中成药常规检查

中成药常规检查及

中蒙药薄层色谱鉴别

内蒙古药品检验所郝美玲前言中成药常规检查中蒙药薄层色谱鉴别前言中成药检验主要包括：性状、鉴别、检查、含量测定等。性状从某种程度来讲也是检查的一个部分，可以作为直观检查。

一.中成药常规检查

《中国药典》2000年版一部附录“制剂通则”项下共介绍了28个剂型，2005年版一部附录“制剂通则”项下共介绍了30个剂型，新增了凝胶剂和涂膜剂。这里主要讲几个常见剂型的检查项目及判定标准。有：丸剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂。

（一）丸剂的检查

中国药典2005年版一部附录5页丸剂包括：蜜丸、水丸、水蜜丸、糊丸、浓缩丸、蜡丸。外观应圆整、均匀、色泽一致，蜜丸应细腻滋润、软硬适中。1.水分

（1）不含或少含挥发性成分的药品采用第一法，也叫烘干法。具体操作：取供试品（≤3mm颗粒或碎片）2～5g，平铺于干燥至恒重的扁形称瓶中，厚度不超过5mm，疏松供试品不超过10mm，精密称定，打开瓶盖在100～105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30分钟，精密称定重量，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量（%）（2）含挥发性成分的药品采用第二法，也叫甲苯法。具体操作：取供试品适量（约相当于含水量1～4ml），精密称定，置A瓶中，加甲苯约200ml，必要时加入干燥、洁净的沸石或玻璃珠数粒，将仪器各部分连接，自冷凝管顶端加入甲苯，至充满B管的狭细部分。将A瓶置电热套中，待甲苯开始沸腾时，调节温度，使每秒钟馏出2滴。待水分完全馏出，即测定管刻度部分的水量不再增加时，继续蒸馏5分钟，放冷至室温，拆卸装置，如有水黏附在B管的管壁上，可用蘸甲苯的铜丝推下，放置，使水分与甲苯完全分离（可加亚甲蓝粉末少量，使水染成蓝色，以便分离观察）。检读水量，并计算供试品中的含水量（%）。甲苯法仪器装置A为500ml的短颈圆底烧瓶。B为水分测定管。C为直形冷凝管。（3）含有挥发性成分的贵重药品（麝香）采用第三法,也叫减压干燥法。（4）第四法,也叫气相色谱法。判定标准

大小蜜丸、浓缩蜜丸水分不得过15.0%。水蜜丸、浓缩水蜜丸水分不得过12.0%。水丸、糊丸、浓缩丸水分不得过9.0%。蜡丸不检查水分。2.重量差差异异按丸服用用的丸剂剂照第一一法检查查取供试品品10份，分别称称定重量量，再与与标示总总量（每每丸标示示重量××称取丸丸数）或或标示重重量相比比较（无无标示重重量的丸丸剂，与与平均重重量比较较）。判定标标准准9g—±±6%（丸重范范围9.54~8.46）6g—±±7%（丸重范范围6.42~5.58）3g—±±8%（丸重范范围3.24~2.76）超出重量量差异限限度的不不得多于于2份，并不得得有1份超出限度度一倍。。按重量服服用的丸丸剂照第第二法检检查。10丸为为1份，，共取10份，分别称称定重量量，再与与每份标标示重量量相比较较（无无标示重重量的丸丸剂，与与平均重重量比较较）。2g—±±7%（重量范范围2.14~1.86）1g—±±8%（重量范范围1.08~0.92）判定标标准准超出重量量差异限限度的不不得多于于2份，并不得得有1份超出限度度一倍。。包糖衣的的丸剂应应检查丸丸芯的重重量差异异并符合合规定，，包糖衣衣后不再再检查重重量差异异。其他他包衣丸丸剂应在在包衣后后检查重重量差异异并符合合规定；；凡进行行装量差差异检查查的单剂剂量包装装丸剂，，不再进进行重量量差异检检查。3.装量差差异异单剂量分装装的丸剂（袋或瓶））取10袋（（瓶），分分别称定每每袋（瓶））内容物的的重量，每每袋（瓶））装量与标标示装量相相比较。9g—±5%（丸重范围围9.45~8.55）6g—±6%（丸重范围围6.36~5.64）3g—±8%（丸重范围围3.24~2.76）判定标标准超出重量差差异限度的的不得多于于2袋（瓶）），并不得有有1袋（瓶））超出限度一一倍。4.装装量量装量以重量量标示的多多剂量包装装的丸剂，，照最低装装量检查法法（2005年版一一部附录64页），，目前多剂剂量包装的的中成药不不多见，蒙蒙成药大多多是多剂量量包装。具体操作：：取供试品品5个（50g以上者者3个），采用减重重法分别求求出每个内内容物的装装量与平均均装量，应应符合下列列规定。如如有1个内内容物不符符合规定，，则另取5个同法进进行复验。。判定标标准准标示装量20g以下下规定：平均均装量不少少于标示装装量，每个个内容物装装量不少于于标示装量量的93%标示装量20g至50g规定：平均均装量不少少于标示装装量，每个个内容物装装量不少于于标示装量量的95%标示装量50g至500g规定：平均均装量不少少于标示装装量，每个个内容物装装量不少于于标示装量量的97%4.溶散时时限根据丸剂直直径选择不不同孔径的的筛网（丸丸剂直径在2.5mm以下的用孔径约约0.42mm的筛网，在2.5～3.5mm之间的用孔孔径1.0mm的筛网，在3.5mm以上的用孔径约约2.0mm的筛网）供试品黏附附挡板妨碍碍检查，去去掉挡板再再进行检查查。判定标标准小蜜丸、水水蜜丸和水水丸应在1小时内全部溶散。。浓缩丸和糊糊丸应在2小时内全部溶散。。蜡丸照肠溶衣片崩解时限检检查法检查查。大蜜丸不检检查溶散时时限。（二）片剂的检查查《中国药典典》2005年版一部附附录7页片剂包括：：浸膏片、、半浸膏片片和原粉片片片剂以口服服普通片为为主，另有有含片、咀咀嚼片、泡泡腾片、阴阴道片、阴阴道泡腾片片和肠溶片片等。外观应完整整光洁，色色泽均匀，，应有适宜宜的硬度。。1.重量差差异取20片，精密称定定总重量，，求得平均均片重，再再分别精密密称定每片片的重量，，每片重量量与标示片片重相比较较（无标示示片重的片片剂，与平平均片重比比较）0.3g——±5%（（0.315～0.285）0.3g以以下—±7.5%糖衣片不检检查重量差差异判定标标准超出限度的的不得多于于2片，并不得有有1片超出限度一倍。2.崩解时限限做此项检查（（附录62页页）时应注意意：（1）1000ml的烧杯（2）T=37±1℃（3）挡板以以“V”字形放置（4）升降的的金属支架上上下移动距离离为55mm±±2mm，往返频率为为每分钟30～35次次。（5）调节吊吊蓝位置使其其下降时筛网网距烧杯底部25mm，上升时筛网网在水面下15mm处。判定标准准药材原粉片（（未经提取、、浓缩等一系系列工艺制备备）——30分钟糖衣片、薄膜膜衣片（可在在9‰盐酸溶液液中检查）、浸浸膏片(半浸浸膏片)———60分钟肠溶衣片9‰盐酸溶液液中检查2小小时（不加挡板）），不得有裂裂隙、崩解或或软化现象；；提出，用少少量水洗涤后后，再在磷酸酸盐缓冲溶液液（PH6.8）中进行检查（（加挡板），，1小时全部崩崩解并通过筛筛网。判定标标准泡腾片（含含NaHCO3和有机酸）250ml烧烧杯（200ml15～25℃℃的水）当气体停止逸逸出时，片剂剂应溶解或分分散在水中，，无凝聚的颗颗粒剩留。5分钟内崩解含有药材浸膏膏、树脂、油油脂或大量糊糊化淀粉的片片剂，如有小小部分颗粒状状物未通过筛筛网，已软化化无硬芯，按按符合论。判定标准准阴道片照融变时限检检查法（附录录63页）检检查供试品3片应在30分钟内全部溶化或或崩解溶散并并通过开孔金金属圆盘，或或仅残留少量量无硬芯的软软性团块。含片、咀嚼片片不检查崩解解时限3.发泡泡量阴道泡腾片25ml具塞刻度试管管（内径1.5cm）10支，各精精密加水2ml，置37±1℃℃水浴中5分钟，各管中中投入供试品品1片，密塞塞，20分钟内观察最最大发泡量的的体积。判定标标准平均发泡体积积应不少于6ml少于4ml的不得超过2片（三）胶囊剂剂的检查《中国药典》》2005年版一部附录录10页胶囊剂包括：：硬胶囊、软软胶囊、肠溶溶胶囊。外观应整洁、、不得有粘结结、变形、渗渗漏或囊壳破破裂现象，并并应无异臭。。1.水分硬胶囊将将内容物倒出出来，按照水水分测定法进进行测定。常用方法为烘烘干法和甲苯苯法。判定标准：水水分不得过9.0%。硬胶囊内容物物为液体或半半固体者不检检查水分。2.装量差异异取10粒，分别精密称称定重量，倾倾出内容物，，再精密称定囊壳重重量，采用减减重法，求出出每粒内容物物的量，每粒粒装量与标示示装量相比较较（无标示装装量的胶囊剂剂，与平均装装量比较）。。限度为：±10%0.5g/粒粒（0.550g～0.450g））判定标准准超出限度的不不得多于2粒，并不得有1粒超出限度度一倍。3.崩解时限限操作同片剂必须加挡板判定标准准硬胶囊——30分钟软胶囊——60分钟（可在人工胃胃液中进行））肠溶胶囊———同肠溶衣片片部分颗粒状物物不能通过筛筛网，已软化化无硬芯可作作符合论（四）颗粒剂剂的检查《中国药典》》2005年版一部附录录6页颗粒剂包括：：可溶性颗粒粒剂、混悬性性颗粒剂和泡泡腾性颗粒剂剂。颗粒剂应应干燥、、颗粒均均匀、色色泽一致致，无吸吸潮、结结块、潮潮解等现现象。1.粒度度取颗粒剂剂30g，称定重重量，采采用双筛筛分法，，置药筛筛内过筛筛，将药药筛保持持水平状状态，左左右往返返轻轻筛筛动3分钟。判定标准准不不能通过过一号筛筛和能通通过四号号筛的颗颗粒和粉粉末总和和不得过过15%。2.水分分按照水分分测定法法进行测测定。常用方法法为烘干干法和甲甲苯法。。判定标准准：不得得过6.0%。3.溶化性性1袋或10g（多剂量量包装））+200ml热水（70～80℃），搅拌5分钟，立即观观察。判定标准准：可溶溶性颗粒粒剂应全全部溶化化，允许许有轻微微浑浊；；混悬性性颗粒剂剂应能混混悬均匀匀。泡腾性颗颗粒剂1袋+200ml水（15～～25℃℃），应能迅迅速产生生气体而而呈泡腾腾状，5分钟内内颗粒应应完全分分散或溶溶解在水水中。均不得有有焦屑等等异物。。4.装量差差异异单剂量分分装的颗颗粒剂，，取10袋(瓶)，分别称称定每袋(瓶瓶)内容物的的重量，，每袋(瓶瓶)的重量与与标示装装量相比比较限度为：：±5%10g/袋(10.50g～9.50g)判定标标准准超出限度度的不得得多于2袋（瓶瓶），并不得得有1袋（瓶瓶）超出限度度一倍。。多剂量分装的的颗粒剂照最最低装量检查查法。（五）滴丸剂剂的检查《中国药典》》2005年版一部附录录10页。外观应圆整均均匀，色泽一一致，无沾连连现象，表面面无冷凝液黏黏附。1.重量差异异取20丸，精密称定总总重量，求得得平均丸重后后，再分别精精密称定每丸丸的重量，每每丸重量与平平均丸重相比比较。判定标准：超出限度的不不得多于2丸，并不得有1丸超出限度度一倍。包糖衣的滴丸丸不检查重量量差异，包薄薄膜衣的滴丸丸检查重量差差异。2.溶散时限限操作同片剂滴丸很小，筛筛网孔径应为为0.42mm。判定标准：不包衣的滴丸丸应在30分钟内全部溶散，，包衣的滴丸丸应在60分钟内全部溶散。。以明胶为基质质的滴丸，可可在人工胃液液中进行检查查。中蒙药薄层色色谱鉴别（（TLC鉴别别）薄层色谱法(ThinLayerChromatography，TLC)系将适宜宜的固定相涂涂布于玻璃板板、塑料或铝铝质基片上，，成一均匀薄薄层。待点样样、展开后，，与适宜的对对照物按同法法所得的色谱谱图作对比，，用以进行药药物的鉴别、、杂质检查或或含量测定的的方法。优点：具有简简便、快速、、分离效率高高、专属性强强及灵敏度高高等特点。中国药典2005年版一部共收收载1146个品种（包括：：中、蒙、藏藏药材及成药药），采用TLC法用于于鉴别的已达1523项，增加加TLC鉴别并不是赶赶时髦，而是是由于TLC鉴别的专属性性强。可是，，这并不表明明显微鉴别、、理化鉴别就就没用了、不不重要了,例例如：含麝麝香的中蒙药药，显微鉴别别起着很重要要的作用。薄层色谱鉴别别操作全过程程示意如下供试液的制备

展开剂配制

紫外光灯、显色剂

薄层板制备

检视

展开

点样

定性结果中蒙成药TLC鉴别的目的是是鉴别而不是是分离提取，，因而在条件件考察时，对对吸附剂、展展开剂的选择择，不是如何何将检品分离离成单一组分分，而是如何何在某一规定定的条件（如：硅胶G板、GF254板、H板等），将检品制制成清晰、圆圆整、比移值值稳定的层析析图谱，以便便与对照品（（或对照药材材）进行对照照比较。（一）供试液液的制备一个理想的TLC鉴别，关键是是所制备的供供试液是否理理想。供试液液的制备离不不开提取分离离(前处理)的选择，并并不是所有的的成分用甲醇醇、乙醇都可可以提出，在在薄层板上点点样、展开、、显色、检视视。例如：检检中药或中成成药中的苷类类成分(含人参、三三七、黄芪、、黄芩等药材材的中蒙成药药)，需要较为复复杂的前处理理。另外点样液不不能太浓，否否则点样后易易造成严重拖拖尾。前处理理整个前处理包包括：提取、、萃取、柱层层析等等一系系列的处理过过程，在这儿儿主要讲一下下萃取和柱层层析时应注意意的几个方面面。萃取：主要注意乳化化现象柱层析：层析柱下端用脱脂棉或或玻璃纤维塞塞住，吸附剂剂均匀地、一一次性加入，，操作过程中中应保持有充充分的洗脱剂剂留在吸附层层的上面。1.萃取取主要注意乳化化现象苷类成分用水水饱和的正丁丁醇萃取及有有机生物碱类类成分用乙醚醚或氯仿萃取取时，往往易易产生乳化现现象。振摇时注意避避免强力振摇摇。用乙醚或正己己烷等萃取脂脂溶性有机酸酸或用醋酸乙乙酯萃取黄酮酮类成分时，，一般不易产产生乳化现象象，可以强力力振摇。2.柱层层析色谱柱下端用用脱脂棉或玻玻璃纤维塞住住。吸附剂应均匀匀地、一次性性加入色谱柱柱，振动管壁壁使其均匀下下沉。洗脱过程中应应保持有充分分的洗脱剂留留在吸附层的的上面（二）薄层板的制备备将固定相和水水(或一定浓浓度的CMC-Na溶液液或其他水溶溶液)按1∶3的比例混匀研研磨,涂布成成均匀的、规规定厚度的薄薄层，自然晾晾干后，在110℃烘烤烤30分钟活活化，放在有干燥燥剂的储板箱箱中备用。（三）点样点样的质量对对分离效果影影响很大。点样时最好在在空气湿度比比较低的地方方，因为吸附附剂在空气中中易吸收湿气气而降低其活活性。整个点样过程程最好控制在在10分钟左右。点样基线距底底边1.0～1.5cm，点样直径一般般为2～4mm，各原点必须在在同一水平线线上，点间距约为1.5～2.0cm。点样时勿损伤伤薄层表面。。点样量大时，，要分次点加加，使原点集中，，为保证样品不不扩散，可借借助吹冷、热热风或加热方方式进行点样样。（四）展开剂和展开开展开剂的选择择主要是根据据吸附剂、分分离物质的性性质以及展开开剂极性三者者之间的关系系来考虑。展开方式很多多，有上行、、下行、双向向、多次展开开等。最常用用的是上行展展开法，所用用展开缸的底底部必须平整整，将薄层板板放入后能呈呈水平，磨口口盖要严密，，必要时可涂涂少量凡士林林密封，但须须严防污染薄薄层板及展开开剂。在展开开缸中，薄层层板对溶剂蒸蒸气的吸附对对薄层分离的的影响很大。。由于对饱和和度的要求不不同，如有的的需要用展开开剂先将展开开缸饱和，有有的需将薄层层板在展开缸缸中用展开剂剂饱和，有的的则不需要饱饱和，故需按按不同要求进进行操作。薄层板浸入展展开剂的深度度一般为0.5cm(上行展开)或或0.3cm(斜上行展开)，展开距离离一般为8～15cm,高效薄层板展展距5～8cm。展开剂宜临用用新配，不宜宜反复使用。。（五）显色色物理方法有荧荧光法、荧光光熄灭法等，，化学方法一一般是用化学学试剂显色的的方法。显色剂有通用用显色剂(如如硫酸乙醇溶溶液、磷钼酸酸乙醇溶液、、碘蒸气等)和专属显色色剂(如生物物碱用稀碘化化铋钾、氨基基酸用茚三酮酮试液等)。。（六六））检检视视日光光下下目目测测检检视视：：斑斑点点本本身身有有颜颜色色、、显显色色剂剂显显色色后后斑斑点点呈呈色色。。紫外外光光灯灯下下检检视视：：365nm、、254nm六味味地地黄黄丸丸中中熊果果酸酸的的薄层层色色谱谱结结果果DocumentationwithdigitalcameraVisualinspectionofAstragalusandHedysarumTrack1,2,3=Astragalus2,5,10µµLTrack4,5,6=Hedysarum10,5,2TrTrack1,2,3=Astragalus2,5,10µµLTrack4,5,6=Hedysarum10,5,2µµL、25,2µµL2,3=Astragalus2,5,10µµLTrack4,5,6=Hedysarum10,5,2µµLµLH2SO4

123456UV366123456

UV254123456

VisuallightFluorescenceFluorescencequenchingImagecapturingValerian(缬草草)whitelightImagecapturingValerian(缬草草)UV-254nmImagecapturingValerian(缬草草)UV366\>400nmWeakfluorescentzones:useLongTimeIntegration（七七））检检出出物物的的定定性性薄层层分分离离的的斑斑点点检检出出后后需需要要定定性性，，鉴鉴别别直直接接在在薄薄层层上上进进行行。。在在薄薄层层上上进进行行定定性性鉴鉴别别，，由由于于影影响响薄薄层层分分离离的的因因素素很很多多，，仅仅仅仅靠靠测测量量Rf值值的的方方法法是是不不可可靠靠的的。。一一般般采采用用对对照照品品或或对对照照药药材材在在同同一一条条件件下下展展开开后后进进行行对对比比的的方方法法（（也也叫叫随随行行对对照照法法））。。采用用对对照照品品作作对对照照时时，，要要求求供供试试品品色色谱谱中中，，在在与与对对照照品品色色谱谱相相应应的的位位置置上上，，显显相相同同颜颜色色的的斑斑点点或或荧荧光光斑斑点点。。采采用用对对照照药药材材作作对对照照时时，，一一般般要要求求供供试试品品色色谱谱中中，，在在与与对对照照药药材材色色谱谱相相应应的的位位置置上上，，显显相相同同颜颜色色的的斑斑点点或或荧荧光光斑斑点点至至少少2～～3个个。从原原点点到到斑斑点点中中心心的的距距离离Rf值值=——————————————————————————从原原点点到到溶溶剂剂前前沿沿的的距距离离Rf值：0.2～0.8（八））薄层层层析析中遇遇到的的异常常现象象及解解决办办法在薄层层层析析分析析中，，我们们希望望获得得清晰晰、圆圆整、、Rf值（比比移值值）稳稳定且且适中中（0.2~0.8）的斑点点。但但是在在实际际检验验工作作中，，往往往遇到到异常常现象象，会会妨碍碍和干干扰薄薄层层层析结结果。。因此此，需需要探探讨其其产生生的原原因与与克服服的办办法。。1.边边缘缘效效应应图谱情情况：：在同一一块薄薄层板板上，，用同同一种种展开开剂，，在同同一展展开槽槽内展展开，，薄层层板中中部的的斑点点较两两侧斑斑点的的Rf值小（（尤其其是夏夏天））。Rg1

ReRb1产生的的原因因：因为当当展开开剂在在薄层层板上上运行行时，，极性性较弱弱的展展开剂剂和挥挥发性性较强强的展展开剂剂在薄薄层两两边较较易挥挥发。。因此此，它它们在在薄层层两边边的浓浓度比比在中中间的的浓度度小，对于同同一组组分来来说，，两侧侧的Rf值大于于中间间的，，因此此就产产生了了如图图所示示的边边缘效效应。。克服的的办法法：（1））使展展开剂剂充分分饱和和，时时间一一般在在15分分钟以以上，有的的展开开剂需需要饱饱和30分分钟。将预先先点好好样的的薄层层板放放入展展开缸缸中，，但不不浸入入展开开剂中中，让让薄层层板及及原点点上的的样品品成分分充分分饱和和。。（2）在展展开缸缸内壁壁上贴贴以浸浸湿了了展开开剂的的滤纸纸条。。（3）用内内容较较小且且封闭闭严密密的展展开缸缸。（4）用窄窄的薄薄层板板或将将薄层层板下下角斜斜切成成“V”字形。。2.拖拖尾尾现现象象图谱情情况：：在圆或或椭圆圆形斑斑点的的后方方呈现现拖尾尾，严严重者者呈倒倒火焰焰状。。产生的的原因因:（1）点点样量