色谱概论及薄层色谱法课件

1、什么是色谱法色谱分析法简称色谱法(chromatography)是一种物理或物理化学分离分析方法。概 述色谱法的实质是分离1固定相CaCO3颗粒流动相石油醚 样品植物色素色带 色谱法的产生20世纪初，俄国学植物家茨威特研究植物色素时俄国植物学家茨维特流动相石油醚混合色素叶绿素叶黄素胡萝卜素分离组分色谱柱固定相碳酸钙2固定相：在色谱分离中固定不动，对样品产生保留的一相。流动相：带动样品向前移动的另一相，与固定相处于平衡状态。3气液色谱气固色谱气相色谱按流动相和固定相的物态分类色谱法的分类固定相为液体液相色谱流动相为气体流动相为液体固定相为固体液液色谱液固色谱固定相为液体固定相为固体4分离机制分类

2、吸附色谱分配色谱离子交换分子排阻色谱法的分类5慢中等快色谱分离原理色谱过程Temporal course流动相流动相流动相流动相检测器记录仪7分配系数组分在固定相 (s) 与流动相 (m) 中的浓度 (C) 之比。 色谱分离原理分配系数K与分离组分、固定相、流动相的性质以及温度有关K小，先流出色谱柱K大，后流出色谱柱K不同组分的K值差距越大，则越容易分离分配系数是色谱分离的依据。8分离机制：混合物中各组分的吸附能力的差异分离过程：吸附解吸再吸附再解吸无数次洗脱分离液固吸附色谱法吸附剂吸附位点10常用的吸附剂吸附剂氧化铝大孔吸附树脂硅胶聚酰胺11常用的吸附剂硅胶硅胶吸附作用：氢键作用吸附强度：硅

3、醇基数目活化：100左右（除水）OSiOSiOHOOOO硅醇基12分配色谱法分离机制：不同组分溶解度差异流动相载体支持作用（如硅胶）固定液（固定相）正相色谱：流动相极性固定相极性反相色谱：流动相极性固定相极性14分离机制：依据被测组分与离子交换剂交换能力(亲和力)不同可再生1.固定离子；2.可交换离子m21离子交换色谱阳离子交换色谱示意图树脂骨架15柱色谱的操作程序（1）装柱（2）加样（3）洗脱17柱色谱机制固定相流动相适用于吸附柱色谱分配色谱离子交换色谱凝胶色谱不同柱色谱小结吸附能力不同溶解能力不同交换能力不同分子大小不同吸附剂（硅胶，聚酰胺）固定液交换基团分子筛（葡聚糖凝胶）有机溶剂，混合

4、溶剂有机溶剂，混合溶剂水，酸或碱溶液有机溶剂，混合溶剂有机化合物（酚，皂苷，黄酮等）极性化合物离子化合物或能产生离子化合物蛋白质，大分子化合物18课堂练习A液-液分配色谱 B. 吸附色谱 C空间排阻色谱 D. 离子交换色谱4.利用混合物中不同组分的分子量大小实现分离（ ）5.利用混合物中不同组分在两相溶剂中溶解度不同来达到分离目（ ）6.利用混合物中不同组分在固定相上吸附能力的不同进行分离（ ）7.分离对象是离子化合物或在一定条件下能产生离子的化合物的色谱为（ ） CABD19平面色谱法薄层色谱20薄层吸附色谱流动相（展开剂）起始线溶剂前沿分离机制：混合物中各组分的吸附能力的差异，K不同分离过

5、程：吸附解吸再吸附再解吸无数次洗脱分离固定相：硅胶流动相：有机溶剂原点21一 基本原理最佳范围：0.30.5可用范围：0.20.822K值大的组分Rf值小K值小的组分Rf至大KRf当实验条件一定，同一展开系统K相等的物质Rf相等24常用的吸附剂硅胶硅胶CMC硅胶G硅胶H硅胶GF254含有煅石膏（粘合剂）含有羧甲基纤维素含有能够在254nm下产生荧光的荧光剂不含黏合剂25化合物A在薄层板上从原点迁移7.6cm,溶剂前沿距原点16.2cm。计算化合物A的Rf ？在相同的薄层系统，溶剂前沿距原点14.3cm,化合物A的斑点应在此薄层板上何处？练习题27薄层操作技术1.薄层色谱操作程序？2.硬板采用什

6、么方法铺制？3.点样前样品怎样处理？4.点样采用什么工具？采用点样量越多越好吗？5.展开在什么容器中进行？6.展开操作应注意哪些问题？7.显色方法有几种？8.显色剂都有哪些？28三 操作技术铺板点样展开显色29薄层-全自动点样仪样品薄层板点样针30vvvv展开操作应注意的问题231检查层析缸密闭性展开前先饱和，防止边缘效应展开时，注意展开剂不要浸到点样线vvvv31观察物理检出法化学显色法日光灯硫酸紫外灯(365或254nm)荧光板上在紫外灯下观察暗斑碘茚三酮FeCl3通用显色剂专属显色剂32同步测试1. 甲乙两化合物，经用一薄层色谱系统展开后，它们的Rf值相同，则甲乙两者为（ ）。A是同一物

7、质 B. 可能为同一物质 C. 不是同一物质 D. 无法确定2. 制备薄层色谱中常用粘合剂有（ ）A CMC-Na B. 高锰酸钾 C氢氧化钠 C. 硫酸钾3.对Rf值影响不大的因素（ ）A物质的极性 B.展开剂的种类C吸附剂的种类 D.薄层板的厚度BAD33A三氯化铁 B.硫酸 C.茚三酮 D.碘化铋钾11.属于通用型显示剂的是（ ）12.用于检测含有酚羟基化合物的显色剂（ ）13.用于检测氨基酸类化合物的显示剂（ ）有关薄层操作方法以下说法正确的是（ ）A展开之前将斑点晾干 B. 展开之前进行饱和C展开后记录溶剂前沿 D. 制备好薄层板后降其活化BACABCD34薄层色谱法的应用化工农业临

8、床医药食品环境35薄层色谱法在药物检验中的应用定性分析杂质检查定量分析比较比移值和斑点颜色主成分自身对照法杂质比较法直接法洗脱测定法36人参叶的鉴别中国药典2010年版检测条件：365nm37 1 2 3 4 5 6甘草薄层指纹图像在种类鉴别中的应用（UV365nm）1，2：光果甘草；3，4：胀果甘草；5，6：乌拉尔甘草定性分析38洗脱定量法 直接测定法 薄层色谱法 色谱定量比色法分光光度法目测法测面积法测定速度快准确度高仪器复杂39供试品 例如：枸橼酸乙胺嗪中N-甲基哌嗪的检查选用实际存在的待检杂质对照品法杂质检查N-甲基哌嗪40纸色谱法滤纸+水有机溶剂固定相：水 流动相：有机溶剂 分离机制41同步测试1硅胶吸水量越高，分离效果越好 2. 所有的薄层色谱都需要显色 3. Rf只与化合物自身性质有关，与吸附剂的种类和活度，展开剂的极性等无关4. 定性鉴别主要依靠Rf值的测定 5. 薄层点样量越大越好6.薄层色谱法的操作一般在室温条件下进行判断