动物细胞融合与单克隆抗体制备课件

杂种植株筛选融合AB的原生质体再生出细胞壁脱分化愈伤组织再分化植物细胞的融合植物组织培养植物细胞A原生质体B原生质体A杂种细胞AB去壁去壁人工诱导方法？促进融合的方法？融合完成的标志植物细胞B植物体细胞杂交技术过程原理？原理？动物细胞融合与单克隆抗体一、动物细胞融合1、动物融合的过程①.细胞融合的概念②.诱导动物细胞融合的方法③.意义思考题1、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？酶解法，如纤维素酶或果胶酶2、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？无需，因为动物细胞无细胞壁3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？离心、电激等物理方法；PEG等化学方法4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？能还可以利用灭活的病毒进行诱导5、植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？不能不同DNA的两个细胞灭活病毒诱导细胞融合融合后的细胞进行有丝分裂1、动物细胞融合过程4、原理细胞膜的流动性5、最有价值的应用制备单克隆抗体3、过程不同DNA的两个细胞灭活的病毒PEG等杂交细胞细胞融合完成的标志:细胞核融合成一个核动物细胞融合杂种细胞愈伤组织杂种植株植物细胞A植物细胞B原生质体A原生质体B植物体细胞杂交去壁原生质体融合植物组织培养杂种细胞物理法化学法生物法：灭活的病毒常用方法动物细胞A动物细胞B

1.能使动物细胞融合的特有的诱导方法是A．离心B．灭活的病毒C．电刺激D．振动

2.动物细胞融合的目的中最重要的是A．克服远源杂交不亲和B．制备单克隆抗体C．培育新物种D．生产杂种细胞提问？1.抗体是由何种细胞产生的？２、一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？３、一种抗原侵入机体之后，引起机体免疫反应产生的抗体只有一种吗？二、单克隆抗体

每个Ｂ淋巴细胞只能分泌一种抗体，由一个Ｂ淋巴细胞增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份是单一的。浆细胞一种设计方案：一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖杂交细胞二、单克隆抗体为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？思考：

因为B淋巴细胞具有分泌特异性抗体的能力，而骨髓瘤细胞具有在体外培养条件下大量增殖的本领，所以由某种B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞，能够在体外大量繁殖，并且产生特定的单克隆抗体。B淋巴细胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合培养液中细胞有几种类型？（只考虑两两融合）融合细胞几种类型？5种B淋巴细胞、骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞B淋巴细胞---B淋巴细胞B淋巴细胞---骨髓瘤细胞3种骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞B淋巴细胞---B淋巴细胞B淋巴细胞---骨髓瘤细胞多种杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞单克隆抗体注射到小鼠体内体外培养2、单克隆抗体的制备过程第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。杂交瘤细胞有何特点？特异性强，灵敏度高2.制备过程：诱导其融合的方法有哪些？注射抗原的目的是什么大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法融合后培养液中有几种细胞两次筛选的原因2、单克隆抗体制备过程B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择培养杂交瘤细胞（B-瘤细胞）克隆化培养抗体检测产生所需抗体的杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体课堂小结单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？动物细胞融合技术动物细胞培养技术B淋巴细胞骨髓瘤细胞4.杂交瘤细胞的特点:_______________________________既能无限增殖，又能分泌特异性抗体5.首次筛选是为了获得_____________

第二次筛选时为了获得_______________________________杂交瘤细胞既能无限增殖，又能分泌所需特异性抗体的杂交瘤细胞第一步：从一只小鼠体内提取T淋巴细胞，然后与骨髓瘤细胞诱导融合。第二步：再用普通培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死去。第三步：对上述经选择性培养的杂交瘤细胞直接在体外条件下做大规模培养，这样从细胞培养液中就可以提出破伤风杆菌单克隆抗体。实验评价1、已注入过灭活破伤风杆菌的小鼠2、B淋巴细胞3、选择培养基4、必须经过专一抗体阳性检验下面是某同学根据单克隆抗体技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。指出不足之处。比较植物体细胞杂交和单克隆抗体的制备比较项目植物体细胞杂交单克隆抗体的制备原理融合前处理促融方法

用途过程第一步第二步第三步第四步细胞膜的流动性、细胞的全能性膜的流动性、细胞增殖酶解法去壁小鼠免疫处理、细胞分散物理法化学法物理、化学、生物法原生质体的制备融合亲本细胞的准备原生质体的融合与筛选动物细胞融合与两次筛选杂种细胞的形成与培养产特定抗体的杂交瘤细胞培养杂种植株的鉴定单克隆抗体的分离提纯单抗有助于疾病的诊断、治疗、预防

获得具优良性状的杂种植株4、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是A.经过免疫的B淋巴细胞B.没经过免疫的T淋巴细胞

C.经过免疫的T淋巴细胞D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞6下图是单克隆抗体制备过程示意图，据图回答：（1）图中A过程是从小鼠的脾脏中取得__________细胞，该细胞能够产生___________。从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_____________类物质。（2）B过程是一个____________过程，该过程的进行需要灭活的______或_____________的诱导。免疫的B淋巴特异性抗体特定抗原细胞融合

病毒

聚乙二醇

7．右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：

（1）该方案能达到预期效果吗？

。原因是

.。

（2）图中②为

过程，常用

作为诱导剂。该细胞继承了

，因此不仅能分泌

，还能

。

（3）该方案的目的是

。

不能

无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞.细胞融合

灭