分子生物学检验技术基本知识点

1、分子生物学基本知识点 一、填充题1、质粒按功能分类有F质粒、R质粒和Col质粒。2、基因病分为单基因病和多基因病。3、分子杂交反应主要由预杂交、杂交和洗脱三个步骤组成。4、临床基因扩增检验实验室必须包括四个工作区域试剂贮存和准备区；标本制备区；扩增反应区；产物分析区。5、肿瘤发生分三个阶段：启动阶段、促癌阶段和转化阶段。6、生物芯片技术是根据生物分子之间特异性相互作用的原理，如DNA-DNA、DNA-RNA、抗 原-抗体、受体-配体之间可以发生的复性与特异性结合，设计其中的一方为探针。7、核酸分子杂交技术按杂交探针标记的不同可以分为同位素杂交和非同位素杂交。8、PCR反应中，模板包括基因组DN

2、A、RNA、质粒DNA和线粒体DNA。9、DNA芯片技术可应用于基因诊断、DNA序列测序、临床药物筛选以及其它领域。10、质粒提取方法主要有碱裂解法、煮沸裂解法、SDS裂解法和其它方法。11、PCR反应中的dNTP指的是dATP、dCTP、dGTP和dTTP四种脱氧核苷三磷酸。12、在试管中进行的DNA复制过程称为PCR，其反应基本过程有变性、退火（杂交）和延 伸。DNA双螺旋的氢键断裂是在变性步骤中。13、基因重组中用来识别和切割双链DNA分子中特定核甘酸序列的酶是限制性内切酶，若 产生的缺口错开突出，称为粘末端。若产生的缺口不错开，称为平末端。14、国家级的蛋白质数据库有蛋白质序列数据库、

3、蛋白质结构数据库、蛋白质直系同源簇数 据库和DIP数据库。15、转位的遗传效应是基因重排、引起突变和引人新的基因。16、根据杂交核酸分子的种类，可以将核酸分子杂交分为DNA与DNA杂交，DNA与RNA 杂交和RNA与RNA杂交。17、常用的DNA重组载体有：质粒载体、噬菌体载体、穿梭载体和人工染色体。18、基因工程中，平末端连接法主要有平接法、同聚体加尾法和人工接头法三种方法。19、聚合酶链反应条件主要是温度、时间和循环次数。20、在生物芯片技术中，依据芯片上固定的探针类型分为DNA芯片、蛋白质芯片、细胞芯 片和组织芯片等。21、核酸探针的种类有DNA探针、RNA探针和寡核甘酸探针。22、核酸

4、探针标记方法主要有同位素标记和非同位素标记。23、在真核生物结构基因中，编码序列与非编码序列呈间隔排列。前者称为外显子，后者称 为内含子。24、PCR实验系统中的污染主要有扩增片段的污染（产物污染）、试剂污染和标本间的交叉 污染。25、基因表达包括转录和翻译两个过程。26、DNA重组技术中常用的DNA聚合酶有DNA聚合酶I、Taq DNA聚合酶、逆转录酶和T4 末端转移酶。27、以RNA为模板的PCR反应被称为逆转录PCR。28、细胞调亡又称为细胞程序性死亡，具有特殊的生物学意义。29、转位因子包括插入序列、转座子、可转座的噬菌体。二、选择题1、没有功能的基因是（）。（A）假基因（B）重复序列

5、（C）多基因家族（D）重叠基因2、PCR反应中，变性温度一般定在（）。（A） 95-97（B）40-70（C）72（D）363、凋亡小体出现在（）。（A）细胞坏死中（B）程序性死亡中（C）细胞变性中（D）超敏反应中4、SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳可应用在（）。（A）蛋白质分析（B）DNA分析（C）RNA基因分析（D）糖分析5、异硫氰酸钾一酚氯仿一步法是提取（）的方法。（A）DNA （B）RNA（C）蛋白质（D）cDNA6、DNA重组中使用的质粒大多为（）。（A）严紧型质粒（B）松驰型质粒（C）抗药性质粒（D）F质粒7、细胞调亡是一种（）现象。（A）细胞坏死（B）细胞程序性死亡（C）炎性反应（D）

6、超敏反应8、人的体细胞具有46条染色体，属于（）。（A）单倍体（B）二倍体（。三倍体（D）二价体9、PCR反应的引物需要（）。（A）1 条（B）2 条（C）3 条（D）4 条10、原位杂交在（）进行。（A）滤膜的DNA上（B）凝胶的DNA上（C）试管中的DNA上（D）细胞的核酸上 11、研究蛋白质组学是属于（）。（A）生命计划（B）人类基因组计划（C）后基因组计划（D）基因工程计划12、真核细胞基因组的结构基因是断裂基因，它含有（）。（A）内含子（B）操纵子（C）复制子（D）重组子13、第一个建立的人工染色体是（）。（A）细菌人工染色体（B）噬菌体人工染色体（C）酵母人工染色体（D）哺乳动物人

7、工染色体14、核酸分子杂交依据杂交介质的不同，可以分为液相杂交，固相杂交和（）。（A）原位杂交（B）菌落杂交（C）点与狭缝杂交（D）同位素杂交15、变性梯度凝胶电泳可应用在（）。（A）蛋白质分析（B）DNA分析（C）RNA分析（D）糖类分析16、下列几种实验方法中，哪种方法不是DNA序列测定方法（）。6）双脱氧链终止法（B）化学降解法（C）杂交法（D）平端连接法17、RNA分析应使用（）杂交方法。（A）Southern 印迹（B）Northern 印迹（C）Western E印迹（D）Eastern 印迹18、以下哪种现象不是属于细胞程序性死亡（）。（A）皮肤分为真皮与表皮（B）血细胞的死去与

8、再生（C）指（趾）甲的形成（D）细胞坏死19、法医学中亲子鉴定应用（）。（A）HLA单倍体分析（B）STR单倍型分析（C）单核甘酸多态性分析（D）免疫印迹分析20、以下哪种方法又称为免疫印迹（）。（A）Southern 印迹（B）Northern 印迹（C）Western E印迹（D）Eastern 印迹21、以下哪种疾病和细胞凋亡无主要关系（）。（A）血友病（B）肿瘤（C）系统性红斑狼疮（D）老年性痴呆22、理想的质粒载体应具有（）抗菌素抗性标志。（A） 1 种（B）2 种（C）3 种（D）4 种23、DNA测序中，酶法指的是（）。6）双脱氧链终止法（B）化学降解法（C）酶切法（D）酶解法2

9、4、基因工程中，将不同来源的DNA分子进行特异地切割使用的是（）。（A）DNA聚合酶（B）逆转录酶（C）连接酶（D）限制性内切酶25、双脱氧核甘酸末端终止法指的是（）。（A）酶法（B）酶切法（C）酶解法（D）化学降解法26、构建cDNA时使用的酶是（）。（A）限制性内切酶（B）DNA聚合酶（C）逆转录酶（D）连接酶27、真核生物基因组与原核生物基因组的区别是前者基因中一般具有（）。（A）操纵子（B）复制子（C）内含子（D）重组子28、原核生物基因组与真核生物基因组的区别是前者基因组中具有（）。（A）操纵子（B）复制子（C）内含子（D）重组子30、PCR反应中，链的延伸温度一般定在（）。（A）9

10、5-97（B）40-70（C）72（D）3631、隐性癌基因一般指的是（）。（A）细胞癌基因（B）病毒癌基因（C）原癌基因（D）抑癌基因三、简答题1、以PCR为基础的相关技术有哪些？逆转录PCR、定量PCR、多重PCR、免疫PCR、差异显示PCR、PCR诱导定点突变、原位PCR。2、核酸分子杂交的类型有哪些？根据杂交核酸分子分为DNA与DNA、DNA与RNA、RNA与RNA杂交；根据探针标记分为同 位素与非同位素杂交；根据杂交介质分为液相杂交、固相杂交、原位杂交。3、简述PCR实验系统中的主要污染。PCR实验系统中的污染主要有扩增片段的污染（产物污染）、试剂污染和标本间的交叉污染，其中污染的最

11、主要来源是扩增产物的污染。4、DNA重组的工具酶主要有哪些？限制性内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、T4多核甘酸海激酶、碱性磷酸酶。5、核酸探针主要有哪些种类？DNA探针、RNA探针、寡核甘酸探针。6、基因组DNA分离纯化的方法有几类？酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻棒缠绕法、其它方法，如异丙醇沉淀法。7、什么是蛋白质芯片技术？通过机械点涂的方法，将多肽或蛋白质高密度点阵并固定在载体表面，与标记的配体进行杂 交，根据杂交信号的有无、多少进行定性与定量分析方法称为蛋白质芯片技术。8、PCR反应体系的主要成分包括哪些？参与PCR反应的成份主要是模板、引物、dNTP、Taq DNA聚合酶和缓冲液等。9、

12、杂交反应的主要步骤有哪些？包括预杂交、杂交、洗脱三个步骤10、限制性内切酶的主要用途是什么？（1）改造和组建质粒；（2）组建基因组DNA物理图谱；（3）基因组DNA同源性研究；（4） DNA重组克隆及亚克隆；（5）DNA杂交与序列分析。11、蛋白质分离纯化的一般程序是什么？蛋白质的种类、性质、所处体系以及蛋白质分离纯化的目的不同，因此不可能有一个固定的 程序适用于各种蛋白质的分离工作。蛋白质的分离纯化程序一般包括前处理、粗分离、细分 离三个步骤。12、理想的质粒载体一般具备的特点？具有松弛型复制子；在复制子外存在几个单一的酶切位点，以便目的DNA片段插入； 具有插入失活的筛选标记，理想的质粒载

13、体应具有两种抗菌素抗性标志；分子量相对较 小但有较高的拷贝数。13、简述DNA重组的主要内容目的DNA片段与载体被限制性内切酶切割并相互连接成DNA重组体，重组体转入宿主细胞 复制及表达，重组子的筛选与鉴定。14、目前常用的DNA重组载体主要有几类？质粒载体、噬菌体载体、穿梭载体、人工染色体15、简述防止RNase对RNA水解的原则。一要避免细胞外RNase的污染并抑制其活性，二要尽快地抑制细胞内RNase的活性并极力 地去除RNase。16、PCR反应的引物设计必须遵循哪些原则？（1）用于PCR反应的引物需要二条，分别设在被扩增目标片段的二端，并分别与模板正负 链序列互补。（2）引物的长度一

14、般以18-25个核甘酸为宜。（3）二条引物之间（尤其在3, 端）的序列不可有互补，以免形成引物二聚体。（4）引物的碱基组成应平衡，避免出现嘌吟、 嘧啶碱基堆积。（5） PCR扩增中的退火温度是要根据引物的Tm值而决定的，二条引物的Tm 值不能差别太大。（6）根据需要，合成引物时在其5,端可以加修饰成分。17、PCR产物的检测技术主要有哪些？（1） PCR-限制性片段长度多态性（2）等位基因特异性寡核甘酸（3）单链构象多态性（4） 变性梯度凝胶电泳（5）融点曲线分析（6） PCR产物的序列分析18、肿瘤发生学说主要内容是什么？肿瘤的发生是由多种致癌因素综合作用的结果。当正常细胞受到物理因素（如紫

15、外线、电离 辐射等）、化学因素（如黄曲霉毒素）以及生物因素（DNA或RNA致癌病毒）等致癌因子作用后， 经多次打击多阶段变化便形成了肿瘤。19、蛋白质分析中盐析法的主要原理是什么？原理是蛋白质在低盐浓度下的溶解度随着盐浓度升高而增加，此时称为盐溶；当盐浓度继续 升高时，蛋白质溶解度又以不同程度下降并先后析出，称为蛋白质的盐析。四、概念题1、癌基因包括病毒癌基因（v-onc）和细胞癌基因（c-onc）两种，具有潜在诱导细胞恶性转化的特征。2、DNA重组不同来源的DNA分子，通过磷酸二酯键链接而重新组合的过程，称为DNA重组。3、逆转录PCR逆转录PCR是以细胞内总RNA或mRNA为材料进行体外扩

16、增的技术。4、核酸分子杂交技术来源不同的单链核酸分子在合适的温度和离子强度下，通过碱基互补形成双链杂交体，这类 技术称作核酸分子杂交技术。5、基因是遗传的基本功能单位，除了编码蛋白质或某些RNA外，还包括为获得一个特异性产物所 必须的相关序列。6、内含子是结构基因中的非编码序列，往往与编码序列呈间隔排列。当基因转录后，在mRNA的成 熟过程中被剪切。7、变性在一定条件下，双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，形成无规则线团，DNA分子成为单链， 这一过程称作变性或融解。8、克隆克隆是指由一个细胞经过无性繁殖以后形成的子代群体。9、限制性内切酶它是一类核酸水解酶，能识别和切割双链DNA分子中的特定核甘

17、酸序列。10、抑癌基因抑癌基因又称抗癌基因（anti-onc），是存在于正常细胞内的一类可抑制细胞生长的基因，并有 潜在抑癌作用。当这类基因发生突变、缺失或失活时，可引起细胞恶性转化而导致肿瘤的发 生。11、基因组是细胞或生物体中一套完整的遗传物质。12、质粒是独立于细菌细胞染色体以外，能自主复制的共价闭合环状DNA分子。13、端粒酶一种可催化寡聚核甘酸单链的末端延长的酶，由于这种酶可催化端粒的延长，因此将它命名 为端粒酶。14、操纵子是指原核生物基因组中数个功能上相关联的结构基因串联在一起，构成信息区，连同其上游 的调控区（包括启动基因和操纵基因）以及下游的转录终止信号所构成的基因表达单位。

18、15、融解温度在温度升高引起的DNA变性过程中，DNA的变性会在一个很狭窄的温度范围内发生，这一 温度范围的中点被称作融解温度。16、DNA重组载体载体是携带靶DNA（目的DNA）片段进入宿主细胞进行扩增和表达的运载工具。常用的载 体是通过改造天然的细菌质粒、噬菌体和病毒等构建而成。17、外显子是结构基因中的编码序列，往往被内含子所间隔，当基因转录后，mRNA在成熟过程中切去 内含子，外显子才被拼接成完整的序列，成为成熟的mRNA,作为指导蛋白质合成的模板。 18、重叠基因指同一段DNA序列能编码23种蛋白质多肽链。即编码顺序位于同一段DNA序列中，并 相互重叠。19、核酸杂交将一种核酸单链标

19、记成为探针，再与另一种核酸单链进行碱基互补配对，可以形成异源核酸 分子的双链结构，这一过程称作核酸杂交。20、多重PCR在同一反应体系中加入多对引物，同时扩增一份DNA样品中多个不同序列的靶片段。21、核酶是一类具有酶的催化活性的小RNA分子，在RNA合成后的剪接修饰中具有重要作用。22、复性变性DNA只要消除变性条件，具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链，这一过 程称作复性。23、松弛型质粒其复制不受宿主细胞严格控制的质粒。24、原位杂交是应用核酸探针与组织细胞中的核酸按碱基配对原则进行特异性杂交，然后应用组织化学或 免疫组织化学方法在显微镜下进行细胞内定位或基因表达的检测技术。25、Northern 印迹靶核酸是RNA的印迹杂交。26、间隔区DNA真核生物的基因之间存在着编码空白区或转录的空白区，称之为间隔区DNA。这些序列往 往在单