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第第页检验病理科晋升副高(正高)职称病例分析专题报告单位:***姓名:***现任专业技术职务:***申报专业技术职务:***20**年**月**日病理科医师职称晋升专题报告微波技术在病理技术中的应用微波(Microwave,MW)是一种具有能量的电磁波,波长很短,仅有1mm-m间,但频率却很高,在330-300000MHZ(兆赫),由于它的频率高,可使物体内部的极性分子以每秒24.亿次的速度运动,在运动中产生瞬间热,自70年代Mayer氏首次把MW技术用于组织的固定以来,已有二十年的时间,在这时间里,人们已将MW技术广泛应用于病理技术的各个方面,如组织固定,组织脱水,组织切片的特殊染色,组织脱钙,快速组织制作,免疫组化染色等。(一)组织固定组织固定的目的是使组织细胞中的蛋白质发生凝固,以保存组织中原有的微细结构。以往为了达到上述的目的,常应用许多常规试剂来固定组织,如甲醛和酒精等。但是,由于这些固定液的穿透性不强,因而固定需时较长,致使某些抗原成分的丧失,虽然人们应用新鲜的组织来制作切片,以利于研究,但这样手续极为麻烦,且病例有限,做不了回顾性研究。基于上述原因,人们为了更好地保存抗原,研究了不同的各种固定组织的方法,在这些方法中,MW技术固定的组织、抗原保存较好。1.MW技术固定各种组织所需的温度MW是具有能量的电磁波,由于它能使物体内部的极性分子快速运动而产热,那么应用于组织固定的温度应是多少为好呢?各种组织由于各自的结构不同,分子不一,电子密度也就不一样,因而用于组织固定的温度也不一样。Bernard经过一系列的实验,认为肝、肾、肺的最佳固定温度是70℃,77℃和77℃,我们的实验认为各组织的固定温度应在60℃左右,时间2-3min为好。2.MW技术固定是组织所需固定液的选择本室张素娟应用临床冰冻切片所剩的新鲜组织如甲状腺、乳腺、淋巴结等组织,实验性小鼠的肝、肾、心、肺和大肠等组织,分别用甲醛、生理盐水进行固定,然后通过HE、网染、AB-PAS等特殊染色以及用免疫组化对几种抗体如CEA、EMA和L26等的标记,对其结果进行比较,结果发现生理盐水固定的组织效果最好。我们的实验也证明生理盐水固定的组织效果为最好,但应注意的是固定组织块不能太厚,时间在3min左右。3.MW技术固定组织固定液的选择固定液的量按传统的固定方法,应是1:20,但在固定液也不能很少,至少不少于250ml。原因之一,液体量少,容易导致沸腾,如此易使液体挥发直至干涸,使组织块破坏严重。其二是液体量多,可保持一定的温度,接受全程的MW辐射,使辐射和固定足时,使固定完全彻底。(二)MW快速石蜡制作法新鲜组织或临床门诊病例的组织(存于福尔马林固定液中)采用本法的以下列为好:1.福尔马林(或生理盐水)MW辐射1.30-2.30min;

2.80%酒精MW1.30-2.30min;

3.90%酒精MW1.30-2.30min;

4.95%酒精MW1.30-2.30min;

5.95%酒精MW1.30-2.30min;

6.100%酒精MW1.30-2.30min;

7.100%酒精MW1.30-2.30min;

8.二甲苯MW1.30-2.30min;

9.浸蜡15-20min左右。应用MW技术快速石蜡切片,必须注意的问题:1.如果组织送至病理科时已用福尔马林固定液浸泡,则固定液仍采用福尔马林固定液,如为新鲜组织,可用生理盐水固定。

2.脱水剂采用由低至高浓度的酒精,以减少组织的过度收缩。

3.如果采用丙酮作脱水剂,应注意组织的收缩,因丙酮的沸点低,在MWO内容易沸腾。

4.脱水剂的量应在200-250ml间,过少容易使液体沸腾直至干涸,过多则达不到所需的温度,影响脱水效果。

5.如需在MWO内浸蜡,应注意脱水盒上的金属片,因为MWO内不能用金属等物品。(三)MW技术的特殊染色法特殊染色法中,有许多方法中的浸染时间,少则几秒种,多则几十个小时,下面是几种特殊染色的时间比较。项目/时间室温浸染时间(min)MW辐射时间(min)Grocott六胺银701.5胶性银AgNOR401.5胶性角-AB40,401.5,1.0PAS-胶性银30,401.0,1.5(四)MW技术脱钙法将骨组织锯成小块,取一烧杯,盛100ml左右的10%硝酸,在其液面上加入20ml左右的液体石蜡,然后于MWO辐射10min左右,直至用大头针能顺利扎入为止。应用MW技术进行骨组织脱钙,既要使组织快速脱钙,又要不使硝酸腐蚀机器,就必须注意如下问题:1.液体不能过少,否则易沸腾导致硝酸溅洒出来。2.液面上加上液体石蜡,以使硝酸分子溅洒出来,同时在MWO内加2杯冷水或冰块,以吸收一些热量,使温度不会过高。(五)MW技术的免疫组化染色法各种免疫组织化学的方法如ABC、LSAB(SP)、EV二步法等,都能用MW技术来进行,在应用MW技术时,必须注意如下问题:1.MW辐射的时间:作为MW技术进行免疫组化染色,其辐射时间各有不同,这应看所使用的MWO型号及其功率,大功率的时间应相对较少。2.MW辐射的温度:应用的MWO如为家用MWO,其温度将不好控制,MW技术免疫组化染色,温度过高,将会导致染色的失败。免疫组化加入的抗体,最多为100μl(这如果用手工操作,至少可作3例)当温度过高时,抗体很容易被蒸发至干涸,此时应在MWO内放置一些冰块或用三角烧杯或瓶装的冷水,以吸收MW辐射产生的热量,使染色能顺利进行,一旦加入抗体被热量所蒸发干涸,染色将告失败,应重新切片,决不能使用干涸的切片,因这种切片的抗原已失活。3.MWO内禁用一切从属和从属性的东西,否则容易操坏仪器。检验病理科禽食盐中毒的病理分析报告1发病情况2021年8月,**镇某鸭场,混群饲养1000羽鸭、300羽鸡,精神萎靡,不愿下水,采食量下降,出现下痢、肿眼、流泪和神经等症状,乡镇兽医先给予50%高渗葡萄糖灌服,维生素治疗,效果不显著,发病禽只逐渐增多,截止剖检当日已死亡900只鸭,180只鸡。鸭死亡率90%,鸡死亡率60%。2临床症状初期病禽精神萎靡,羽毛蓬松,两翼下垂,打堆,腹胀,触诊波动感,眼肿,流泪,采食量下降,下痢,粪便呈黄褐色或黄白色不等,嗉囊柔软扩张,低头时口鼻流出粘性分泌物,呼吸困难,两肢无力,共济失调,行走困难,驱赶时靠两翼扑地移行;后期,病禽消瘦衰弱,肌肉痉挛,昏迷,虚脱,濒死期角弓反张扭颈。3病理剖检剖检十只病死禽,头部肿大至正常大小的两倍,眼睛肿胀,切开有大量固性分泌物,胸肌、腿肌皮下水肿,胶冻样浸润,嗉囊中有大量粘液性液体,气管出血,气管内有栓性分泌物,心包积液,腺胃黏膜充血,小肠充血,出血,肠内空虚水状内容物,肾肿大严重,腹腔内大量积液。4病例分析该鸭场所养鸭为东北品种,第一年饲养,鸭舍、鸡舍为一条小河沟旁边的两栋小平房,鸭子主要活动的河沟水质较差,鸭和鸡混群散养,分多批次引进,大小不一致,同群饲养,饲养密度很大,氨气味道很重,饲养条件恶劣,卫生情况很差,故发病率和死亡率都高。主要的饮水即为河水以及一个年久未用的水井水,无清洁自来水。年久未用的水井水里面的盐分过高,大量高浓度的食盐进入消化道后,刺激胃肠黏膜而发生炎症过程,同时因渗透压的梯度关系吸收肠壁血液循环中的水分,引起严重的腹泻、脱水、积液、水肿,进一步导致全身血液浓缩,机体血液循环障碍,组织相应缺氧,机体的正常代谢功能紊乱,呼吸困难,神经症状。5治疗停止饮用水井水和河水,增设饮水器,给予清洁饮水,可适量加入维生素及电解多维采用多次、少量、间断的方式饮水,以免一次性饮水过量而导致严重脑水肿而使病情加剧,对不能自行饮水的病禽可灌服。灌服5%葡萄糖水以利尿解毒,病情严重者另加0.3%~0.5%醋酸钾溶液。改喂无盐易消化饲料,直至康复为止。加强饲养管理,搞好禽舍卫生消毒,避免继发其他疾病给禽场带来更大的损失。经过治疗,病禽症状逐渐减轻,死亡逐渐减少。但因为该场养殖条件太差,加上治疗时禽群已经死亡严重,故最终存活率不高。建议该场主下次饲养前将禽舍彻底消毒,空舍一段时间,同进同出,鸡、鸭分开饲养,注意禽舍卫生消毒工作,减少饲养密度,保证洁净水的供应,饲料中的盐分控制在0.3%。白细胞分类检测的影响因素探讨影响血液细胞分析仪测定白细胞分类的因素,排除假性增高和假性降低情况,必要时必须血片复核,准确地为临床提供可靠的诊治依据。方法:使用SysmexKX-21血液细胞分析仪及目视显微镜,同时对150例标木进行检查,对比分析。结果:操作不顺利、标木采取后放置时间、温度及上机前标木混匀、振荡时间、力度等均可影响血液细胞分析仪正确对白细胞的分类。结论:血液细胞分析仪并不能完全代替日视显微镜进行白细胞分类,对出现疑有异常白细胞警告报警,应分析原因,日视显微镜下白细胞分炎或重新采血。外周血白细胞分类,是白细胞分析中-.项十分重要的内容,是临床诊断和鉴别诊断的重要指标之一-。近几年来,随若科学技术的不断发展,各种型号血液细胞分析仪,在各级医院检验科已广泛应用,特别是自细胞自动分类和异常白细胞警告提示,改变了目视显微镜分类方法,大大减轻了检验人员的劳动强度,使工作效率明显提高。但是,日前很多检验人员囚对三分类血细胞分析仪性能缺乏足够的认识,误认为血细胞分析仪分类结果,完全可以代替H视显微镜分类结果,而忽视某些结果需耍复片的重要性。为此,本文将对口本**公司生产的KX-21血细胞分析仪白细胞分类,与目视显微镜复片分类,对异常白细胞检出率进行对比分析。找出使用血细胞分析仪检测白细胞分类的影响因索,现探讨如下:一、方法随机抽查门诊患者150例,静脉采血,EDIA-K2抗凝。室温放置15min后,充分混匀,上机测试。同时推血片一张,空温自然|燥,堖氏染色,日视显微镜下进行白细胞分类。将两种方法对异常白细胞检出率进行对比分析。二、结果150例标本经山血液细胞分析仪检测,白细胞分类结果,出现疑有异常白细胞警告报警有20例,报警率(阳性率)13.3%。日视显微镜复片,发现有不同程度异常白细胞12例,阳性率8.0%。20例阳性标本,目视显微镜复片,其中有8例可见有不同程度异常白细胞(有幼稚细胞1例,杆状核粒细胞增多1例,嗜酸粒细胞增多2例,嗜碱粒细胞增多1例,异常淋巴细胞增多3侧),占阳性标本的40%。130例阴性标本(无警告),H视显微镜复片,有2例发现有不同程度的异常白细胞,占阴性标本的1.5%。其中1例为已确诊急性淋巴白血病在化疗中,血液中白细胞总数偏低,血细胞分析仪分类淋巴细胞百分比增高,仪器无异常白细胞警告,显微镜复片,幼稚细胞8%。另1例为发热待查儿童,血液中白细胞总数正常,血细胞分析仪三分类百分比基本正常,没有出现异常白细胞警告,H视显微镜复片,异常淋巴细胞达10%。三、讨论通过以上结果分析,可以看出门诊患者,全血做血液细胞分析,白细胞分类结果,异常白细胞警告较高,假阴性率虽然较低,但也应该引起检验人员的重视。根据几年来的工作体会认为,出现上述问题的主要原因,一是血液细胞分析仪对白细胞分类不同于常规的涂片染色分类|11,常规分类除细胞大小外,还要根据细胞染色反应,核的形态及染色质的着色情况,胞质的着色及颗粒才能确定为某种细胞。三分类血细胞分析仪法,是根据白细胞直方图分类法,只能反映经溶血剂处理后某种体积的颗粒,即某种大小细胞的多少,血不能反映某种特殊细胞的变化,对少见的正常白细胞和异常细胞不能准确识别,不难看出电阻法自细胞分类只不过是较粗的筛选方法[1]。另外,手指采血,出于采血过程中囚操作缓慢、穿刺不顺、组织液混入、混匀不及时等,均会引起自细胞形态变化。对血细胞分析仪分类会产生明显影响,出现异常白细胞假报警,为此,根据文献介绍和大量实验证明[2],使用末梢血在血细胞分析仪上进行检测,影响因索较多,有些参数不能得出准确结果,共重复性及稳定性都不及静脉血标本,应提倡静脉血。血细胞的检测结果,尤其是血小板(PLT)的结果,直接反映试剂的质量。原则.上强调使用与仪器检测原理相匹配的试剂[3]。血液细胞分析仪试剂中的主要试剂,能将红细胞溶解,并能使白细胞的体积发生规律性变化。实际工作中发现,若溶血不完全,出于红细胞碎片冲洗不彻底将引起白细胞计数(WBC)假性增.高。此外,稀释液的渗透压、离子强度等亦可影响检测结果。特别注意的是,试剂应避免污染,否则,杂质微粒会使本底增高,导致最后计数结果偏高,影响自细胞分类结果的准确性。抗凝剂的种类对检测结果影响较大,国际化学标准化委员会(ICSI)推荐用LDTA二.钾抗凝。另外,血液和抗凝剂比例也会影响检测质量。血液比例过高时,由于抗凝剂相对不足,血浆中出现微血块的可能性增加。微凝块可能堵塞仪器影响检测结果,从而无法得出正确的结果[4]。在正常情况下,血液细胞分析仪对血细胞体积的识别有明显的体积界限:WBC35-450f1。根据Coulter原理,仪器只识别颗粒大小而不能识别颗粒的性质。当其体积异常高于或低于仪器设定的阅值时,往往会造成识判。除以上原因外,标本采取后放置时间、温度及上机前标本混匀

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