细菌内毒素检测 6、试剂卡片技术

试剂卡片技术细菌内毒素检测的创新湛江安度斯生物有限公司2016年7月实验助手APP授权发布创新驱动力•

了解创新的必要过程分析技术(PAT)指出：–精确和可靠的预测反映出对过程的了解–过程的了解与风险成反比–对过程越了解风险就越低2质量源于设计Quality

by

Design

(QbD)“Qualitycannotbetestedintopharmaceuticalproducts.Rather,

itresultsfrom

a

qualityorientedprocessdesign…withoutspecificon-stream

analyticalinstruments,finalproductqualityisneitherpredictablenorcontrollable”.药品的质量不是检测出来的，而是源于质量为导向的流程设计……没有专门的在线分析仪器，终产品的质量既不可测也不可控。阿贾斯S.侯赛因博士，药品评价和研究中心（CDER）药物科学处副主任，在第十七届国际过程分析化学论坛上提出他的过程分析技术观点。（国际过程分析技术论坛/2003）3过程分析技术与质量源于设计理念如何支持内毒素检测？*•

内毒素检测的策略应基于：–

对产品和过程的了解–

风险管理–

适当的过程检测•

为了评估产品污染的相对风险，使用定量检测方法比使用限量检测方法更可取，有利于产品质量趋势追踪及在超过指标并导致产品不合格前识别和纠正偏差。*美国FDA行业指南，热原和内毒素检测：问与答——2012年6月4将创新应用到实践中•

30多年来，CharlesRiver的微生物解决方案团队一直致力于将创新应用到实践中。•

随着制药工业对过程分析技术和质量源于设计的日益重视，客户需要不同的解决方案。•

我们的科学家明白简化内毒素检测过程的必要性。5将创新应用到实践中•

我们坚信有一个更简单、更好的方法，所以开发了革命性的Endosafe®-PTS™•

Endosafe®-PTS™2006年获得FDA认证。•

仪器需要符合细菌内毒素检查法规、必须操作简单、携带方便有助于满足PAT的要求——可在供试品采集现场获得结果，我们在设计PTS时将这些铭记在心。6将创新应用到实践中•

Endosafe®-PTS™可以节省用户宝贵的时间和金钱。•

它只需使用传统鲎试验所需供试品用量的1/4。•

快速、完整和精确，我们革命性的卡片技术使全世界的实验室技术人员进行实时内毒素检测成为现实。7快速内毒素检测系统——创新实践•

Endosafe®-PTS™•

Endosafe®-MCS™•

Endosafe®-Nexus™8卡片技术加样槽

鲎试剂

显色基质

光学池试剂被分装在一次性聚苯乙烯卡片上并干燥：供试品通道（1、3）放大图加样槽加样槽光学池试剂位置试剂位置泵连接泵连接鲎试剂显色基质供试品阳性通道（2、4）放大图光学池试剂位置试剂位置鲎试剂+内毒素显色基质试剂卡片是如何工作的•

卡片的标定–以美国国家内毒素参考标准品（USPRSE）确定不同浓度标准内毒素对应的反应时间–确定添加内毒素的值(PPC)10试剂卡片如何工作的•

将标定结果制作成校准码。–

校准码（CalibrationCode）中包含了标准品的反应时间和添加内毒素浓度等信息，该信息能在分析报告书（CoA）中找到。•

软件读取校准码，生成标准曲线，通过检测各反应通道的反应时间，将其与预存标准曲线进行比对，从而得到供试品检测值和内毒素回收率，如同传统的动态法鲎试验。11反应时间添加内毒素浓度121243使用PTS键盘输入卡片及供试品信息PTS工作示意13MCS

&

PTS

参数•

15分钟内获得动态显色法鲎试验结果•

两个对数级的检测范围，添加中点浓度内毒素–

10-0.1、5.0-0.05、1.0-0.01、0.5-0.005EU/ml–

添加中点浓度内毒素–

校准码使用RSE制备–

无需自行制备内毒素标准品•

符合现行美国药典/欧洲药典/中国药典的规定•

利用现有的Endosafe内毒素特异缓冲液，具有内毒素特异性14卡片技术简化细菌内毒素检测•

无需–

用户制备标准曲线，这是检测误差的主要来源–

制备供试品阳性对照–

使用多种配套用品–

几个小时的专门培训•

快速，开始到结束只需15分钟•

高度灵活的平台——单次使用、便携及实时供试品分析有助于消除风险放行•

计算机联网多卡片和Nexus系统，可替代中心实验室酶标仪和试管仪15PTS快速内毒素检测•PTS可在15分钟内快速获得检测结果，所需试剂（鲎试剂、内毒素、显色基质）预置于一次性使用的卡片中，简化所需操作。•PTS是高度灵活、便携式平台，可用于生产现场、研发实验室、纯化室等等。•PTS使用非常容易，无需特殊培训，无需制备标准曲线。16MCS

多卡片式检测系统•与PTS使用相同的试剂卡片，15分钟内可快速获得5个供试品的结果。•MCS可用Endoscan-V软件追踪和趋势分析结果。•MCS使用非常容易，无需特殊培训，无需制备标准曲线17Endosafe

Nexus18Endosafe

Nexus•

第一台全自动系统，专为鲎试验设计•

将鲎试剂卡片技术、大包装卡片、自动化液体处理以及简化数据管理合为一体•

每轮可检测48-60个供试品•

占地面积小–

54″LX20″WX30″H(137X51X76cm)19细菌内毒素检测的未来20目前的BET模式所有供试品送到QC成品放行过程监控水系统关键供试品必须立即检测！怎么办？原材料用具研发21供试品管理（11个步骤）取样供试品送到数据分析中心填写检测表格录入检测表格供试品送到QC实验室供试品分批供试品送到QC暂存检测信息检查供试品检测数据审核签名通知生产人员结果典型供试品管理综览22与PAT看齐的BET模式15分钟获得关键供试品检测结果！QC实验室检测的供采样现场检测，结试品果送到QC实验室成品放行水系统用具过程监控水系统用具研发23供试品数据管理：使用PTS取样供试品用PTS检测文件送到数据分析中心填写检测表格X供试品送到QC暂检测信息检查录入检测表格供试品分批存XXX数据审核签名供试品送到QC实验室供试品检测通知生产人员结果典型供试品管理综览24期望的未来BET模式采样现场检测，结果供试品在QC实验室检测，结果送到送到QA/QC审核：过程监控水系统QA/QC审核：成品放行水系统用具研发用具25供试品数据管理：带电子数据的PTSXX用PTS检测供试品获得结果取样文件送到数据分析中心填写检测表格XXXX供试品送到QC暂存检测信息检查供试品分批录入检测表格XXX在线审核数据签名

通知生产人员结果供试品测试供试品送到QC实验室典型供试品管理综览26卡片技术符合细菌内毒素检查法规定•

符合美国FDA以及USP/EP/ChP细菌内毒素检查法要求•

使用经美国FDA认证的LAL–

经认证的显色法试剂，鲎资源使用是传统方法的1/20•

用USPRSE制作校准码•

3个浓度的标准曲线，用中点浓度制备供试品阳性对照•

供试品和供试品阳性对照各平行两管•

稳定性–

始终符合适用要求–

兼容制药/生物制药配方•

可使其具有内毒素特异性–

使用能阻断葡聚糖干扰的稀释剂27这是替代方法吗？•

不是，这是鲎试剂，与药典中细菌内毒素检查法中描述的一样•

只要求进行产品验证（干扰验证），正如所有其它鲎实验方法一样•

替代方法是指那些不符合细菌内毒素检查法，要求进行替代方法验证以及产品验证的方法，比如：重组C因子和以配合基为基础的技术。28鲎试验方法美国FDA/USP/EP认为PTS卡片与传统鲎实验方法一样是属于同一类别：–

凝胶法–

终点显色法–

KTA-动态浊度法–

KCA-动态显色法和卡片技术29PTS/MCS

应用•

医药•

终产品•

生物制药•

医疗设备•

透析诊所•

核医学•

中间产品•

洁净室供试品•

缓冲区•

清洗验证•

研发供试品•

化学合成药ꢀ•

干细胞研究•

注射用水及原料30Endosafe®

PTS/MCS供试品干扰验证31产品验证•

验证产品可分为以下2步：–干扰初筛试验–干扰验证321：PTS/MCS干扰初筛•

制备并检测若干个浓度的供试品稀释液–

介于供试品原液（未经稀释）和MVC或MVD之间•

每片抑制/增强卡片(PTS220)可检测四个供试品稀释浓度•

用灵敏度足够的卡片确认无干扰浓度或稀释倍数•

可能的话请留一个安全系数（避免在MVD或接近MVD检测）332：PTS/MCS干扰验证•

检测三批独立的产品•

使用所需灵敏度的卡片•

确保符合所有适用标准•

验证文件，包括日后放行实验中使用与验证中相同的供试品制备方法的说明34PTS/MCS验证有效性有效的试验为•

回收率50-200%•

供试品变异系数<25%•

供试品阳性对照变异系数<25%35实验人员/试剂/实验室验证试剂信息检测范围：1-0.01EU/mL添加内毒素：0.17EU/mL36仪器验证仪器信息制造商/仪器序列号校准有效期便携式检测

Endosafe

05.Mar.201系统(PTS)

PTS1740537干扰初筛试验1.供试品信息•内毒素限值:3EU/ml•产品浓度:1ml/ml•MVD=(3EU/mlx1ml/ml)/0.01EU/ml=300•检测浓度:1/1,1/10,1/50,1/100,1/200,1/30038干扰初筛试验3.结果用于验证所选择的稀释倍数/浓度:1/20039b.干扰试验（验证）批次1结果40b.干扰试验（验证）批次2结果41b.干扰试验（验证）批次3结果42验证结果标准曲线范围:1-0.01EU/ml相关系