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140例高脂血症患者胆固醇酯转运蛋白基因TaqIB多态性与他汀类药物的调脂效果

作者：张鹏辉，李果明，王焱，郑克勤 作者单位：1.广东医学院医学遗传学研究室；2.广东医学院附属医院心内科，广东湛江524023【摘要】目的探讨胆固醇酯转运蛋白(cholesterylestertransferprotein，CETP)基因TaqIB多态性与粤西地区高脂血症患者他汀类药物治疗效果之间的关系。方法PCR扩增140例高脂血症患者TaqIB多态位点相应的DNA片段，经限制性内切酶消化并电泳后确定基因型，用SPSS10.0软件采用ANOVA检验进行统计学分析。结果TaqIB多态B1B2基因型个体的甘油三酯(triglyceride,TG)基线水平比B2B2基因型个体明显高出0.65mmol/L(P=0.041)，B2B2基因型个体的高密度脂蛋白胆固醇(highdensitylipoprotein,HDLC)基线水平分别比B1B1个体和B1B2个体明显高出0.58mmol/L(P=0.000)和0.62mmol/L(P=0.000)。高脂血症患者经辛伐他汀治疗4周后HDLC和低密度脂蛋白胆固醇(lowdensitylipoproteincholesterol,LDLC)水平变化量在TaqIB多态位点不同基因型间的3组间差异有统计学意义(F=6.120，P=0.003；F=3.925，P=0.022)。PostHoc多重比较结果表明，B1B2基因型个体的HDLC水平升高值较B2B2基因型个体明显增多0.24mmol/L(P=0.003)，B1B2基因型个体LDLC水平降低值比B1B1个体明显减少0.25mmol/L(P=0.024)。结论B1B1和B1B2基因型个体他汀类药物调脂效果较好，而B2B2个体对他汀类药物治疗反应较弱，胆固醇酯转运蛋白基因TaqIB多态可能是预测中国粤西地区高脂血症患者他汀类药物调脂效果个体化差异的标记物之一，具有一定的临床意义。【关键词】胆固醇酯转运蛋白基因；单核苷酸多态性；他汀类药物；调脂效果TaqIBpolymorphisminCETPgenein140hyperlipemiapatientsandlipidregulatingeffectsofstatinsZHANGPenghui,LIGuoming,WANGYan,ZHENGKeqin(1.DepartmentofMedicalGenetics;2.DepartmentofCardiology,theAffiliatedHospitalofGuangdongMedicalCollege,Zhanjiang524023，China)Abstract:ObjectiveToprobethecorrelationbetweenlipidregulatingeffectsofstatinsandTaqIBpolymorphisminCETPgeneinhyperlipemiapatients.MethodsThetargetDNAfragmentsofTaqIBpolymorphismwereamplifiedandanalyzedbyPCRRFLPtechniquein140hyperlipemiapatients.ResultsTheTGbaselinelevelinB1B2individualswas0.65mmol/LhigherthanthoseinB2B2individuals(P=0.041).ThebaselineHDLClevelinB2B2individualswas0.58mmol/LhigherthaninB1B1individuals(P=0.000),andwas0.62mmol/LhigherthaninB1B2individuals(P=0.000).Aftersimvastatintherapyfor4weeks,theHDLClevelinB1B2individualswere0.24mmol/LhigherthanthoseinB2B2individuals(P=0.003).LDLClevelthoseinB1B2individualswere0.25mmol/LlowerthanthoseinB1B1individuals(P=0.024).ConclusionTheB1B1andtheB1B2genotypesoftheCETPTaqIBpolymorphismmightresponsebettertosimvastatintherapy,whiletheB2B2carriersresponselittletosimvastatintherapy.CETPTaqIBpolymorphismisoneofthemarkerstopredicttheindividualdifferenceinlipidregulatingeffectsofstatinsinhyperlipemiapatientsinthewestofGuangdongprovince.Keywords:cholesterylestertransferproteingene;singlenucleotidepolymorphism;statins;lipidregulatingeffect胆固醇酯转运蛋白(cholesterylestertransferprotein，CETP)基因作为参与细胞胆固醇代谢过程的一个关键成员，定位于16号染色体长臂，有16个外显子和15个内含子，对低密度脂蛋白胆固醇(lowdensitylipoproteincholesterol,LDLC)的代谢起着重要作用，是血清LDLC水平的主要决定因素之一，也是动脉粥样硬化的易感基因之一［1］。近年来陆续有研究［23］报道CETP基因的单核苷酸多态与他汀类药物的调脂效果及冠心病治疗效果的关系，揭示CETP基因多态在胆固醇代谢以及对调脂药物反应中的重要作用。目前TaqIB是CETP基因中研究较多的一个多态，该多态位于CETP基因内含子1中，可在其内形成一个TaqI限制性酶切位点（TaqI多态性），根据这一限制性酶切位点是否存在，分为B1等位基因（存在TaqIB限制性酶切位点）、B2等位基因（不存在TaqIB酶切位点）。本研究分析了140例高脂血症患者CETP基因TaqIB多态性与患者基线血脂水平及他汀类药物治疗效果的关系。1对象与方法1.1研究对象2006年3月至2008年3月在广东医学院附属医院心血管内科2区住院的无血缘关系的140例高脂血症患者［总胆固醇（TC）35.69mmol/L,LDLC33.64mmol/L］，其中男75例，女65例，均为汉族，年龄为（66.49±10.96）岁，最近1月内未服用调脂药物，且经询问病史、体检、心电图及胸部X线摄片等检查排除其他疾病。收集上述病例调脂治疗前的全套血脂检测结果以及其他有关临床资料、他汀类药物（辛伐他汀，20mg/d）调脂治疗4周后的全套血脂检测结果。1.2血浆脂类水平检测研究对象均于禁食12h后取外周血5mL，所有检测均由广东医学院附属医院检验科使用BECKMANCOULTER公司试剂盒并在BECKMANCOULTERSYNCHRONLX20生化检测仪上进行。1.3多态基因型的确定PCR扩增用盐析法提取基因组DNA。扩增引物碱基序列为正义：5'CACTAGCCCAGAGAGAGAGGAGTGCC 3'；反义：5'CTGAGCCCAGCCGCACACTAAC3'。PCR反应体积为50pL，其中含宝生物工程（大连）有限公司生产的PrimeSTARTMHS混合液（内含高保真扩增酶、buffer、dNTP、Mg2+）25pL、上下游引物25pmol/L各0.5pL（终浓度0.25pmol/L）、模板DNA70〜100ng2pL、灭菌水22pL。PCR扩增反应参数为：冷启动，94°C预变性5min，98°C变性10s，60°C退火15s，72C延伸30s，30个循环，最后72C延伸10min。RFLP分析PCR产物10pL，宝生物工程（大连）有限公司生产的TaqI限制性内切酶2pL，10Xbuffer2pL，0.1%BSA2pL，灭菌水5pL。混匀后65C酶切2h。取10pL酶切产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳后，以DL2000DNAmarker作分子量参照，电泳时间40min，用凝胶成像系统观察电泳结果并确定基因型。1.4统计学分析用SPSS10.0软件对高脂血症患者辛伐他汀治疗前的基线血脂水平及治疗4周后的血脂水平变化量作单因素方差分析（OnewayANOVA）、PostHoc多重比较。PV0.05为差异有统计学意义。2结果TaqIB多态位点的PCRRFLP电泳结果见图1。1.B1B2杂合子（171bp、364bp、535bp）；2.B1B1纯合子（171bp、364bp）；3.B2B2纯合子（535bp）；M：DL 2000分子量标准。TaqIB多态B1B2基因型个体的TG基线水平比B2B2基因型个体明显高出0.65mmol/L(P=0.041),B2B2基因型个体的HDLC基线水平分别比B1B1个体和B1B2个体明显高出0.58mmol/L(P=0.000)和0.62mmol/L(P=0.000)。高脂血症患者的基线血脂水平详见表1。表1CETP基因TaqIB多态各基因型患者辛伐他汀治疗前基线血脂水平(略)高脂血症患者经辛伐他汀治疗4周后HDLC和LDLC水平变化量在TaqIB多态位点不同基因型的3组间差异有统计学意义(F=6.120,P=0.003；F=3.925,P=0.022)。PostHoc多重比较结果表明,B1B2基因型个体的HDLC水平升高值较B2B2基因型个体(B2B2基因型个体HDLC水平升高值为负值)明显增多0.24mmol/L(P=0.003),B1B2基因型个体LDLC水平降低值比B1B1个体明显减少0.25mmol/L(P=0.024),即B1B1基因型个体LDLC水平降得更低。辛伐他汀治疗4周后CETP基因TaqIB多态各基因型患者的血脂水平变化量的比较详见表2。表2辛伐他汀治疗4周后CETP基因TaqIB多态各基因型患者的血脂水平变化量(略)3讨论流行病学研究已经发现，血清胆固醇水平的改变，尤其是LDLC浓度的升高是致动脉粥样硬化的主要原因之一，甚至可使早发性冠心病的发病风险增加数倍［4］。他汀类药物通过抑制内源性胆固醇合成的限速酶HMGCoA还原酶，降低体内胆固醇的合成，从而调节血清胆固醇水平。大量的临床实践表明，由于患者的遗传背景各不相同，此类调血脂药物的疗效具有明显的个体差异性［5 6］。Fiegenbaum等［7］和Carlquist等［2］的研究结果显示，B2B2基因型携带者在服用他汀类药物后收到更好的调脂效果。而与上述两个研究结果有所不同的是，Kotake等［8］和vanVenrooij等［9］的研究结果则表明，经过他汀类药物的治疗后，其中携带有B1B1基因型的患者能收到更好的治疗效果。Kuivenhoven等［10］对807例参加REGRESS的冠心病患者进行研究后发现，在用普伐他汀40mg/d治疗2a后，B1B1基因型患者冠状动脉狭窄进展减慢，但对于B2B2基因型无影响，而对于血脂的影响，CETP各基因型之间无明显的差异。朱燕林等［11］对北京协和医院内科63例患者的研究表明，经辛伐他汀治疗后，B1B1基因型个体较B2等位基因携带者TC及LDLC水平降低显著。但也有研究未能得出阳性结果。Boekholdt等［12］、deGrooth等［13］及Freeman等［14］的研究结果均表明三类基因型受试者的普伐他汀的治疗作用没有明显区别。本文发现B2B2基因型个体的HDLC基线水平明显比B1B1和B1B2基因型个体高，而较高HDLC水平有助于降低心血管疾病的发病率，提示B2B2基因型个体发生心血管疾病的危险性可能低于其他两种基因型的个体。B1B1和B1B2个体经辛伐他汀治疗4周后HDLC水平上升而B2B2个体则下降，B1B2个体上升幅度最大；3种基因型个体经辛伐他汀治疗4周后LDLC水平均下降，B1B1个体下降幅度最大，其次是B1B2个体，B2B2个体下降幅度最小。显见，粤西地区高脂血症患者中CETP基因B1B1和B1B2基因型个体的辛伐他汀的调脂效果较好，而B2B2个体对辛伐他汀的反应较弱，这提示患者在接受调脂治疗前先作有关的基因型分析，根据分析结果采用合适的调脂药物，可能收到更好的治疗效果。本文结果与国内外有关TaqIB多态性对他汀类药物调脂效果的部分研究结论未能一致，可能与种族、实验对象、实验方法存在差异有关。本文结果表明胆固醇酯转运蛋白基因TaqIB多态可能是预测中国粤西地区高脂血症患者他汀类药物调脂效果个体化差异的标记物之一，具有一定的临床意义。然而，高脂血症患者的辛伐他汀治疗的效果除了受到遗传因素的影响外，还受到年龄、性别、体重、身高以及一些生活习惯比如吸烟等条件的影响，且本研究受条件所限，病例数相对较少，而且没有测定患者血浆胆固醇酯转运蛋白浓度和活性等指标，研究有一定的局限性，还有待在日后的研究中进一步完善。晋升网()致力于成为医务工作者晋升职称心灵导师；是目前国内收录医学期刊、医学杂志最多最权威的医学学术平台；提供免费医学期刊在线阅读；网罗和甄选海量优秀医学论文检索，独立研发医学在线资源分享库和医学在线模拟考试库；整合刊类、标题、关键词检索及全文检索，并独家研发刊社管理和刊社加盟系统、在线投稿、在线查稿、在线阅读、远程审稿、在线下载等系统；聚刊社力量，建服务平台，让晋升网通过“专业”走入每一个医务人员的身边是我们不懈的追求目标；【参考文献】TOC\o"1-5"\h\zLusisAJ.Atherosclerosis[J].Nature,2000,407(6801):233 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