菌MIC药敏板13种抗生素，适用于慢生长分枝杆菌，如M. marinum 海洋分枝杆菌M. kansasii 堪萨斯分

8、枝杆菌M. avium complex (MAC) 鸟分枝杆菌复合群Sensititre分枝杆菌药敏分析系统样品制备菌液比浊菌液接种结果判读Viewer手工判读系统Vizion自动微生物药敏分析系统结核分枝杆菌药敏MIC测试带玻璃珠的吐温盐水 1、配置菌悬液（固体培养基上培养的菌株）：0.5 McFarland 2、漩涡震荡器混悬1-2分钟 3、取100 uL 到肉汤中。肉汤(Middlebrook 7H9 with OADC) 1、混匀1-2分钟 2、药敏板每孔加入100 uL 菌液 3、封膜 4、 35-37 0C 孵育10天，观察结果；如有必要再次孵育11天。注意事项选取的结核分枝杆菌落

9、菌龄不能超过5周。菌悬液要充分静置后才能进行浊度测试。可选取两支盐水管，一只配制较高浓度菌悬液后，充分静置后取上部悬液于另一盐水管配制菌悬液。为保证板卡封膜效果，可在板卡四周使用透明胶带加固封膜效果接种剩余的菌悬液需接种到血平板上进行培养，以排除污染存在。定期应进行阳性对照孔中接种物菌液浓度检查板卡堆叠不能超过2块。快分枝MIC药敏测试操作无菌去离子水 1、配置菌悬液（固体培养基上培养的菌株）：0.5 McFarland 2、充分漩涡震荡 3、取50 uL 到肉汤中。肉汤(Mueller Hinton with TES) 1、混匀1-2分钟 2、药敏板每孔加入100 uL 菌液 3、封膜 4、

10、培养： 快速生长型分枝杆菌-在非 CO2 培养箱 -30- 72 小时(如生长不佳，则继续培养48h后看结果) 诺卡氏菌,有氧放线菌-在非 CO2 培养箱 -35C - 23 天 无菌去离子水 1、配置菌悬液（固体培养基上培养的菌株）：0.5 McFarland 2、充分漩涡震荡 3、取50 uL 到肉汤中。肉汤(Mueller Hinton with 5% v/v OADC) 1、混匀1-2分钟 2、药敏板每孔加入100 uL 菌液 3、封膜 4、非CO2 孵箱，35下培养7天后开始读取结果，如果阳性对照生长情况良好，读取结果。否则，重新培养最多14 天。 慢分枝MIC药敏检测注意事项放线菌

11、通常为具有坚硬外壳的菌落。可能有必要与玻璃珠一起进行涡旋振荡，以获取均一悬液。如果涡旋震荡后依然残存大的团块，应当使其沉降，并取上清配制悬液。如使用含有吐温的水可能会对 MIC 造成影响。含有 32g/ml多西环素或米诺环素的药敏板孔位可能会在培养后出现沉淀。可以在添加肉汤前加入 5l 无菌蒸馏水进行复溶，避免沉淀出现。CLSI 建议将无色素、快速生长型分枝杆菌培养 14 天，确保可以检测出诱导的大环内酯类抗生素耐药性，除非在较早阶段已表现出此种耐药性。定期应进行阳性对照孔中接种物菌液浓度检查板卡堆叠不能超过3块注意事项延长培养时间可能需要采取相应措施以避免每个微孔内容物因挥发而造成损失。将平

12、板置于顶部半开的塑料容器中，以促进气体交换。结果判读判读时应首先读取阳性生长对照孔。如果在阳性生长对照孔中未出现生长，则结果无效。在判读结核分枝杆菌异烟肼，利福平，莫西沙星，氧氟沙星，环丝氨酸，阿米卡星和卡那霉素药敏结果时，其MIC值时为该抗生素生长明显抑制，完全无生长迹象的最低抗生素浓度。而在判读链霉素，乙硫异烟胺，对氨基水杨酸，利福布汀和乙胺丁醇时，其MIC值为该抗生素生长受到约80%抑制的最低抗生素浓度。在判读非结核分枝杆菌药敏结果时，除磺胺类药物之外，MIC值是指完全抑制生长的最小浓度，而磺胺类药物MIC值是能够抑制80%生长的最低浓度。利奈唑胺可能会出现拖尾生长，其最低抑菌浓度为开始

13、拖尾的第一个浓度。结果的判读阳性对照孔至少是2+才能开始记录MIC值疑问如果检测菌株阳性对照孔超过最大孵育天数（快分枝5天，结核，慢分枝21天）而不能生长，该如何处理？如果无法生长，应报告不能在可接受的时间内生长和/或重复测试或采用其他方法。个别脓肿分枝杆菌复合群分离株在肉汤中生长非常缓慢，对于这些分离培养株培养长达14天是必须的，但是，由于抗菌药物的不稳定性，这种情况只有克拉霉素和阿米卡星可以报告结果，且需要添加相应的注释。（来源于行业领域内专家的说明） 快分枝和奴卡复方新诺明应读取80%抑制利奈唑胺的拖尾生长结核分枝杆菌图中的1、2、3列为100%抑制图示，5,6,7列为80%抑制图示跳孔

14、造成跳孔可能的原因：菌液不均匀，检测板叠放过多导致的温度不均匀，一些难生长菌生长不良容易导致跳孔（耐药菌）结果解释-快速生长NTM药敏板抗生素速生型分枝杆菌复合群判读标准（ug/mL）（参考CLSI M24 Table 7）诺卡菌和其他需氧放线菌判读标准（ug/mL）（参考CLSI M24 Table 9）名称缩写SIRSIR莫西沙星MXF124124阿米卡星AMI1632648-16阿莫西林/克拉维酸AUG2待定8/416/832/16头孢吡肟FEP待定81632头孢西丁FOX1632-64128待定头孢曲松AXO待定816-3264环丙沙星CIP124124克拉霉素CLA248248强力霉

15、素（多西环素）DOX12-4812-48亚胺培南IMI48-16324816利奈唑胺LZD816328-米诺环素MIN待定12-48替加环素TGC待定待定妥布霉素TOB2484816甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲恶唑SXT2/384/762/38-4/76结果解释-M.kansasii结果解释-MAC结果解释-除MAC和M.kansasii之外的慢分枝结果解释-慢生长NTM药敏板抗生素鸟分枝杆菌复合群判读标准（ug/mL）（参考CLSI M62 Table 3）堪萨斯分枝杆菌判读标准（ug/mL）（参考CLSI M62 Table 4）其余的慢生长分枝杆菌判读标准（ug/mL）（参考CLSI M62 T

16、able 5）抗生素缩写SIRSIR提示海分枝杆菌耐药MIC（ug/mL）利福平RIF待定1212异烟肼INH待定待定待定链霉素STR待定待定待定乙胺丁醇EMB待定待定待定莫西沙星MXF124124124利福布汀RFB待定2-42-4阿米卡星(IV)AMI163264163264163264阿米卡星(liposomal,inhaled)AMI64128163264163264乙硫异酰胺ETH待定待定待定环丙沙星CIP待定124124克拉霉素CLA816328163281632强力霉素（多西环素）DOX待定12-4812-48甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲恶唑SXT待定2/38-4/762/38-4/76利奈唑