黑龙江医药卫生职业学校-药学专业-天然药物化学实验课件

1、实验一 槐米中芦丁的提取工艺一、实验目的 通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化 合物的原理及操作。 通过芦丁的检识，了解黄酮类化合物定性研究的 一般程序和方法。 二、实验原理 对酸性、碱性或两性化合物，可加入酸或碱以调节溶液的PH值，改变分子的存在状态（游离型或离解型），从而改变溶解度而实现分离。包括酸/碱法、碱/酸法。 一些酚酸性类物质如黄酮、蒽醌类等用碱性水从药材中提出后，加酸调至酸性，酚酸性成分可以从水中析出。（碱/酸法）三、实验仪器与实验材料 1、实验仪器 玻璃棒 布氏漏斗 滤纸 电子天平 电热套 烧杯 2、实验材料 槐花米 石灰乳 硼砂 盐酸 水 PH试纸芦丁的提取与分离流程

2、图五、实验指导 1本实验讲解要点及注意事项 芦丁提取方法，重点介绍碱-酸法的原理及注意事项。 调温电热套使用说明： 使用方法：接通电源，电源指示灯亮，然后打开调压旋钮开关，调节使用中，加热套功率随着调节方位的变动，产生不同的功率，工作电压表也随着显示不同的示数。顺时针调节会逐步增大功率，增加使用温度，否则反之。2实验报告要求 槐米药材的鉴定和前处理方法。 碱-酸法提取芦丁的原理及提取工艺流程。3思考题 中药材的前处理一般分为哪几个程序？ 在芦丁提取工艺中，为什么加石灰水而不是加氢氧化钾？ 在芦丁提取工艺中，为什么要加入硼砂水溶液？六、 参考书1. 吴立军主编天然药物化学（第五版），人民卫生出版

3、社，2007年2. 梁敬钰主编天然药物化学实验与指导，中国医药科技出版社，2003年3. 蔡少青主编生药学（第五版），人民卫生出版社，2007年4. 崔福德主编药剂学（第六版），人民卫生出版社，2007年一、实验目的 学习应用旋转蒸发仪浓缩提取液的原理及操作。 学习应用水域锅干燥药物浓缩液的基本操作。二、实验原理 1. 蒸发浓缩可在沸点或低于沸点时进行，又可在减压或常压下进行，为提高蒸发效率，生产上蒸发浓缩均采用沸腾蒸发。 2. 干燥过程分成两阶段，恒速阶段和降速阶段。在恒速阶段，干燥速率与物料湿含量无关；而在降速阶段，干燥速率近似地与物料湿含量成正比。四、试验方法 1、槐米药材提取液的减压浓

4、缩工艺流程，采用旋转蒸发仪对提取液进行浓缩。 2、槐米药材浓缩液的常压干燥工艺流程，选用水浴锅对浓缩液进行干燥。五、实验指导 1本实验讲解要点及注意事项 旋转蒸发仪的基本操作方法： 1） 用胶管与冷凝水龙头连接，用真空胶管与真空泵相联。 2） 先将水注入加热槽。最好用纯水，自来水要放置1-2天再用。 3） 调正主机角度：只要松开主机和立柱连结螺钉。主机即可在0-45度之间任意倾斜。 4） 接通冷凝水，接通电源220V/50Hz，与主机连接上蒸发瓶（不要放手），打开真空泵使之达一定真空度松开手。 5） 调正主机高度：按压下位于加热槽底部的压杆，左右调节弧度使之达到合适位置后手离压杆即可达到所需高

5、度。 6） 打开调速开关，绿灯亮，调节其左侧旁的转速旋钮，蒸发瓶开始转动。打开调温开关，绿灯亮，调节其左侧旁的调温旋钮，加热槽开始自动温控加热，仪器进入试运行。温度与真空度一到所要求的范围，即能蒸发溶剂到接受瓶。 7） 蒸发完毕，首先关闭调速开关及调温开关，按压下压杆使主机上升，然后关闭真空泵，并打开冷凝器上方的放空阀，使之与大气相通，取下蒸发瓶，蒸发过程结束。 旋转蒸发仪操作的注意事项： 1） 玻璃件应轻拿轻放，洗净烘干。 2） 加热槽应先注水后通电，不许无水干烧。 3） 所用磨口仪器安装前需均匀涂少量真空脂。 4） 贵重溶液应先做模拟试验。确认本仪器适用后再转 入正常使用。 5） 精确水温

6、用温度计直接测量。 6） 工作结束，关闭开关，拔下电源插头。 水浴锅的基本操作方法： 1）往锅内注入干净的水，水位至少达电热管上方1cm处； 2）接通电源，打开开关开始加热； 3）旋转温度调节旋钮，使旋钮上的刻度线指向工作所需的温度刻度； 4）工作完毕将水放干。 3）未加水到适当位置前，切勿接通电源；4）温度控制器不可随意拆卸；5）外壳必须接地；6）控制箱内部应保持干燥，以防因受潮而导致漏电；应随 时注意水箱是否有渗漏现象。2实验报告要求 旋转蒸发仪的基本操作方法及注意事项。 水浴锅的基本操作方法及注意事项。六、 参考书1. 吴立军主编天然药物化学（第五版），人民卫生出版社，2007年2. 梁

7、敬钰主编天然药物化学实验与指导，中国医药科技出版社，2003年3. 崔福德主编药剂学（第六版），人民卫生出版社，2007年实验三 芦丁粗提物的显色反应和PC鉴别一、实验目的 学习黄酮类化合物理化性质和常用的显色方法。 学习用纸色谱法分离和鉴定黄酮类化合物的混合液。 二、实验原理 黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的酚OH及吡喃酮环有关。色原酮 2-苯基色原酮 纸色谱法可视为溶质在固定相和流动相之间的连续分配(萃取)的过程。由于组分在两相间的分配系数不同，因而随展开剂迁移的速度不同而达到分离的目的。三、实验仪器与实验材料 1、实验仪器 滴管 试管 比色管 紫外分辨仪 玻璃棒 2、实验材料 乙醇 0

8、.1%NAOH 10%NAOH FeCl3 新华1号层析滤纸 25%醋酸水溶液 硫酸铝试剂 锌粒 氨水 滤纸四、试验方法 1. HCl- Zn粉反应：在样品的乙醇或甲醇溶液中加入少许镁粉振摇，再滴加几滴浓盐酸。（必要时在水浴上加热） 2. 铝盐反应：在样品的乙醇或甲醇溶液中加入几滴AL2（SO4）3试剂，观察颜色变化，并在紫外灯下观察有无荧光现象。 3.FeCl3反应：在样品的乙醇或甲醇溶液中加入几滴FeCl3试剂，观察颜色变化。 4.性试剂显色反应：在样品的乙醇或甲醇溶液中加入几滴NAOH试剂，观察颜色变化。 5. 纸色谱（PC）: 支持剂为新华1号层析滤纸； 流动相为25%醋酸水溶液； 显

9、色剂为氨水。五、实验指导 1本实验讲解要点及注意事项 试管及滴定管的常规操作方法。 紫外灯下观察荧光现象的基本操作方法及注意事项。 层析纸条应防止污染，其工作部分不能用手触及。 点样毛细管不要弄错。先在碎滤纸上进行点样练习，样点与样点和边缘与样点之间应有同等宽度的间隙。 纸层析纸条和层析管均要垂直安放，层析管可置于试管架上或自由夹固定，纸条不能触及管壁。样点与展开剂液面至少相距0.5cm。 层析完毕，取出纸条时，不要忘记立即在溶剂前沿处划记号。样点至溶剂前沿的距离以78cm为宜。 用电吹风显色时，不可太近或过热，以免影响斑点及其颜色的观察。2实验报告要求 向供试液中加入显色试剂后的颜色变化，以

10、及有无荧光反应。 纸色谱法分离化合物的基本操作方法，以及色谱图分析。3思考题 黄酮类化合物的显色反应有哪些，在物质鉴定中有何 用途？ 应用纸色谱分离黄酮类化合物，如何能做到使斑点清 晰？ 纸层析时，样点不能接触或浸入到展开剂液面以下， 为什么？ 色谱分离技术中，Rf值的计算有何意义，本实验中Rf 值大概是多少？六、 参考书1. 吴立军主编天然药物化学（第五版），人民卫生出版社，2007年2. 梁敬钰主编天然药物化学实验与指导，中国医药科技出版社，2003年3. 李发美主编分析化学（第六版），人民卫生出版社，2007年实验四 六味地黄丸质量标准研究一、实验目的 学习中药质量的控制方法，中药质量标

11、准的制定方法。 学习六味地黄丸质量标准的制定依据。 学习实验用硅胶板的铺板技术。二、实验原理 六味地黄丸 【处方】 熟地黄184g 山茱萸(制)92g牡丹皮69g 山 药92g 茯 苓69g 泽 泻69g 蜂蜜(炼)550g 滑 石 粉 石 蜡 油- 1000g【质量要求】 1）水分 2）重量差异 3）装量差异 4）溶散时限 5）微生物限度【鉴别】 取本品乙醚提取液作为供试品溶液，另取丹皮对照药材作成对照品溶液，照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录B)试验，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点。三、实验仪器与实验材料 1、实验仪器索氏提取器 旋转蒸发器 烧杯 漏斗

12、 展开缸 显色瓶超声波提取器 玻璃棒 试剂瓶 电子天平 锥形瓶 研钵 玻璃板 布氏漏斗 真空泵 抽滤瓶 2、实验材料六味地黄丸 牡丹皮 乙醚 丙酮 氯化铁显色剂 硅胶 滤纸 环己烷 醋酸乙酯 乙醇 乙酸 CMC-Na 玻璃板 四、试验方法（1）取本品20丸，在电子天平下分别称取各丸质量，记录，求出平均值，并计算相对标准偏差。（2）硅胶G薄层板的制备 1. CMCNa溶液的配置：一般其浓度为0.30.5，根据自己经验而定（我习惯用0.4的）。具体方法如下：先将预用的水加热至6070，然后加入CMCNa，边加边搅拌，使之溶解，即得。 2. 与硅胶混合：CMCNa溶液与硅胶的比例为3：1。具体方法如

13、下：先将CMCNa溶液倒入自动搅拌器或研钵中，然后加入硅胶，搅匀即可。若是在研钵中研磨，按一个方向研磨，自下而上，然后自上而下，以赶尽气泡为佳。 3. 铺板：手动或机械。手动铺出的板的薄厚与所加的混合后的硅胶量有关，而机械铺出的板的薄厚与机械所选用的钢板有关，可根据需要来定。 此过程中最关键的是板子边缘铺得好坏，手动铺板一定要将玻璃板边缘硅胶涂匀（我习惯用两头掂法，即板下方的中间垫一物体，两头悬空，两手均匀掂动）。而机械铺板要注意板与板之间平整性，或者由高到低排列。 4. 晾干：自然晾干。 5. 活化：将晾干的板子在105烘箱中干燥30min，取出，放入干燥器中，备用。 （3）取本品9g，研碎

14、，加硅藻土4g，研匀。加乙醚120ml，用索氏提取器低温回流提取2小时，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加丙酮1ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹皮10 g，加乙醚20 ml在超声波提取器上震荡提取30分钟，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加丙酮1ml使溶解，作为供试品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录B)试验，吸取上述两种溶液各10l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷一醋酸乙酯(31)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点。五、实验指导 1本实验讲解要点及注意事项 中药质量标准制定及研究方

15、法中各个细节问题。 电子天平的常规操作方法。 索氏提取器的基本操作方法及注意事项。 硅胶板制作的基本步骤和注意事项。 薄层板应防止污染，其工作部分不能用手触及。 点样毛细管不要弄错。先在废板上进行点样练习。点样除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，样点直径及点间距离同纸色谱法,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 薄层板不能触及管壁，样点与展开剂液面至少相距0.5cm。 层析完毕，取出薄层板时，不要忘记立即在溶剂前沿处划记号。样点至溶剂前沿的距离以78cm为宜。 用电吹风显色时，不可太近或过热，以免影响斑点及其颜色的观察。2实验报告要求 在丸重考察项目中必须计算出平均丸重，及相对标准偏差。 平均丸重 = ? RSD = ? 薄层色谱法分离化合物的基本操作方法，以及色谱图分析。3思考题 在丸重考察项目具体操作中，丸剂为什么不能长时间和空气接触？ 应用薄层色谱分离黄酮类化合物，如何能做到使斑点清晰？ 硅胶板制作步骤中，羧甲基纤维素钠为什么必须过滤，以及采