流感项目课件

流感项目文献调研报告2010年1月26日流行病学信息呼吸道感染是临床常见疾病，急性上呼吸道感染90％以上是由病毒引起。最常见的传染病，发病率高、传播快，流行广泛，对人民健康危害极大。感冒大约占所有人类疾病的1/4左右，人均年发病5～6次。所有急性传染病中感冒的发病率占第一位。流行性感冒危害性最大，可引起局部乃至世界性范围的大流行。近100年来人类经历了三次流感大流行：1918～1919，“西班牙流感”，引起很高的流感病毒死亡率，在美国死亡人数超过50万人。在全球死亡人数为4000～5000万人。此病毒的毒力高，发病快。死者多为年轻的健康成人。1957～1958年，“亚洲流感”，在美国死亡人数为7万人。1968～1969年，“香港流感”，在美国有约3.4万人死亡，迄今还在全球流行。2009年4月在墨西哥首先发生甲型H1N1流感病例，并迅速出现世界性蔓延。截止2009年12月6日，中国境内31个省份报告甲型H1N1流感确诊病例9737例，住院治疗3225例，死亡125人。

流感病毒属于正黏病毒科RNA病毒。根据其核蛋白的抗原性可以分为三类:甲型流感病毒（InfluenzaAvirus），又称A型流感病毒乙型流感病毒（InfluenzaBvirus），又称B型流感病毒丙型流感病毒（InfluenzaCvirus），又称C型流感病毒。有些流感病毒引起严重的疾病大多发生于家禽方面，而人类缺很少出现。但经过鸟类和哺乳动物的传播和变异，这可能导致疫情或人类流感大面积传播。命名原则根据世界卫生组织1980年通过的流感病毒毒株命名法修正案，流感毒株的命名包含6个要素：型别/宿主/分离地区/毒株序号/分离年份(HnNn)，例如A/swine/Lowa/15/30(H1N1)表示的是核蛋白为A型的，1930年在lowa分离的以猪为宿主的H1N1亚型流感病毒毒株，其毒株序号为15，这也是人类分离的第一支流感病毒毒株。甲型流感病毒亚型分类依据：HA和NA。16种H型别(H1～H16)和9种N型别(N1～N9)。H和N的组合不同，病毒的毒性和传播速度也不相同。病毒基因变异H1、H2、H3和N1、N2亚型常见。抗原飘移。RNA缺乏校正读码酶，病毒RNA复制时大约每10000个核苷酸会出现1个错误，形成新的突变。基因重配。同一细胞感染2种或2种以上流感病毒亚型时，就可能出现RNA片段的混合或重配，从而导致病毒基因组大的改变，形成抗原转变。新病毒会感染新的宿主或轻松克服原有宿主对其产生的免疫力，从而可能形成流感暴发流行。甲型流感病毒有5N1,H7N2,H1N7,H7N3,H13N6,H5N9,H11N6,H3N8,H9N2,H5N2,H4N8,H10N7,H2N2,H8N4,H14N5,H6N5,H12N5等变种。根据宿主，主要有以下变种：禽流感，人类流感，猪流感，马流感，狗流感。病毒基因组：8个单体（非配对）RNA链，编码11个蛋白(HA,NA,NP,M1,M2,NS1,NEP,PA,PB1,PB1-F2,PB2)。总基因组大小是13588bp。分割性质基因组允许整个基因在不同的病毒载体的细胞同时存在。呼吸道病毒感染是临床最常见的疾病之一，且病原学复杂。多种病毒具有感染力强、传播快、潜伏期短、发病急等特点，及时、准确识别病原体不仅是确诊依据，也是合理选择治疗方案的基础。甲型H1N1流感是由一种新型流感病毒引起的急性、人畜共患呼吸道传染性疾病。。目前，正式上市的抗流感药物大体分为两类：M2离子通道阻断剂和NA抑制剂。金刚烷胺(Amantadine)和金刚乙胺(Rimantadine)可有效抑制甲型流感病毒株的复制。神经氨酸酶抑制剂是通过选择性地抑制A、B型流感病毒的神经氨酸酶，使病毒难以释放，并促进已释放的病毒相互凝聚，继而死亡。神经氨酸酶抑制剂：扎那米韦（zanzmivir）和奥司他韦（Oseltamivir）两种药物，因为流感病毒的高频率变异，耐药性毒株的比例呈明显上升的趋势。目前已经测序的甲型流感病毒基因组共有5811个，共有421个基因型。其中[A,D,B,3A,A,2A,B,1A]（基因型H3N2）包括1899个基因组，[K,G,D,5J,F,1J,F,1E]（基因型H5N1）包括1067个基因组，[A,A,B,1B,A,1A,B,1A]（基因型H1N1）包括757个基因组。[K,G,E,9C,F,2B,F,1E]（基因型H9N2）包括80个基因组[C,I,G,3F,C,8B,E,1D]（基因型H3N8）包括83个基因组[C,F,H,7F,H,2G,E,2B]（基因型H7N2）包括103个基因组，宿主非人类。[B,A,C,1A,A,1B,A,1A]（基因型H1N1）包括108个基因组，宿主非人类。[C,F,E,7F,H,2G,E,2B]（基因型H7N2）包括1899个基因组H109序列比对结果H1序列与引物比对结果H3基因与引物序列比对H5基因与引物序列比对A流感病毒M基因与引物比对B流感病毒M基因与引物比对中国CDC使用软件中国CDC使用引物序列国家流感中心推荐的标准操作规程第一章基本生物学实验SOP

第二章标本采集SOP

第三章病毒分离SOP

第四章病毒鉴定SOP

第五章核酸检测SOP

血清学检测SOP

动物学实验SOP耐药性检测SOP

第九章其他SOP

第四章病毒鉴定流感/禽流感病毒红细胞凝集试验红细胞凝集抑制试验鉴定流感/禽流感病毒方法流感病毒神经氨酸酶活性试验及其活性抑制试验禽流感H5N1病毒感染间接免疫荧光检测技第五章核酸检测禽流感病毒RT-PCR检测人禽流感实时荧光定量PCR检测禽流感病毒H5N1NASBA检测分子鉴别诊断技术禽流感病毒H5N1NASBA检测核酸序列依赖性扩增（Nuclearacidsequence-basedamplification，NASBA）：快速等温核酸扩增，实时观测结果。主要原材料：AMV逆转录酶、噬菌体T7RNA多聚酶、核糖核酸酶H、两种特别设计的特异性寡核苷酸引物和分子信标探针共同协作而完成。样品检测信号值（WTsignal）：在扩增过程中分子信标探针与靶基因发生特异性结合后，产生荧光信号的荧光信号被收集经软件转换后的强度值，即WTsignal。判断阈值（threshold）：在NASBA反应过程中会产生荧光信号，阈值是判断阴性或阳性结果的荧光信号界线值，样本荧光信号≥阈值者为阳性，反之为阴性。分子鉴别诊断技术.分子鉴别诊断技术（MolecularDifferentialDiagnosis,MDD）原理：靶序列富集多重PCR（TargetenrichedmultiplexPCR，Tem-PCR）和MultipleAnalysisProfiling（xMAP）技术有机结合。杂交反应过程分子在颜色编码的微球表面进行反应，对于每一种病原体，靶序列特异的捕获探针与一组颜色编码的微球之间形成特异的共价结合。在杂交悬浮体系中，标记的PCR产物被结合有微球的探针捕获。结果判定：Luminex100分析样品时，经过一套微流体系统检测装置，红色激光识别病原体，绿色激光检测杂交信号，即MFI值，根据MFI值的强弱从而显示特定病原体的有无。SFDA批准的产品1.甲型流感病毒抗原检测试剂盒(Dot-ELISA法)(北京万泰生物药业股份有限公司)2.甲型H1N1流感病毒(2009)RNA检测试剂盒(荧光PCR法)(北京金豪制药股份有限公司)3.甲型H1N1流感病毒(2009)RNA检测试剂盒(PCR-荧光探针法)(中山大学达安基因股份有限公司)4.甲型流感病毒核酸诊断试剂盒(PCR-荧光法)Inf.AFQ-PCRKIT(广州华银医药科技有限公司)5.乙型流感病毒核酸诊断试剂盒(PCR-荧光法)Inf.BFQ-PCRKIT(广州华银医药科技有限公司)6.甲型流感病毒抗原诊断试剂盒(酶联免疫法)Inf.AELISAKIT(广州华银医药科技有限公司)7.乙型流感病毒抗原诊断试剂盒(酶联免疫法)Inf.BELISAKIT(广州华银医药科技有限公司)病毒诊断方法专利（免疫）禽流感免疫胶体金诊断试纸条和测试卡鉴别诊断禽流感自然感染鸡群酶联免疫吸附试验的方法禽流感病毒抗原检测方法及其金标快速诊断试剂盒和制备方法一种重组甲型H1N1流感病毒非结构蛋白NS1的原核表达、纯化及其检测方法的建立一种禽流感病毒H5亚型乳胶凝集检测试剂盒及应用鉴别诊断禽流感感染鸡群的酶联免疫吸附试验方法一种鸡禽流感疫苗免疫与病毒野毒感染的胶体金免疫层析快速鉴别诊断试剂盒及应用重组猪流感病毒NP抗原、其制备方法及在诊断中的应用检测和诊断流感病毒的筛选方法一种检测H5N1亚型禽流感病毒的方法及其专用试剂盒一种能同时检测人类和禽类禽流感病毒感染的生物芯片方法

一种禽流感病毒乳胶凝集检测试剂盒及应用

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