饲料中粗蛋白的测定课件

饲料中粗蛋白的测定常用方法国标法凯氏定氮仪法强碱直接蒸馏法双氧水法样品的采集、制备生产单位有代表性的原料检样：鱼粉、玉米蛋白粉、豆粕采用四分法将检样缩至500g，粉碎后通过40目筛，装于密闭容器中，防止试样成分变化或变质实验试剂硫酸：化学纯，含量为98%，无氮；混合催化剂：0.4gCuSO4，6gK2SO4或Na2SO4均为化学纯，磨碎混匀；NaOH：40%水溶液，化学纯；硼酸：2%水溶液，化学纯；混合指示剂；0.1mol/LHCl标准溶液；0.02mol/LHCl标准溶液；蔗糖：分析纯；硫酸铵：分析纯，干燥；硼酸吸收液。仪器实验用样品粉碎机或研钵；40目分析筛；分析天平；电炉；酸式滴定管；凯氏蒸馏装置；凯氏定氮装置操作步骤试样的消化称取试样0.5～1g（含氮量5～80mg），准确至0.0002g，小心无损的将样本放入100mL洗净烘干的凯氏烧瓶中。加入6.4g混合催化剂与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和两粒玻璃珠。将凯氏烧瓶置于通风厨里的电炉上加热，开始加热时，先用小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力，消化时经常转动消化瓶，使全部样本浸入硫酸内，如有黑色油在瓶壁，应待烧瓶冷却后加少量蒸馏水冲洗，再继续加热消化。如有黑炭粒不能全部消化，则待烧瓶冷却后，补加少量硫酸加热，直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热至消化完毕。氨的蒸馏试样消煮液冷却后加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶内，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，作为试样分解液。将蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴、硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10～20mL注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加入10mL氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，以防漏气。蒸馏4min后降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。滴定蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L或0.2mol/L标准盐酸溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色。同样滴定试剂空白消化液。凯氏定氮仪法试剂同凯氏定氮测粗蛋白法仪器自动或半自动定氮仪氮的蒸馏采用定氮仪，将带消化液的管子插在蒸馏装置上，以25mL硼酸为吸收液，加入两滴混合指示剂，蒸馏装置的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消化管中加入50mL氢氧化钠溶液进行蒸馏。蒸馏时间以流出的液体呈中性为宜，可用pH试纸测试。降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。滴定空白测定计算（同国标法）强碱直接蒸馏法强碱直接蒸馏法(DirectDistillation，俗称DD法)是间接测定饲料中粗蛋白质的一种简便的方法。实验原理其原理是将粉碎的饲料样品在强碱中消煮，使饲料中的α-氨基、酰氨基以及某些特殊基团上的氮素在强碱的作用下以氨的形式释放出来，直接蒸馏到硼酸中，再用盐酸溶液来滴定，根据盐酸消耗量来计算DD法所测得的表观含氮量。但是，由于DD法测定过程中的氨量的释放是不定量进行的，因此必须根据经典的凯氏定氮法所标定的校正数值，用一定的回归方程来计算样品中的粗蛋白质的含量。试验步骤消化称量5.000g样品，粉碎经40目筛后放500mL凯氏烧瓶中，加50mL蒸馏水（边加边摇），使充分混合。滴定用0.1mol/L的盐酸标准溶液进行滴定。结果计算粗蛋白质含量（%）=（V2－V1）×C×0.014×6.25×100M式中：V2—滴定试样时所需标准酸溶液的体积（mL）；V1—滴定空白时所需标准酸溶液体积（mL）；C—盐酸标准溶液浓度（mol/L）；M—试样质量（g）；0.014—[C(HCl)=1.000mol/L]与1.00mL盐酸标准溶液相当的、以g表示氮的质量；样品中含氮量用以下的回归方程计算：

y=9.2918x-0.2852式中：x—为DD法测定所得到的含氮量；

y—为样品的实际含氮量。仪器实验室用样品粉碎机或研钵;分样筛孔径0.45mm（40目）;分析天平（感量0.0001g）;消煮炉或电炉;10mL、25mL酸式滴定管；250mL消化管；150mL；250mL锥形瓶；定氮仪（以凯氏原理制造的各类型半自动蛋白质测定仪）。原理浓硫酸和30%浓度的双氧水都是强氧化剂。饲料中的有机物接触到浓硫酸便被脱水炭化。但是在高温条件下，向未被硫酸完全氧化的饲料中滴加30%的双氧水，会使饲料中的有机物彻底氧化、分解，放出CO2、SO2，而释放出的氨气则和硫酸结合生成硫酸铵。然后用半微量凯氏定氮装置对接收液进行蒸馏，再用盐酸标准溶液对接收定氮装置对接收液进行蒸馏，再用盐酸标准溶液对接收的含量。氨的蒸馏采用定氮仪，将带消化液的管子插在蒸馏装置上，以25mL硼酸为吸收液，加入两滴混合指示剂，蒸馏装置的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消化管中加入50mL氢氧化钠溶液进行蒸馏。蒸馏时间