HIV实验室质量管理

1、艾滋病实验室质量管理实验室质质量管理理行政支持持行政部门门和领导导HIV实验室建建设和发发展资资金人人员监监督督支持人员培训训每年市疾疾控中心心组织上上岗证环境条件件：实验室室的设置置及其建建筑、设设施、设设备必须须符合全国艾滋滋病检测测工作管管理办法法的要求。HCV，HBV及梅毒等等血清学学检测在在满足实实验室管管理要求求和保证证生物安安全的条条件下，可以与与HIV检测共享享空间和和设备，应避免免交叉污污染。实验室质质量管理理样品采集集、运送送和处理理送检单收样登记记表HIV抗体复检检检测单单检测方法法和试剂剂的选择择试剂的出出入库及及使用记记录供应品、耗材（试剂）质量验验收记录录表实验室质

2、质量管理理设备维护护与校准准仪器设备备温度记记录表仪器设备备使用、检定、维修、维护记记录本强检计量量器具周周期检定定（自校校）计划划表文件和文文件管理理实验原始始记录表表结果报告告样品登记记和保存存（唯一编码码）实验室质质量管理理文件和文文件管理理标准操作作程序（SOP）（1）样品的的接收、登记、处理、保存和和运输；（2）检测方方法和步步骤；（3）试剂使使用和保保存；（4）仪器的的使用维维护和校校准；（5）质量控控制要求求及程序序；（6）结果解解释与报报告；（7）保密程程序；（8）实验室室数据、相关文文件记录录与保存存；（9）不确定定样品追追踪和处处理；（10）实验室室安全防防护及实实验室的的

3、清理和和消毒。文件存档档（保存存10年以上）ELISA实验影响响因素酶联免疫疫吸附实实验（ELISA）的影响响因素样品溶血标本本及混有有红细胞胞的血清清采用ELISA法检测易易产生假假阳性可可能能是溶血血血清中中含有过过氧化酶酶物质（红细胞胞或血红红蛋白中中的亚铁铁血红素素），在在洗涤过过程中往往往难以以完全洗洗脱，它它可使过过氧化氢氢释放出出原生态态氧，从从而催化化底物四四甲基联联苯胺生生成可溶溶性的有有色物质质，即显显蓝色，产生假假阳性。轻微溶溶血没事事，严重重溶血的的标本易易产生假假阳性。受细菌污污染的标标本因菌菌体中可可能含有有内源性性辣根过过氧化物物酶，因因此，被细菌污污染的标标本同

4、溶血标标本一样样，亦可可产生非非特异性性显色而而干扰测测定结果果。酶联免疫疫吸附实实验（ELISA）的影响响因素样品塑料试管管能吸附抗抗原物质质，样本本久置在在塑料管管内会使使样本内内抗原含含量下降降造成假假阴性，最好好使用真空采血血管或抗抗凝管。（抗凝凝剂会略略有影响响，但影影响不大大）标本凝固固不全在在工作中中，有时时为了争争取时间间快速检检测，常常在血液液还未开开始凝固固时即强强行离心心分离血血清，使使血清中中仍残留留部分纤维蛋白白原，在ELISA测定过程程中可以以形成肉肉眼可见见的纤维维蛋白块块，易造造成假阳阳性结果果；因此此血液标标本采集集后必须须使其充充分凝固固后再分分离血清清。酶

5、联免疫疫吸附实实验（ELISA）的影响响因素按说明书书要求，实验前前应取出出试剂稳稳定加样加样的量量要准确确移移液器要要经常清清洗定定期校校准加样位置置孔壁1/3以下不可溅出出不不可产生生气泡必须使用用一次性性TIP头，严格格控制，防止交交叉污染染先加稀释释液的，加样时时可用移移液器孔孔内吹打打混匀移液器的的校准可以送检检，可以以自校，自校要要有SOP有记录酶联免疫疫吸附实实验（ELISA）的影响响因素孵育时间严严格格按照试试剂盒说说明书操操作容容易控控制温度严严格格按照试试剂盒说说明书操操作用用校准准的温度度计监测测温度，特别是是冬天，避免因因温度过过低导致致假阴性性。封板孵孵育育时不贴贴封

6、片或或加盖，使标本本或稀释释液蒸发发，吸附附于孔壁壁,难以清洗洗彻底。恒温孵育育设备的的使用与与维护校准的温温度计监测ELISA反应温度度水浴的尤尤其要注注意水位酶联免疫疫吸附实实验（ELISA）的影响响因素洗板洗液的量量试剂不同同，板孔孔的大小小差异会会导致洗洗液的量量的不同同，为保保证洗的的彻底，原则是是量足够多多且不会会逸出。浸泡时间间严格按照照试剂盒盒说明书书操作，一般30-60秒，不设置置浸泡时时间或时时间太短短，洗脱脱不彻底底的话会会产生“花板”。保持针孔孔通畅不不阻塞血清中残残留的的的纤维蛋蛋白丝或或洗涤液液析出的的结晶易易使洗板板机的针针孔处于于阻塞状状态，造造成未结结合标记记

7、酶洗脱脱不彻底底，导致致“花板板”。应应做好洗洗板机的的维护工工作。拍板酶联免疫疫吸附实实验（ELISA）的影响响因素洗板机的的检定、使用及及维护检定：注注液量和和残留量量（每孔孔5微升）使用：设设置程序序（注液液量、洗洗板次数数、浸泡泡时间、洗板位位置）维护：消消毒液冲冲洗，蒸蒸馏水冲冲洗酶联免疫疫吸附实实验（ELISA）的影响响因素显色加底物时时，应悬空加液，避避免触及及板孔内内壁造成成交叉污污染。应先加底物物缓冲液液A再加TMB(四甲基联联苯胺)底物B，加入顺顺序不能能颠倒。已显浅浅蓝色的的TMB底物坚决决不能用用。个别试剂剂要求A、B液先混合合后再加加。温度与时时间的控控制。酶联免疫疫

8、吸附实实验（ELISA）的影响响因素终止及读读板读板前应应保证板孔底部部干净，无无异物，无水气气，无气气泡，特特别是在在冬天。酶标仪不不应放置置在阳光光或强光光照射下下,操作时室室温宜在在15-30,使用前先先预热15-30min,测读板结结果会更更稳定。酶标仪必必须检定定标准板厂家酶联免疫疫吸附实实验（ELISA）的影响响因素Cutoff值计算及及结果判判定注意意事项严格按照照试剂说说明书要要求的数数量做阴阴、阳性性对照根据阴、阳性对对照的值值判定实实验是否否成立严格按照照试剂说说明书要要求计算算Cutoff值注意空白白原始记录录标明空白对照照、阳性对照照、阴性对照照、外部对照照以及待检样品

9、品的位置试剂盒厂厂家、测测定方法法、批号号、效期期操作人员员和复核核人员姓姓名（签签名）检测日期期其他（环环境、设设备、实实验依据据等）注意样本的溯溯源性废弃物处处理消毒液（含氯消消毒剂、75%乙醇、2%戊二醛）干烤消毒毒（140 2-3h）高压蒸汽汽消毒（121 15-20min）高压灭菌菌器检定定：温度度和压力力高压灭菌菌器使用用效果监监测：化化学指示示卡，生生物监测测（嗜热热脂肪杆杆菌芽孢孢）ELISA实验质量量控制ELISA的质量控控制试剂盒内内部对照照：试剂剂盒内部部对照质质控品即即为试剂剂盒内提提供的阳性和阴阴性对照照血清。试剂盒盒内部对对照用于于判断每每次实验验的有效效性，但但不

10、能作作为室内内质控品品使用。每一次次检测临临床样品品时，必必须有试试剂盒内内部对照照，而且且只能在在同批号号的试剂剂盒中使使用。内内部对照照结果无无效，必必须重新新试验。室内质控控品：为为非试剂剂盒组份份的外部部质控品品，是为为了监控控检测的的重复性性而设置置的，包包括强阳阳性、弱弱阳性和和阴性质质控血清清。也可可以只设设置一个个弱阳性质质控，以该试剂盒临临界值（Cut-off）的23倍为宜。外外部质控控品的作作用是，判断该该批临床床样品检检测的有有效性，因此，每次实实验必须须包含室室内质控控品，其其结果无无效，必必须重新新试验。室内质控控品的来来源商品化的的室内质质控品实验室自自己制备备（比

11、较较经济）混合试剂剂盒内部部对照血血清，通通过做实实验确定定阴阳性对对照的混混合比例例，混合合，分装装保存。混合HIV抗体阳性性人血清清、HIV抗体阴性性人血清清，3000转/分钟离心心15分钟，0.2m生物滤膜膜过滤除除菌，5630分钟加热热灭活处处理。通通过做实实验确定定阴阳性性血清的的混合比比例，混混合，分分装保存存。高浓度商商品化室室内质控控品再稀稀释室内质控控品的保保存一次购买买或制备备量应该该足够本本实验室室至少一一年使用用等量分装装，可以以按单次次使用、单日使使用、最最长一周周使用的的量确定定每个分分装的量量不同室内内质控品品应做好好标记，最好使使用不同同颜色的的标签，以防止止混

12、用应存放于于-70以下，如无条条件则存存放于非非自动除除霜的-20冰箱一旦融解解后应存存放于2-8，一周周后必须须弃去，不能重重新冻存存使用样品的采采集、处处理、保保存、运运送及接接收样品的采采集和处处理建议用K2EDTAK3EDTA枸橼酸钠钠的抗凝凝管采血血,不用肝素素抗凝管管采血血浆1500-3000r/min离心15min，吸上层层血浆血清室室温自自然放置置1-2h，待血液液凝固、血块收收缩后1500-3000r/min离心15min，吸上层层血清样品的保保存建议用1.5ml-2.0ml的螺口冻冻存管或或离心管管保存.抗体及抗抗原检测测的血清清或血浆浆样品应应存放于于-20以下,一周内检

13、检测的样样品2-8样品的保保存尽量多分分装保存存样品的运运送要求求样本量1ml样本的质质量无无严严重溶血血，无微微生物污污染，无无血脂过过多，无无严重黄黄疸等管子的质质量防防漏漏三层包装装单管包装装重新采样样样品的运运送要求求样品和送送检单分分开专人送样样专专门运送送箱（实实验室人人员号码码和联系系方式）市疾控控确证实实验室血清or血浆2-8度运送或或者冻存存状态下下直接运运送送样单要要求送样单打打印检测者/审核者手手签，单单位或实实验室盖盖章信息完整整(真实姓名名、送检检人群、身份证证号码、联系电电话、现现地址及及户籍地地址等)详细的样样本来源源(监管场所所的具体体到哪个个监管场场所)充分利

14、用用备注栏栏规范性(试剂、cutoff值等)样品的接接收打开包装装，注意意生物安安全，个个人防护护核对样品品与送检检单，检检查样品品管有无无破损和和溢漏记录一一般般记录，另外记记录有无无严重溶溶血，微微生物污污染、血血脂过多多及黄疸疸等情况况开盖生生物安安全柜中中，个人人防护HIV抗体检测测HIV抗体检测测的目的的HIV抗体检测测可用于于诊断、血液筛查查、监测等。以诊断为为目的的的检测是是为了确确定个体体HIV感染状况况，包括括临床检检测、自自愿咨询询检测、根据特特殊需要要进行的的体检等等。以血液筛筛查为目目的的检检测是为为了防止止输血传传播HIV，包括献献血员筛筛查和原原料血浆浆筛查。以监测

15、为为目的的的检测是是为了解解不同人人群HIV感染率及及变化趋趋势，包包括各类类高危人人群、重重点人群群和一般般人群。HIV抗体检测测的要点点根据目的的选择检检测方法法及检测测策略。严格遵守守实验室室标准操操作程序序（SOP）。筛查试验验阳性，须做确确证试验验。筛查试验验阴性，不应做做确证试试验。HIV抗体筛查查试验流流程样 品初筛试验筛查试剂阳性反应阴性反应复检试验原有试剂+另一不同原理（或厂家）试剂或另外两种不同原理（或厂家）试剂一阴一阳均阴性反应均阳性反应确证试验报告阴性筛查试剂剂国家食品品药品监监督管理理局注册册批准ELISA试剂批批批检合格格，在有有效期内内推荐使用用经临床床质量评评估

16、敏感感性和特特异性高高的试剂剂初筛试剂剂高高敏感性性复检试剂剂高高特异性性筛查样品品血清血浆全血DBS/DPS唾液尿液筛查方法法酶联免疫疫吸附实实验（ELISA）第三代试试剂双双抗原原夹心法法 单纯纯检测HIV抗体第四代试试剂抗抗原抗抗体联合合诊断试试剂同同时检检测P24抗原和抗抗HIV-1/2抗体缩缩短窗窗口期注意复检检试剂的的选择化学发光光或免疫疫荧光试试验快速检测测（RT）筛查试验验的结果果报告HIV抗体筛查查试验阴阴性反应应报告为为“HIV抗体阴性性”HIV抗体筛查查试验阳阳性反应应报告为为“HIV抗体待复复检”HIV抗体复检检试验两两次检测测均阴性性报告为为“HIV抗体阴性性”HIV

17、抗体复检检试验两两次检测测均阳性性或一阴阴一阳报报告为“HIV抗体待确确证”HIV感染产妇妇所生婴婴幼儿婴儿会由由于被动动携带母母亲的抗抗体而连连续几个个月至十十几个月月出现抗抗体阳性性。婴儿满12个月进行行第一次次HIV抗体检测测。使用用两种不不同原理理或不同同厂家筛筛查试剂剂进行抗抗体检测测，两种种筛查试试剂检测测结果均均为阴性性反应，报告HIV抗体阴性性，可排排除感染染。检测测结果出出现阳性性反应（一种为为阴性反反应一种种为阳性性反应或或两种均均阳性反反应），不能排排除感染染，应继继续追踪踪随访，至儿童童满18个月时再再次进行行HIV抗体检测测。HIV感染产妇妇所生婴婴幼儿婴儿满18个月

18、时应应再次进进行HIV抗体检测测。使用用两种不不同原理理或不同同厂家筛筛查试剂剂进行抗抗体检测测。两种种筛查试试剂的检检测结果果均为阴阴性反应应，报告告HIV抗体阴性性，可排排除感染染。检测测出现阳阳性反应应（一种种为阴性性反应一一种为阳阳性反应应或两种种均呈阳阳性反应应），进进一步进进行确证证试验，根据确确证试验验的结果果判断是是否感染染HIV。做好检测测后咨询询。HIV抗体检测测结果解解释HIV抗体阴性性未发生感感染（排排除“窗窗口期”）HIV抗体不确确定非特异性性的反应应感染早期期感染晚期期HIV抗体阳性性发生感染染（排除除疫苗使使用）HIV抗体快速速检测HIV抗抗体快速速检测快速检测测

19、，是艾艾滋病实实验室多多了一种种检测方方法快速检测测，是为为了更多多更快的的发现感感染者快速检测测，不是是为了取取代实验验室，但但不能因因为有了了实验室室而放弃弃使用快快速检测测快速检测测手段能能否成为为新型检检测-咨询模式式，或基基于医疗疗机构的的有效的的检测方方法-取决于检检测的质质量HIV抗体快速速检测方方法PA明胶颗粒粒凝集试试验（PA）：将HIV抗原致敏敏明胶颗颗粒作为为载体，与待检检样品作作用。当当待检样样品含有有HIV抗体时，明胶颗颗粒与抗抗体发生生凝集反反应，根根据凝集集情况判判读结果果。PA试剂有两两种:同时检测测HIV-1和HIV-2抗体以及及分别检检测HIV-1和HIV-

20、2抗体。有效试验验必须有有阴性和和阳性质质控。HIV抗体快速速检测方方法免疫渗滤滤试验免疫渗滤滤试验：斑点ELISA和斑点免免疫胶体体金（或或胶体硒硒）快速速试验。以硝酸纤纤维膜为为载体，HIV抗原点状状固定在在膜上，加待检检样品。阳性结结果在膜膜上抗原原部位显显示出有有色斑点点。反应应时间在在10分钟以内内。有效试验验的质控控点必须须显色。HIV抗体快速速检测方方法免疫层析析试验免疫层析析试验：以硝酸酸纤维膜膜为载体体，HIV抗原线状状固定在在膜上，待检样样品（血血液或唾唾液）沿沿着固相相载体迁迁移，阳阳性结果果在膜上上抗原部部位显示示出有色色条带。有效试验验的质控控带必须须显色。结果判读读

21、严格格参照试试剂说明明书反应区和和质控区区均出现现红色条条带为阳阳性。质控区有有条带，反应区区无条带带为阴性性。质控区无无条带则则实验无无效。HIV抗抗体快速速检测的的外部质质控外部对照照质控品品，可采采用商用质控控品或自自制质控控品。质控品品应包含含抗体阳阳性样品品和阴性性样品。自制质质控品可可使用本本室保留留的阳性性样品。不能使使用酶联联试验的的外部质质控品。下列情况况需做质质量控制制：更换换试剂批批号；更更换检测测人员；更换包包装；每每个检测测日；更更换试剂剂厂家。建议：每每个检测测日检测测一次阳阳性和阴阴性质控控品；如如果日检检测量大大于50份样品，至少应应作2次质控。快速检测测的注意

22、意事项不提倡个个人在家家中检测测。应由由经培训训的专业业人员操操作，注注意生物物安全操操作，避避免职业业暴露发发生。在质控窗窗口内应应出现质质控带，如实验验完成后后未呈现现质控带带，说明明试剂盒盒内质控控无效，该试验验结果无无效，样样品须重重检。出现以下下问题，提示存存在质量量隐患，应引起起重视：运输包包装、内内盒或试试剂盒的的物理损损伤；在在单包装装内存在在混杂物物质；标标签出现现错误、缺失或或字迹模模糊（特别是是产品名名称或出出产厂家家名称，批号和和货号，失效期期或/和生产日日期）；缺失目目录；泄泄漏或污污染；不不适宜的的存放条条件；保保护包装装纸破损损或污染染。快速检测测的注意意事项环境温度度,尤其是在在冬天血清/血浆全全血稀稀释释缓冲液液样本的量量反应的时时间生物安全全废废弃物