植物组织中总糖和还原糖含量的测定课件

实验六、植物组织中总糖和还原性糖含量的测定1、实验目的掌握总糖和还原糖含量的测定方法2、实验重点和难点利用蒽酮比色法测定还原糖含量的实验原理多糖在浓硫酸加热条件下会降解为还原糖3.2、蒽酮比色法总糖的提取及双、多糖的酸水解。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量。单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，在可见光620nm处有最大吸收，当糖的量在20一200mg范围内时．其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为620nm，故在此波长下进行比色。

相对密度法折光法旋光法物理法3.3、糖含量测定方法

纸色谱薄层色谱GCHPLCβ—半乳糖脱氢酶测半乳糖、乳糖葡萄糖氧化酶测葡萄糖发酵法——测不可发酵糖重量法——测果胶、纤维素、膳食纤维素

色谱法

酶法特点是试剂用量少，操作和计算都比较简便、快速，滴定终点明显。适用于各类食品中还原糖的测定。但测定酱油、深色果汁等样品时，因色素干扰，滴定终点常常模糊不清，影响准确性。本法是国家标准分析方法。蓝—爱农（Lane—Eynon)法比直接法的试剂中少亚铁氰化钾，终点为红色。萨氏(Somogyi)法将一定量的样液与过量的碱性铜盐溶液共热，样液中的还原糖定量地将二价铜还原为氧化亚铜，生成的氧化亚铜在酸性条件下溶解为一价铜离子，并能定量地消耗游离碘，碘被还原为碘化物，而一价铜被氧化为二价铜。剩余的碘用硫代硫酸钠标准溶液滴定，同时做空白试验，根据硫代硫酸钠标准溶液消耗量可求出与一价铜反应的碘量，从而计算出样品中还原糖含量。各步反应式如下：2Cu++I2=2Cu2++2I-I2+2Na2S2O3=Na2S4O6+2NaI3,5-二硝基水杨酸比色法

还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸(黄色）则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。碘量法

(1)原理

样品经处理后，取一定量样液于碘量瓶中，加入一定量过量的碘液和过量的氢氧化钠溶液，样液中的醛糖在碱性条件下被碘氧化为醛糖酸钠，

由于反应液中碘和氢氧化钠都是过量的，两者作用生成次碘酸钠残留在反应液中，当加入盐酸使反应液呈酸性时，析出碘，用硫代硫酸钠标准溶液滴定析出的碘，则可计算出氧化醛糖消耗的碘量，从而计算出样液中醛糖的含量。醛糖+I2+3NaOH=醛糖酸钠+2NaI+2H2OI2+2NaOH=NaIO+NaI+H2ONaIO+NaI+2HCl=I2+2NaCl+H2O

(2)适用范围本法用于醛糖和酮糖共存时单独测定醛糖。适用于各类食品，如硬糖、异构糖、果汁等样品中葡萄糖的测定。4、操作步骤4.1、制定标准曲线管号012345标准葡萄糖溶液/mL00.10.20.30.40.5水1.00.90.80.70.60.5葡萄糖浓度/ug/mL01020304050冰浴5mins冰浴条件下加蒽酮试剂/mL4.04.04.04.04.04.0摇匀，沸水浴10mins，取出，用自来水（或冰浴）冷却，直到透明，目的是中止反应，室温放10mins在620nm处测吸光值4.2、植物组织中总糖与还原糖溶液的获取(1)还原糖：30mL水冲研钵2-3次1g土豆研成匀浆3mL水三角瓶中50℃水浴0.5h冷却定到100mL混匀,过滤取滤液5mL,定容到100mL(2)总糖：1g土豆研成匀浆3mL水三角瓶中沸水浴0.5h冷却,用NaOH中和,加