土壤铵态氮的测定

土壤铵态氮的测定A纳氏试剂比色法1方法提要土壤样品中的nh4+用氯化钾溶液提取，在碱性条件下与纳氏试剂络合生成黄色络合物,进行比色测定。2适用范围本方法适用于各类土壤铵态氮含量的测定。3主要仪器设备3.1分光光度计；往复式或旋转式振荡机，满足180r/min±20r/min的振荡频率或达到相同效果；塑料瓶，200mL。4试剂4.1氯化钾提取液［c(KCl)=2mol・L-i］：称取149.1g氯化钾溶于水，稀释至1L；4.2酒石酸钠溶液［Q(Na2C4H4O4^2H2O)=250g-L-1］：称取25g酒石酸钠(Na2C4H4O4^2H2O)溶于水，稀释至100mL；4.3纳氏试剂：称取10.0g碘化钾溶于5mL水中，另称取3.5g二氯化汞溶于20mL水中(加热溶解)，将二氯化汞溶液慢慢地倒入碘化钾溶液中，边加边搅拌，直至出现微红色的少量沉淀为止。然后加70mL300g・L-1氢氧化钾溶液，并搅拌均匀，再滴加二氯化汞溶液至出现红色沉淀为止。搅匀，静置过夜，倾出清液贮于棕色瓶中，放置暗处保存；4.4阿拉伯胶溶液［10g"L-1］：称取1g阿拉伯胶溶于100mL沸水中，加入2滴氯仿作为防腐剂(混浊时使其澄清后，倾出上部清液)，备用；4.5铵态氮标准贮备溶液［Q(N)=500pg-mL-1］：称取1.910g氯化铵(优级纯，经90°C干燥2h)，溶于水中，加入氯仿1mL,定容至1L；4.6铵态氮标准溶液［Q(N)=10pg・mL-1］：测定当天吸取铵态氮标准贮备溶液10.00mL,加水定容至500mL。5分析步骤：称取10.0g土壤样品放入200mL塑料瓶中，加入50.0mL2mol•L-1氯化钾提取液，盖紧瓶盖，摇匀，在振荡机上于20C〜25C振荡30min(振荡频率：180r/min±20r/min),立即过滤于50mL三角瓶中。吸取滤液5.0mL〜lO.OmL于25mL容量瓶中，加水稀释至20mL左右，加ImL250g・L-i酒石酸钠溶液，充分摇动后静置5min,使其与钙、镁离子络合。加入5滴1%阿拉伯胶，摇动后加1mL纳氏试剂，边加边摇动，然后定容至刻度。5min后在分光光度计上用490nm波长比色。铵态氮校准曲线绘制：吸取10gg・mL-1铵态氮标准溶液0，0.50，1.00，1.50，2.00,2.50mL于25mL容量瓶中，加入10mL氯化钾浸提剂，加水稀释至20mL左右，与待测液相同步骤进行显色，以标准系列溶液的零浓度调节仪器零点进行比色，即为0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0gg・mL」铵态氮标准系列。绘制校准曲线或计算回归方程。结果计算P-V-D铵态氮（N）,mg•kg-1= ——x1000mx103式中：P——查校准曲线或求回归方程而得测定液中NH4+-N的质量浓度，yg・mL-1；V 显色液体积，mL；本试验为25mL；D——分取倍数，50/（5〜10）；103和1000 分别将gg换算成mg和将g换算为kg；m 试样质量，go平行测定结果以算术平均值表示，结果取整数。精密度平行测定结果允许相对相差＜10%.注释1） 土壤铵态氮含量一般用新鲜样品测定，如需以硝态氮加铵态氮反映无机氮含量，则可用过2mm筛的风干样品测定，但需标明为风干基。2） 待测液中有硫化物时，可加盐酸煮沸，赶除至无气味为止；有机质的颜色可加无铵活性碳在酸性条件下过滤除去。3） 为了除去酒石酸钠中铵盐杂质，应将其置于80〜90°C的烘箱中干燥数小时，再检查是否有铵离子。4） 加纳氏试剂前，待测液必须调至中性，如果呈酸性时，则产生红色的碘化汞沉淀，或出现其他各种颜色干扰测定。5）加阿拉伯胶保护剂量要准确，否则影响黄色的深浅（多加时色浅，少加时色深）。比色时若溶液出现桔红色沉淀，应减少吸液量，重做。显色时黄色稳定时间在30min左右，不能放置过久，否则有沉淀或黄色变浅的现象。B 靛酚蓝比色法［土壤农化分析方法，次氯酸钠标定］1方法提要土壤浸出液中的nh4+在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝,溶液的蓝色很稳定，在NH4+-N浓度为0.05pg・mL-i〜0.5pg・mL-i范围内，其深浅与NH4+-N含量成正比。反应体系的pH应为10.5〜11.7之间。硝普钠［硝基铁氰化钠，或称亚硝酰基五氰基合铁(Ill)酸钠，Na2Fe(CN)5NO］是此反应的催化剂，能加速显色，增强蓝色及其稳定性。在20°C左右室温时一般须放置1h后比色，完全显色约需2h〜3h。生成的蓝色很稳定，24h内吸收值无显著变化。比色时在625nm处测量吸收值。待测液中如有干扰的金属离子，可用EDTA等螯合剂掩蔽。2适用范围本方法适用于各类土壤铵态氮含量的测定3.主要仪器设备3.1分光光度计；3.2往复式或旋转式振荡机，满足180r/min±20r/min的振荡频率或达到相同效果；3.3塑料瓶，200mL。4.试剂4.1酚溶液：10g苯酚(C6H5OH)和100mg硝普纳［Na2Fe(CN)5NO・2H2O］溶于1L水中。此试剂不稳定，须贮于棕色瓶,存放在4C冰箱中，用时须温热至室温;注意硝普钠有剧毒！!!4.2次氯酸钠碱性溶液：10g氢氧化钠(NaOH),7.06g磷酸氢二钠(Na2HPO4・7H2O),31.8g磷酸钠(Na3PO4・12H2O))和10mL次氯酸钠dNaOCl)=5.25%,即含有效氯5%的漂白剂溶液］溶于1L水中。此试剂应与酚溶液同样保存；4.3掩蔽剂：酒石酸钾钠溶液［Q(KNaC4H4O6・AlOMdOOgL1］与EDTA二钠溶液［Q(C1OH14O8N2Na2)=100g^L-1］等体积混合，每100mL混合液中加0.5mLNaOH溶液［c(NaOH)10 1482 2=10mol・L-1］,即得清亮的掩蔽剂溶液；4.4铵态氮标准贮备溶液［p(N)=100pg・mL-i］：称区0.4717g烘干的硫酸铵［(NHJ2SO4，优级纯］溶于水，定容至1L；4.5铵态氮标准溶液】p(N)=5pg・mL-1］：测定当天将铵态氮标准贮备溶液用水准确稀释20倍(例如5.00mL稀释至100mL)；4.6氯化钾提取液［c(KCl)=2mol・L-1］：称取149.1g氯化钾溶于水中，稀释至1L；5分析步骤称取1O.OOg土壤样品放入200mL塑料瓶中，加入50.0mL2mol・L-1氯化钾提取液，盖紧瓶盖，摇匀，在振荡器机于20°C〜25°C振荡30min(振荡频率：180r/min±20r/min),过滤于50mL三角瓶中。吸取滤液2.0mL〜10.0mL(含NH4+-N2pg〜25pg)，放入50mL容量瓶中，用氯化钾浸提剂补足至总体积为10mL，然后用水稀释至30mL，依次加入5mL酚溶液和5mL次氯酸钠碱性溶液，摇匀，在20OC左右室温下放置1h后，加入1mL掩蔽剂以溶解可能生成的沉淀物，然后用水定容，用cm比色皿在625nm波长处进行比色。校准曲线绘制：分别吸取铵态氮标准溶液0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL,放入50mL容量瓶中，各加氯化钾浸提剂0mL,同上法显色、定容。各瓶标准液的浓度相应地为0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5pg・mL-1。用标准系列溶液的零浓度调节仪器零点进行比色，测定吸收值，绘制校准曲线或计算回归方程。6结果计算^Vi£x1000mx103铵态氮(N^Vi£x1000mx103式中：p——查校准曲线或求回归方程而得测定液中NH4+-N的质量浓度，昭・mL-1；V——显色液体积，mL；本方法为25mL；D——分取倍数，50/(2〜10)；103和1000 分别将gg换算成mg和将g换算为kg；m 土样质量，g7注释土壤铵态氮含量一般用新鲜样品测定，如需以硝态氮加铵态氮反映无机氮含量，则可用过2mm筛的风干样品测定，但需标明为风干基。掩蔽剂应在显色后加入。如加入过早，会使显色反应很慢，蓝色偏低；加入过晚，则生成的氢氧化物沉淀，可能老化而不易溶解。在20°C左右时放置1h即可加掩蔽剂。3）次氯酸钠不太稳定，配制前需标定NaOCl含量。所需试剂：碳酸氢钠溶液［Q（NaHCO3）=96g・L-i］：称取96g碳酸氢钠，稍加热促进其溶解定容到1L；淀粉溶液［10g・L-i］：称取1g淀粉在60C下加热使之溶解，定容到100m