细菌内毒素检测 8、BET常见异常结果分析

BET常见异常结果分析湛江安度斯生物有限公司2016年7月实验助手APP授权发布1BET常见异常结果分析凝胶法阴性对照阳性灵敏度复核不符合规定阳性对照

供试品阳性

供试品一阴性

对照阴性

阳一阴21.阴性对照为阳性实验环境-有扬尘；实验操作不规范-人为污染；配套用品（移液管、反应管、吸头污染或没有完全除热原）试剂性能-鲎试剂或水出问题设备-恒温水浴，水滴进反应混合液中32.阳性对照为阴性标准内毒素溶液的制备是否准确；试剂性能（内毒素标准品、鲎试剂和检查用水的质量和是否匹配）；配套用品（移液管、稀释管、反应管、吸头是否有干扰）；操作是否规范；设备-恒温孵育的温度和时间是否合适；实验环境；43.供试品阳性对照为阴性阳性对照为阴性，供试品阳性对照为阴性—参考实验结果出现异常的分析2）阳性对照为阳性，供试品阳性对照为阴性供试品阳性对照溶液配制是否正确；供试品有抑制干扰作用；配套用品（稀释管、反应管、移液用具是否有干扰）；其他54.阴性对照正常，供试品为阳性供试品内毒素含量不符合规定；污染配套用品（稀释管、反应管、刻度吸管、吸头）；试验操作、环境、试剂等假阳性-增强干扰作用•

凝胶法中，没有对照项可以判断供试品是否存在增强作用。64.阴性对照正常，供试品为阳性假阳性的判断凝胶法检测光度法检测抗增液复溶鲎试剂特异性鲎试剂分析内毒素含量反应动力学曲线分析配套稀释液75.同一供试品结果有时阳性，有时阴性样品供试品内毒素含量在1/2L左右；供试品存在干扰试剂-不同试剂，抗干扰能力不同试验条件（环境、人员操作技能、恒温孵育温度和时间）86.灵敏度复核不符合规定参照案例分析（二）鲎试剂灵敏度复核不符合规定原因调查。9BET常见异常结果分析光度法阴性对照不合格标准曲线的线性不合格不正确的预设Rt或OD值，导致的异常结果内毒素回收率不合格变异系数大101.线性不足标准内毒素试剂•

某个标准内毒素浓度制备误差•

标准品旋涡混合不充分•

标准品储存不当或用具干扰•

污染•

检测能力不足仪器设置不正确的反应时间•

不正确的预设Rt/OD值•终点法112.阴性对照不合格配套用品激活（污染）鲎试剂塑料吸头和吸管可激活或污染鲎试剂反应试管或孔没有完全除内毒素操作污染细菌内毒素检查用水鲎试剂反应试管或孔受污染试剂灵敏度不足或不合适的预设Rt/OD123.变异系数偏大内毒素添加的量不准确移液样品试管/孔受污染试剂质量加样误差管/吸

沉淀气泡头污染或悬浮134.回收率问题标准内毒素溶液制备或加入不准确试剂加入不准确样品内毒素浓度太高抑制作用增强作用工艺、原辅料的改变145.不正确的预设Rt或OD值，导致的异常结果

预设Rt/OD值指光度变化值，是一个参考值，一般由鲎试剂生产厂家提供。

合适的预设Rt/OD值

标准曲线最低点浓度在设定时间内能达到预设Rt/OD值

标准曲线最低点浓度在设定时间内反应时间和阴性对照有差异

标准曲线的相关系数|r|≥0.980

预设Rt/OD值的取值范围越宽，鲎试剂的稳健性越好（安度斯光度法试剂的特征）15光度变化预设值的影响预设OD值0.02相关系数-0.99900.0024供试品内毒素含量（EU/ml）回收率92.9%5

0.5

0.050.00516光度变化预设值的影响预设OD值0.05相关系数-0.9984＜0.0038供试品内毒素含量（EU/ml）回收率102.3%5

0.50.050.00517光度变化预设值的影响预设OD值0.1相关系数-0.9985＜0.0051供试品内毒素含量（EU/ml）回收率?104.6%标准曲线最低点浓度OD值不达限5

0.50.050.00518安度斯光度法鲎试剂预设光度变化值（建议）表1：动态试管检测仪-405nm仪器名称检测波长光度法试剂预设Rt值动态试管检测仪405nm厂家莱伯金耐特动态浊度法95%动态显色法92%表2：动态试管检测仪-660nm仪器名称检测波长光度法试剂预设Rt值动态试管检测仪660nm厂家莱伯金耐特动态浊度法95%动态显色法/19安度斯光度法鲎试剂预设光度变化值（建议）表3：ELx808IU酶标仪-405nm仪器名称检测波长光度法试剂预设OD值ELx808IU酶标仪

厂家美国伯腾405nm动态浊度法0.03动态显色法0.05表4：FC/ET型酶标仪-405nm仪器名称FC/ET型酶标仪

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