食品工程毕业论文-蘑菇多糖的提取

51前言蘑菇多糖对正常机体并无免疫促进作用，但能使荷瘤式或感染后的机体的免疫应答得以提高。其制剂在动物体内筛选试验中未见直接抗癌效果，却明显促进体外淋巴细胞培养物的转化作用。曾经发现胸腺切除的动物注射抗淋巴细胞血清后，可削弱蘑菇多糖的抗肿瘤活性，且它的作用还能被巨噬细胞抑制剂角叉菜胶和硅胶所削弱。所以说，蘑菇多糖是一种胸腺依赖型T细胞导向并有巨噬细胞参与的特殊免疫佐剂。它能识别脾脏及肝脏中抗原的巨噬细胞，促进淋巴细胞活化因子的产生，释放各种辅助性T细胞因子，增强宿主腹腔巨噬细胞吞噬率，当宿主机体注射蘑菇多糖数小时后，一些具生理活性的血清因子如急性期蛋白诱导因子、血管扩张和出血诱导因子、IL-1生成诱导因子、IL3和集落刺激因子的水平到达峰值。这些因子作用于淋巴细胞、肝细胞、血管内皮细胞后，产生许多有效免疫应答，同时导致胸腺内的前体T细胞趋于成熟、分化、增殖并向释放。2．材料与方法2.1试验材料与试剂原料：蘑菇试剂：蒸馏水，葡萄糖，苯酚，铝片，3NaHCO固体，浓硫酸，95%乙醇稀盐酸，PH试纸，复合酶〔木瓜蛋白酶：纤维素酶=2：1〕2.2主要仪器与设备设备和仪器：100ml容量瓶，6个50ml容量瓶，玻璃棒，蒸馏装置〔温度计、沸石、三口烧瓶、冷凝管〕，烧杯假设干，锥形瓶假设干，棕色瓶一个，抽滤瓶，1、2、5、10ml吸液管，电子天平，真空枯燥箱，恒温水浴锅，紫外分光光度计，粉碎机，40、60、80、100目的筛子，DL700-0.55×1.5超高压等静压机〔上海大隆高压设备厂〕，真空泵，THZ-82A台式恒温振荡器，台式离心机2.2.1测定方法1、标准葡萄糖溶液的配制精密称取105℃枯燥至恒重的葡萄糖100.0mg，加蒸馏水溶解并定容于100ml容量瓶中，摇匀，配成浓度为1mg/ml标准葡萄糖溶液备用。2、5%苯酚试剂的配制。苯酚水浴加热溶解后称取100g，加铝片0.1g(先用1：6的盐酸除去铝片外表氧化铝后，再称量使用)，参加碳酸氢钠30g，蒸馏，收集178-182℃的馏分，取馏出液7.5g，参加蒸馏水150mL，得5.0％的苯酚溶液，置于棕色瓶中备用。3、标准曲线绘制以葡萄糖作为标准品，采用苯酚—硫酸比色法，用紫外分光光度计测定多糖含量。精密吸取已配制的葡萄糖标准品溶液0.5，1，1.5，2，2.5，3ml置于6个50ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度线，摇匀。精密吸取2ml，分别参加5%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速参加5ml浓硫酸，振摇5min，置沸水浴上加热15min，然后置冷水浴中冷却30min，以溶剂蒸馏水为空白作对照，在400～600nm内扫描，最大吸收波长为490nm。在490nm处，测吸光值，以浓度为纵坐标，吸光值为横坐标，绘制标准曲线，得出葡萄糖标准品浓度Y〔ug/ml〕与吸光值X的回归方程：Y=15.336X-0.0298，R2=0.9997。在2.5～15.0ug/ml范围内呈线性关系2.2.2蘑菇多糖的提取流程蘑菇多糖属于极性大分子化合物，其特定的结构与免疫活性密切相关。一般认为:增加多糖溶解度有利于提高其生理活性;中等相对分子质量多糖的活性超过过高的或过低的相对分子质量多糖;可溶于热水的多糖被证实有抗肿瘤活性。目前蘑菇多糖的提取多采用热水及稀碱溶液，防止在强酸、碱溶液中进行，否那么极易造成多糖中糖苷键断裂及构象变化。常用的别离纯化方法大致经过沸水浸提、乙醇沉淀、透析及柱层析等步骤。成分功能蘑菇多糖是从优质蘑菇子实体中提取的有效活性成分，蘑菇多糖中的活性成分是具有分支的β-(1-3)-D-葡聚糖，主链由β-(1-3)-连接的葡萄糖基组成，沿主链随机分布着由β-(1-6)连接的葡萄糖基，呈梳状结构。研究说明蘑菇的活性多糖成分β-(1-3)-D-葡聚糖对抑制异源的、同源的、甚至是遗传性的肿瘤都有效。分子式:(c6h10o5)n，分子量:40~80万。蘑菇的主要成分是多糖类和不饱和脂肪酸，还含有大量的可转变为维生素D的麦角甾醇和菌甾醇，经热水提取的蘑菇多糖可调节人休内有免疫功能的T细胞活性，可降低甲基胆蒽诱发肿瘤的能力。香菇对癌细胞有强烈的抑制作用，对小白鼠肉瘤180的抑制率为97.5%，对艾氏癌的抑制率为80%。蘑菇还含有双链核糖核酸，能诱导产生干扰素，具有抗病毒能力。功能主治:不能手术或复发性胃癌、肝癌、膀胱癌，使用本品能缓解病症，提高病人免疫功能，纠正微量元素失调。蘑菇含有水溶性鲜味物质，可用作食品调味品，其主要成分是5'-乌苷酸等核酸成分。香味成分主要蘑菇酸分解生成的香菇精(lentionione)。所以蘑菇是人们重要的食用、药用菌和调。结果与分析3.1热水法提取蘑菇多糖的方案原料：蘑菇。试剂：0.5%NaOH，95%乙醇，蒸馏水。设备和仪器：烧杯〔假设干〕，玻璃棒，温度计，锥形瓶〔假设干〕，漏斗，水浴锅，称量天平，THZ-82A台式恒温振荡器,台式离心机，紫外线分光光度计。3.1.1提取的方法：1、粉碎度对提取率的影响分别称取40、60、80、100目的蘑菇粉5g，放入到250mL的锥形瓶中，参加蒸馏水100ml，混合均匀后置于90℃水浴锅中，水浴提取2h，提取两次，提取结束，冷却至室温，将两次提取液混合后过滤，取2ml滤液分别参加5%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速参加5ml浓硫酸，振摇5min，置沸水浴上加热15min，然后置冷水浴中冷却30min，即以溶剂蒸馏水为空白作对照，在490nm处用分光光度计测吸光值，计算多糖提取率，得到粉碎度与提取率的关系。3.1.2提取的步骤：2、料液比对提取率的影响称取80目的蘑菇粉5g六份，放入到250mL的锥形瓶中，分别参加蒸馏水75、100、125、150、175、200ml，混合均匀后置于90℃水浴锅中，水浴提取2h，提取两次，提取结束，冷却至室温，将两次提取液混合后过滤，取2ml滤液分别参加5%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速参加5ml浓硫酸，振摇5min，置沸水浴上加热15min，然后置冷水浴中冷却30min，即以溶剂蒸馏水为空白作对照，在490nm处用分光光度计测吸光值，计算多糖提取率，得到粉碎度与提取率的关系。3、提取温度对提取率的影响称取80目的蘑菇粉5g，放入到250mL的锥形瓶中，参加蒸馏水100ml，混合均匀后置于65、75、80、85、90、95、100℃水浴锅中，水浴提取2h，提取两次，提取结束，冷却至室温，将两次提取液混合后过滤，取2ml滤液分别参加5%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速参加5ml浓硫酸，振摇5min，置沸水浴上加热15min，然后置冷水浴中冷却30min，即以溶剂蒸馏水为空白作对照，在490nm处用分光光度计测吸光值，计算多糖提取率，得到粉碎度与提取率的关系。4、提取时间对提取率的影响称取80目的蘑菇粉5g五份，放入到250mL的锥形瓶中，参加蒸馏水100ml，混合均匀后置于90℃水浴锅中，水浴提取2、3、4、5、6h，提取结束，冷却至室温，将两次提取液混合后过滤，取2ml滤液分别参加5%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速参加5ml浓硫酸，振摇5min，置沸水浴上加热15min，然后置冷水浴中冷却30min，即以溶剂蒸馏水为空白作对照，在490nm处用分光光度计测吸光值，计算多糖提取率，得到粉碎度与提取率的关系。5、提取次数对提取率的影响称取80目的蘑菇粉5g四份，放入到250mL的锥形瓶中，参加蒸馏水100ml，混合均匀后置于90℃水浴锅中，水浴提取2h，提取1、2、3、4次，提取结束，冷却至室温，将两次提取液混合后过滤，取2ml滤液分别参加5%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速参加5ml浓硫酸，振摇5min，置沸水浴上加热15min，然后置冷水浴中冷却30min，即以溶剂蒸馏水为空白作对照，在490nm处用分光光度计测吸光值，计算多糖提取率，得到粉碎度与提取率的关系。3.2多糖提取率的计算多糖=总糖-复原糖多糖提取率〔%〕=多糖量/子实体干重*100%讨论4.1正交实验确定最正确提取工艺4.1.1正交实验确定微波辅助热水㓎提法最正确提取工艺影响微波辅助热水提取蘑菇多糖提起率的因素主要料液化比、㓎提时间、微波处理时间、㓎提温度等，以下采用正交法确定微波辅助热水提取蘑菇多糖的最适条件，结果见表1。通过以下正交实验可以得出微波辅助热水㓎提法最正确提取工艺条件。表1微波辅助热水提取蘑菇多糖正交实验结果如图表1由极差分析结果，影响蘑菇多糖提取率因素的主次顺序为：D>C>B>A,即㓎提温度>微波处理时间>㓎提时间>液化比，最优水平为A3B2C2D2微波辅助提取蘑菇多糖最正确提取条件为：料液比1：25，㓎提温度80℃，㓎提时间3H，在此条件下蘑菇多糖提取得率可达7.70%。4.2结论通过微波辅助热水提取法㓎提蘑菇多糖的单因素实验说明，当㓎提的料液比为1:20-1:30，㓎提时间为3h-5h,㓎提温度为80℃-85℃，微波辅助时间为3min-4min，提取次数为1次时，蘑菇多糖的提取效果较好。在此根底上，对料液比、㓎提时间、微波处理时间、㓎提温度4个因素在3个水平上进行了实验。结果说明，微波辅助提取蘑菇多糖最正确提取条件为：料液比1：25，㓎提温度80℃，㓎提时间3H，在此条件下蘑菇多糖提取得率可达7.70%。参考文献[1]李珺;钟耀广;刘长江;;蘑菇多糖的别离纯化方法研究进展[J];北方园艺;2023年12期.[2]蒋志国;杜琪珍;盛利燚;;制备型高速逆流色谱别离纯化蘑菇多糖[J];分析化学;2023年03期.[3]李艳,王兆梅,郭祀远;生物活性多糖高级结构的研究方法进展[J];广东化工;2005年08期.[4]贺正芳，食品的酶促褐变及其控制[J].广州食品工业科技,2023(4):18~2[5]赵晨霞，果蔬贮运与加工[M].中国农业出版社,2007,5.175~176.[6]杨建民;;蘑菇多糖的研究进展[J];安徽农学通报;2006年03期.[7]衣美艳;范秀萍;吴红棉;胡雪琼;;马氏珠母贝各组织及其糖胺聚糖中四种重金属含量分析[A];广东省食品学会第六次会员大会暨学术研讨会论文集[C];2023年.[8]禹兴海;傅正生;陈洁;冯光华;;短梗霉多糖别离纯化和鉴定[A];首届中国中西部地区色谱学术交流会暨仪器展览会论文集[C];2006年.[9]陈义勇;桦褐孔菌多糖纯化、结构及其抗肿瘤机制研究[D];江南大学;2023年[10]曹磊;四种真菌多糖抗氧化和抗肿瘤及免疫调节活性的研究[D];郑州大学;2023年[11]王国佳;曹红;;蘑菇多糖的研究进展[J];解放军药学学报;2023年05期[12]韦丁;陈健;;蘑菇多糖含量测定过程中加样回收率的比拟[J];食品研究与开发;2023年10期[13]王国佳;曹红;;蘑菇多糖中药注射液含量测定方法的改良[J];解放军药学学报;2023年02期[14]王一心,李梅君;蘑菇多糖的药理作用[J];大理学院学报;2002年04期[15]张虎,李凯;微波辅助浸提香菇多糖[J];大连民族学院学报;2000年03期[16]卢成英;李国章;黄早成;郭晓辉;曹庸;;蘑菇多糖提取纯化研究[J];中国林副特产;2006年04期[17]李铁林;吴昌贤;蒋挺大;张燕霞;范晓;;糖和糖醇的气相色谱分析Ⅰ.单糖三甲基硅醚衍生物的气相色谱分析[J];分析化学;1981年03期[18]唐晓丹;张伟;丛景香;王绍艳;;黄蘑多糖提取工艺及纯化研究[J];食品科技;2023年03期[19]张晓娟;唐洁;梁引库;张林生;;茯苓多糖的提取纯化及应用研究进展[J];时珍国医国药;2023年12期[20]曾立;尹文清;王安伟;周中流;;正交试验优选定心藤中总黄酮提取与纯化工艺[J];中国药房;2023年06期致谢通过这次的论文让我学到了更多的知识，非常感谢学院三年来对我的辛苦培育，让我在大学这三年来