巴比妥及苯并二氮杂卓类镇静药物的分析

巴比妥及苯并二氮杂卓类镇静药物的分析一、基本结构与主要性质环状丙二酰脲类化合物(一)基本结构2020/11/32药物分析教研室一、基本结构与主要性质典型药物(Phenylbarbital)(barbital)2020/11/33药物分析教研室一、基本结构与主要性质(Secobarbital)戊巴比妥(Pentobarbital)2020/11/34药物分析教研室一、基本结构与主要性质2020/11/35药物分析教研室一、基本结构与主要性质(一)基本结构酰胺键的水解酸性，与醛加成反应侧链反应：双键，苯环络合反应与金属离子反应紫外吸收2020/11/36药物分析教研室一、基本结构与主要性质(二)主要性质性状——白色结晶或结晶性粉末溶解度——微溶或极微溶于水，易溶于乙醇等有机溶剂钠盐易溶于水，难溶于有机溶剂1.弱酸性(pKa:7.3～8.4)＋2020/11/37药物分析教研室一、基本结构与主要性质一级电离二级电离烯醇互变2020/11/38药物分析教研室一、基本结构与主要性质2.水解反应2020/11/39药物分析教研室一、基本结构与主要性质巴比妥钠注射液不能预先配制进行加热灭菌，须制成粉针剂，临用时溶解。2020/11/310药物分析教研室一、基本结构与主要性质3.与金属离子反应a.与银盐的反应5,5－取代的巴比妥类药物＋AgNO3Na2CO3可溶性的一银盐AgNO3二银盐白色沉淀巴比妥类药物分子结构中含有酰亚胺基团,在碳酸钠溶液中生成钠盐而溶解,因而可与硝酸银反应2020/11/311药物分析教研室白色难溶性二银盐AgNO3Na2CO3滴加AgNO3Ag与银盐的反应用这种形式表示也是一样的2020/11/312药物分析教研室一、基本结构与主要性质3.与金属离子反应b.与铜盐的反应巴比妥类药物在吡啶溶液中生成烯醇式异构体,可与吡啶试剂反应形成稳定的配位化合物,产生类似双缩脲的呈色反应2020/11/313药物分析教研室一、基本结构与主要性质3.与金属离子反应b.与铜盐的反应巴比妥类＋铜吡啶显色巴比妥类——紫色或紫色沉淀硫巴比妥类——绿色2020/11/314药物分析教研室水吡啶部分离子化＋有色配位化合物与铜盐的反应用这种形式表示也是一样的2020/11/315药物分析教研室一、基本结构与主要性质c.与钴盐的反应Co(NO3)2、CoO、Co(Ac)2异丙胺无水甲醇或乙醇2020/11/316药物分析教研室d.与汞盐的反应一、基本结构与主要性质巴比妥类药物+汞盐→白色↓（可溶于氨试液）2020/11/317药物分析教研室一、基本结构与主要性质4.香草醛反应(Vanillin)戊巴比妥鉴别：

取戊巴比妥10mg，加香草醛约10mg和硫酸2ml，混合后在水浴上加热2min，显棕红色。放冷，小心加入乙醇5ml，即显紫色并变成蓝色。2020/11/318药物分析教研室一、基本结构与主要性质5.紫外吸收光谱特征λ(nm)2902702502300.51.01.5A巴比妥类药物的紫外吸收光谱ABC240nm255nmA.H2SO4液(0.05mol/L,未电离)B.pH9.9缓冲液(一级电离)C.pH13NaOH液(1mol/L,二级电离)1,5,5-三取代巴比妥类药物不存在二级电离，最大吸收波长不变。2020/11/319药物分析教研室一、基本结构与主要性质3202802402000.80.50.2λ(nm)A238287304硫代巴比妥的紫外吸收光谱

A.HCl液(0.1mol/L)

B.NaOH液(0.1mol/L)6.薄层色谱行为特征2020/11/320药物分析教研室7.显微结晶一、基本结构与主要性质

药物本身晶形反应产物晶形2020/11/321药物分析教研室二、鉴别试验(一)丙二酰脲类的鉴别试验取供试品约0.1g，加碳酸钠试液1ml与水10ml，振摇2min，滤过，滤液中逐滴加入硝酸银试液，即生成白色沉淀，振摇，沉淀即溶解；继续滴加过量的硝酸银试液，沉淀不再溶解。取供试品约50mg，加吡啶溶液(1→10)5ml，溶解后，加铜吡啶试液1ml，即显紫色或生成紫色沉淀。银盐反应铜盐反应2020/11/322药物分析教研室(二)测定熔点二、鉴别试验

巴比妥类的钠盐＋酸→游离巴比妥类药物↓→过滤→洗涤→干燥→测熔点

(三)利用特殊取代基或元素的鉴别试验

利用不饱和取代基的鉴别试验(司可巴比妥钠)

利用芳环取代基的鉴别试验(苯巴比妥钠)

硫色素反应(硫代巴比妥类)2020/11/323药物分析教研室二、鉴别试验1.司可巴比妥钠的鉴别I2褪色Br2KMnO42020/11/324药物分析教研室二、鉴别试验2.苯巴比妥的鉴别a.硝化反应

b.硫酸-亚硝酸钠反应

苯巴比妥与NaNO2-H2SO4反应生成橙黄色→橙红色c.甲醛-硫酸反应

苯巴比妥与甲醛-H2SO4反应生成玫瑰红色环

区分苯巴比妥与不含芳环取代的巴比妥类药物。2020/11/325药物分析教研室二、鉴别试验3.硫代巴比妥类的鉴别——硫色素反应硫代巴比妥类与巴比妥类的区别以前2020/11/326药物分析教研室三、特殊杂质试验(一)苯巴比妥ⅠⅡⅢ2020/11/327药物分析教研室三、特殊杂质试验2020/11/328药物分析教研室三、特殊杂质试验1.酸度中间体Ⅱ乙酰化不完全时，Ⅱ与尿素缩合产生的杂质Ⅱ苯基丙二酰脲酸性较强检查方法取本品0.20g，加水10ml，煮沸搅拌1min，放冷，滤过后，取滤液5ml，加甲基橙指示液1滴，不得显红色2020/11/329药物分析教研室2.乙醇溶液澄清度三、特殊杂质试验检查中间体Ⅱ、Ⅲ等乙醇中不溶物。

取本品1.0g，加乙醇5ml，加热回流3min，溶液应澄清

3.中性或碱性物质(提取重量法,溶解度差异)

副产物：2-苯基丁酰(胺)脲或分解产物不溶于NaOHT.S.而溶于醚分液漏斗NaOHT.S.乙醚H2O过滤干燥滤纸蒸发皿105℃1hr<3mg取本品1.0g乙醚，H2O洗3次滤液蒸干残渣2020/11/330药物分析教研室123含量测定银量法Argentometry酸碱滴定法

Acid-basetitrationmethod紫外分光光度法uv2020/11/331药物分析教研室(一)银量法(Argentometry)巴比妥类药物在适当的碱性溶液中,易与重金属离子反应,并可定量地形成盐,因而可用银量法进行滴定.在滴定过程中,可以通过生成沉淀进产生的混浊指示滴定终点.但容易出现误差.改用甲醇及3%的无水碳酸钠溶剂系统,采用Ag-玻璃电极系统电位法指示终点,方法改善,为chp2010所用.四、含量测定2020/11/332药物分析教研室四、含量测定(一)银量法

(Argentometry)0.2g甲醇

40ml异戊巴比妥测定3%无水碳酸钠电位滴定法(AgNO3)指示电极(Ag)参比电极(玻璃/甘汞)2020/11/333药物分析教研室四、含量测定(二)溴量法:溴过量,再用KI反应,再用硫代硫酸钠滴定.

司可巴比妥钠测定取本品约0.1g，精密称定，置250ml碘瓶中，加水10ml，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25ml，再加盐酸5ml，立即密塞并振摇1min，在暗处静置15min后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（0.05mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml溴滴定液（0.05mo1/L）相当于13.01mg的C12H17N2NaO3。2020/11/334药物分析教研室四、含量测定(三)酸碱滴定法(Acid-basetitrationmethod)

水-乙醇混合溶剂中滴定胶束水溶液中滴定非水滴定法2020/11/335药物分析教研室四、含量测定异戊巴比妥水—醇溶解麝香草酚酞NaOH淡蓝色1.水-乙醇混合溶液2020/11/336药物分析教研室2.胶束水溶液四、含量测定正胶束反胶束H2O溴化十六烷基三甲基苄铵Cetyltrimethylbenzylammoniumbromide，CTMA氯化四癸基二甲基苄铵Tetradecyldimethylbenzylammoniumchloride，TDBA巴比妥类表面活性剂溶解麝香草酚酞指示剂NaOH滴定2020/11/337药物分析教研室四、含量测定3.非水滴定法

溶剂：二甲基甲酰胺、甲醇、丙酮、三氯甲烷、无水乙醇、苯、吡啶、甲醇-苯、乙醇-三氯甲烷滴定剂：甲醇钠（钾）、氢氧化四丁基胺指示剂：麝香草酚蓝,也可以用电位法指示终点2020/11/338药物分析教研室四、含量测定(四)紫外分光光度法

直接测定的UV法提取分离后的UV法2020/11/339药物分析教研室四、含量测定注射用硫喷妥钠含量测定取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量(约相当于硫喷妥钠0.25g)，置500ml量瓶中，摇匀，量取此溶液用0.4%NaOH溶液定量稀释制成每1ml中约含5µg的溶液；另取硫喷妥对照品，精密称定，加0.4%NaOH溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含5µg的溶液。用1cm吸收池，于304nm波长处分别测定吸收度，以0.4%NaOH溶液作空白。根据每支的平均装量计算。每1mg的硫喷妥钠相当于1.091mg的C11H19N2NaO2S2020/11/340药物分析教研室四、含量测定USP24法测定苯巴比妥含量巴比妥类药物适量，加水使其溶解后，加酸酸化，用三氯甲烷提取巴比妥类药物，三氯甲烷提取液加入pH7.2～7.5的缓冲液，振摇，分离弃去水相缓冲液层，再用氢氧化钠自三氯甲烷中提取巴比妥类药物，调节碱提取液的pH值，然后选用相应的吸收波长进行测定。提取后的UV分光光度法,消除干扰2020/11/341药物分析教研室(五)HPLC法五、体内药物分析2020/11/342药物分析教研室第二节苯并二氮杂卓类药物的分析NNClH3CO1234567892’地西泮

(diazepam)

七元亚胺内酰胺环奥普唑仑奥沙西泮(Oxazepam)氯氮卓(Chlordiazepoxide)NNNCH3OClH2020/11/343药物分析教研室2.官能团与分析方法二氮杂卓环为七元环，环上氮原子具有碱性，苯基的取代使碱性降低，可与生物碱试剂反应，可进行非水滴定法测定；本品多为游离碱，不溶于水，而溶于甲醇、乙醇和氯仿中。定量UV吸收，用于含量测定环比较稳定，在强酸性下水解，形成相应的二苯甲酮衍生物，可用于鉴别和比色测定。（氯氮卓水解生成芳伯胺基；地西泮水解生成芳仲胺基和甘氨酸）；鉴别芳伯胺基反应：氯氮卓水解生成芳伯胺基(重氮化偶合反应

鉴别茚三酮反应：地西泮水解生成甘氨酸（茚三酮反应）鉴别硫酸荧光反应：本类药物→加硫酸，在紫外灯下，呈荧光

鉴别含有氯元素：氧瓶燃烧2020/11/344理化性质通常为白色或微黄色结晶或结晶性粉末；具有一定的熔点。一般不溶或极微溶于水，溶于丙酮或三氯甲烷等有机溶剂。具有弱碱性；水解性；UV吸收特性。2020/11/345药物分析教研室第二节苯并二氮杂卓类药物一、鉴别试验

(一)化学鉴别试验

1.沉淀反应

氯氮卓橙红色沉淀

阿普唑仑

＋KBiI4

盐酸氟西泮也生成橙红色沉淀

氯硝西泮放置后，沉淀颜色变深，因此可以相互区别。阿普唑仑+遇硅钨酸白色沉淀，药典中也用于鉴别。2020/11/346药物分析教研室第二节苯并二氮杂卓类药物2.水解后呈芳伯胺反应

氯氮卓和奥沙西泮的盐酸溶液(1→2)，缓缓加热煮沸，放冷，加亚硝酸钠和碱性β-萘酚试液，生成橙红色沉淀，后者放置后颜色变暗。2020/11/347药物分析教研室地西泮

ChP（2005）[鉴别]（2）取本品20mg，用氧瓶燃烧法（附录ⅦC）进行有机破坏，以5%氢氧化钠溶液5ml为吸收液，燃烧完全后，用稀硝酸酸化，并缓缓煮沸2分钟，溶液显氯化物的鉴别反应（附录Ⅲ）。3.分解产物的反应

本类药物多为有机氯化合物，用氧瓶燃烧法破坏，生成HCl，以5%氢氧化钠溶液吸收，硝酸酸化，显氯化物反应。Ch.P用于地西泮和三唑仑药物的鉴别。2020/11/348药物分析教研室2020/11/349药物分析教研室第二节苯并二氮杂卓类药物4.硫酸－荧光反应：苯并二氮杂卓类药物溶于硫酸/稀硫酸在紫外光(365nm)下显不同的颜色。药物硫酸稀硫酸地西泮黄绿色黄色氯氮卓黄色紫色艾司唑仑亮绿色天蓝色硝西泮淡蓝色蓝绿色2020/11/350药物分析教研室5.UV第二节苯并二氮杂卓类药物药物溶剂C(μg/ml)λmax(nm)A地西泮0.5%硫酸甲醇溶液5242约0.51282约0.23366－氯氮卓盐酸(9→1000)7245、3080.65阿普唑仑盐酸(9→1000)12264－盐酸氟西泮硫酸甲醇(1→36)10239±2、284±2比值1.95~2.50362±2－氯硝西泮0.5%硫酸甲醇溶液10239±2，307±2－奥沙西泮乙醇10229，315±2(较弱)2020/11/351药物分析教研室

取本品，加硫酸甲醇溶液(1→36)制成每1ml中约含10ug的溶液，照紫外-可见分光光度法，在239nm、284nm与360nm的波长处有最大吸收，在239nm与284nm处的吸光度比值为1.95～2.50。UV法—盐酸氟西泮(BP2005)IR法氯硝西泮——BP2005作为该品种唯一的鉴别方法IR法一般是USP首要的鉴别手段2020/11/352药物分析教研室红外吸收光谱:已用于地西泮、阿普唑仑、艾司唑仑、盐酸氟西泮、氯硝西泮和奥沙西泮的鉴别2020/11/353药物分析教研室第二节苯并二氮杂卓类药物(四)TLC与HPLC硅胶G薄层板，苯－丙酮(3:2)为展开剂，稀硫酸喷雾，105℃干燥30min，紫外灯下检视荧光斑点药物Rf值斑点颜色*单一点样混合点样自然光254nm365nm地西泮0.800.78无色黄色(m)黄色(m)氯氮卓0.340.34无色蓝紫色(s)蓝紫色(w)艾司唑仑0.220.20无色灰紫色(m)蓝紫色(m)硝西泮0.720.72黄色紫色(w)紫色(w)奥沙西泮0.490.52黄色亮灰蓝色(s)亮灰蓝色(s)*s,m,w分别表示荧光的强、中、弱2020/11/354药物分析教研室

有关物质检查其检查方法除了采用GC法（三唑仑）TLC法HPLC特殊杂质检查2020/11/355药物分析教研室

1.地西泮中有关物质的检查

地西泮在合成过程中因其副反应，可能引入N-去甲基苯甲二氮卓及化学结构不清的有关物质，可采用TLC法中的高低浓度对比法进行检查。

2.氯氮卓中有关物质的检查

USP(24)用TLC法检查氯氮卓中的有关物质，并规定其分解产物2-氨基-5-氯-2-苯甲酮含量不得过0.01%；中间体7-氯-1，3-二氢-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮杂卓-2-酮-4-氧化物含量不得过0.1%。TLC法2020/11/356药物分析教研室3.氯氮卓中有关物质的反相高效液相色谱法

色谱条件：色谱柱为250mm×2.6mm（i.d.）C18柱；n=3000；流动相为甲醇-磷酸液(0.05mol/L)(60:40),40%氢氧化钠溶液调pH为6.0；流速为1ml/min;紫外检测器波长为254nm。

检测结果：氨基物（Ⅱ）的tR为12.0min、氧化物（Ⅲ）的tR为4.3min，痕量杂质（Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ）的tR为13.8、3.6、4.7min。2020/11/357药物分析教研室HPLC2020/11/358药物分析教研室Test盐酸氟西泮中氟化物的检查对照品溶液：精密称取NaF221mg，置100ml量瓶中，加水20ml使溶解，加NaOH溶液(1→2500)1ml,

加水稀释到刻度，摇匀，贮于密封的塑料容器内备用(每1ml相当于1mg的F-)。供试品溶液：取本品1g，精密称定，置100ml量瓶中，加枸橼酸钠缓冲液(pH5.25)溶解并稀释到刻度，摇匀。电位法——氟离子选择电极2020/11/359药物分析教研室测定法：取对照品溶液适量，加枸橼酸钠缓冲液

(pH5.25)分别制成每1ml中含1ug、3ug、5ug和