T-YNYY 001-2021 苹果矮化自根砧木组培快繁技术规程

ICS65.020.20CCSB31团 体 标 准T/YNYY001—2021苹果矮化自根砧木组培快繁技术规程TechnicalregulationsfortissuecultureandrapidpropagationofAppleDwarfRootstock2021-10-12发布 2021-10-13实施云南省园艺学会 发布T/YNYY001T/YNYY001—2021II前 言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由云南省农业科学院园艺作物研究所提出。本文件由云南省园艺学会归口。本文件起草单位：云南省农业科学院园艺作物研究所、云南大学、云南农业职业技术学院、昭通市苹果产业发展中心。本文件主要起草人：黄文静、杨光柱、刘丹丹、马钧、赵俊伟、丁仁展、苏俊、鲁兴凯、马勉娣。T/YNYY001T/YNYY001—2021PAGEPAGE10苹果矮化自根砧木组培快繁技术规程范围本文件规定了苹果（Malusspp.）砧木组织培养繁育生产过程中的设备、试剂及规划、培养基制备、组培室消毒灭菌、砧木组培苗生产、组培苗质量及包装、标签和运输等技术内容。本文件适用于苹果砧木(JM系列、CG系列、M系列、青砧系列)组织培养繁育苗木。规范性引用文件（包括所有的修改单适用于本文件。NY/T1085苹果苗木繁育技术规程NY/T2719苹果苗木脱毒技术规范NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程术语和定义NY/T 2036、NY/T2719、NY/T1085等界定的术语和定义适用于本文件。设备、试剂及规划NY/T2306的规定执行。组培苗繁育实验室或组培生产工厂规划应包括培养基制备灭菌室、清洗室、接种室、培养室、储存室（仓库）、温室或大棚等。培养基制备配方基本培养基基本培养基采用MSLSQL（顺序和附录相符外植体初代培养基JM系列LS6-mg/L～4.0mg/L+（NAA）0.1mg/L～0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L～9g/L，pH5.8~pH6.0。CG系列QL+6-苄基腺嘌呤（6-BA）0.5mg/L～1.0mg/L+吲哚乙酸（IAA）0.1mg/L～0.2mg/L+萘乙酸（NAA）0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L～9g/L，pH5.8~pH6.0。M系列MS+6-苄基腺嘌呤（6-BA）1.0mg/L～2.0mg/L+萘乙酸（NAA）0.025mg/L～0.05mg/L+吲哚丁酸（IBA）0.2mg/L～0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7～9g/L，pH5.8~pH6.0。半矮化自根砧青砧系列MS+6-苄基腺嘌呤（6-BA）4.0mg/L～5.0mg/L+萘乙酸（NAA）0.2mg/L～0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L～9g/L，pH5.8~pH6.0。增殖培养基JM系列LS+6-苄基腺嘌呤（6-BA）2.0mg/L～2.5mg/L+萘乙酸（NAA）0.1mg/L～0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L～9g/L，pH5.8~pH6.0。CG系列QL+6-苄基腺嘌呤（6-BA）1.0mg/L～1.5mg/L+玉米素（ZT）0.1mg/L～0.2mg/L+萘乙酸（NAA）0.1mg/L～0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L～9g/L，pH5.8~pH6.0。M系列MS+6-苄基腺嘌呤（6-BA）1.0mg/L～1.5mg/L+萘乙酸（NAA）0.05mg/L～0.1mg/L+吲哚丁酸（IBA）0.2mg/L～0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L～9g/L，pH5.8~pH6.0。半矮化自根砧青砧系列MS+6-苄基腺嘌呤（6-BA）1.0mg/L～2.0mg/L+吲哚乙酸（IAA）0.1mg/L～0.2mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉7g/L～9g/L，pH5.8~pH6.0。生根培养基JM系列1/2LS+mg/L～0.5mg/L+（IAA）0.5mg/L～1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L～9g/L，pH5.8~pH6.0。CG系列1/2QL+萘乙酸（NAA）0.3mg/L～0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L～9g/L，pH5.8~pH6.0。半矮化自根砧青砧系列、M系列1/2MS+吲哚乙酸（IAA）0.5mg/L～1.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉7g/L～9g/L，pH5.8~pH6.0。培养基母液培养基母液配制应符合以下要求：选用化学纯以上纯度的化学试剂，使用去离子水配制；ABC的基本培养基配方成分分组和浓度扩大倍数，分别配制大量元素（20倍）母液、钙元素（20倍）母液、微量元素（200倍)母液、铁元素（100倍）母液和有机物（100倍）母液；1mg/ml；有机物母液、铁元素母液和植物生长调节物质母液应储存在棕色试剂瓶中，试剂瓶分别贴上标签，标注母液名称、配制倍数、配制日期和有效期、配制人，置于冰箱冷藏保存。培养基配制按以下步骤进行培养基配制：根据培养基配方与培养基配制数量，计算各种母液的用量及配方中其它成分的用量，并记录；按照计算结果称量琼脂粉与蔗糖（或白砂糖），加入去离子水中，去离子水的量以培养基配1/2～2/3为宜，不断搅拌；加入相应母液，加去离子水定容，充分搅拌均匀；1.0mol/L1.0mol/LpH5.8~6.0。将培养基分装到培养瓶中，用封口膜、封口盖或棉塞加牛皮纸封口；121℃15min~20min；2周。组培苗生产组培室消毒灭菌见附件D无菌接种前的准备20min75%的酒精擦拭工作台台面及内壁。（280℃~320℃）常温使用，消毒瓶、灭菌水备用。外植体初代培养外植体的采集及处理5cm长段，置于瓶中。外植体消毒75%0.5min~1min30.1%6min~15min4遍~6外植体的切块及接种1cm1个~4个外植体，接种增殖培养增殖培养符合以下要求：0.5cm~1.5cm大小的丛梢或茎段，接入继代培养基，置于培养箱或培养室培养；1.0cm~2.0cm；4周~6周左右进行一次增殖转接，转接后继续培养；增殖阶段，苗发生“玻璃化”1.0g/L~2.5g/L聚乙烯醇（PVA）。5-612代。生根培养增殖培养8代~12代，切取高度大于2cm的粗壮嫩梢，转入生根培养基，每瓶接种4苗~5苗，进行生根培养。培养条件外植体初代培养、增殖培养、生根培养各阶段的接种材料均放至培养箱或培养室进行，温度（24±1）℃，光照强度1500Lx~2000Lx，10h~12h光照。瓶苗移栽移栽条件宜在温室（或大棚）进行炼苗，温度宜22℃-26℃，光照强度18000Lx~30000Lx。移栽容器及基质移栽容器可选用塑料或无纺布营养钵。基质可用蛭石、草炭、沙壤土1:1:1混合，装入移栽容器的2/3处，浇透水，并喷洒。组培苗质量组培苗炼苗应选择无细菌、真菌污染，苗高3cm以上，不定根3条以上，有侧根生长，幼茎粗壮，茎基部没有或有少量愈伤组织，长有3片~4片叶片，叶片发育良好，无黄叶，无枯尖的瓶苗。生根培养3周~51.0cm20dd～7d，期间保持水分，注意遮阴。炼好的组培苗，洗去根部培养基，即可移栽。移栽将清洗干净的组培苗，直立置于移栽容器的基质上，根系尽量舒展，用0.1%多菌灵药液搅拌消毒过的蛭石覆盖并固定根系。栽后放置于温室或大棚中，喷洒0.1%多菌灵液防病，扣小拱棚保持水分保，温度22℃-26℃，湿度65%-75%，注意前期遮阴。栽后管理移栽7d~10d后，逐渐揭膜通风，降低湿度到40%-50%，直至完全除去薄膜。每1周~2周喷1次0.1%多菌灵。后期，根据小苗生长状况，不同苹果矮化自根砧采用MS、LS、QL营养液作为补充。大田移栽NY/T1085的规定执行。移栽前加强通风炼苗，控制浇水，高温季节应适当遮阴。60d~70d10cm，可带基质移栽至大田苗圃地中。脱病毒苗培育0.1mm~0.2mm（带1个或2个叶原基）作为外植体接种。脱毒方法及病毒检测方法按NY/T2719执行。经病毒检测确认脱毒的材料进行组织培养繁育，操作与6.3、6.4、6.5相同。包装、标签和运输包装标签标签标明品种、瓶苗数量、包装时间等。运输运输过程不宜剧烈颠簸，长途运输时宜洗去培养基，高温季节加冰袋。附 录 A（规范性）MS培养基成分及母液配制表MS培养基成分及母液配制表见表A.1，适用于M系砧木、青砧系砧木。表A.1MS培养基成分及母液配制表母液及倍数试剂配方规定量mg/L配置1L母液需求量g大量元素20倍NH4NO3165033KNO3190038MgSO4·7H2O1707.4KH2PO43703.4钙元素20倍倍数的表示CaCL2·6H204408.8微量元素200倍KI0.830.16H3BO36.21.24MnSO4·H2O22.33.38ZnSO4·7H2O8.61.72NaMoO4·2H2O0.255010-3CuSO4·5H2O0.025510-3CoCl·6H2O0.025510-3铁元素200倍FeSO4·7H2O37.35.56Na2EDTA·2H2O27.87.46有机物200倍肌醇10020烟酸0.50.1盐酸吡哆醇0.50.1烟酸硫胺素0.50.2甘氨酸20.4附 录 B（规范性）LS培养基成分及母液配制培养基成分及母液配制见表B.1，适用于JM系砧木。表B.1LS培养基成分及母液配制表母液及倍数试剂配方规定量mg/L配置1L母液需求量g大量元素20倍NH4NO3165033KNO3190038MgSO4·7H2O3707.4KH2PO41703.4钙元素20倍CaCL2·6H204408.8微量元素200倍KI0.830.166H3BO36.21.24MnSO4·H2O22.34.46ZnSO4·7H2O8.61.72NaMoO4·2H2O0.255010-3CuSO4·5H2O0.025510-3CoCl·6H2O0.025510-3铁元素200倍FeSO4·7H2O37.35.56Na2EDTA·2H2O27.87.46有机物200倍肌醇10020烟酸硫胺素0.10.2附 录 C（规范性）QL培养基成分及母液配制培养基成分及母液配制见表C.1，适用于CG系砧木。表C.1QL培养基成分及母液配制表母液及倍数试剂配方规定量mg/L配置1L母液需求量g大量元素20倍NH4NO34008KNO3180036MgSO4·7H2O3607.2KH2PO42705.4钙元素20倍CaCL2·6H20120016.62微量元素200倍KI0.830.16H3BO36.21.24MnSO4·H2O22.33.38ZnSO4·7H2O8.61.72NaMoO4·2H2O0.255010-3CuSO4·5H2O0.025510-3CoCl·6H2O0.025510-3铁元素200倍FeSO4·7H2O37.35.56Na2EDTA·2H2O27.87.46有机物200倍肌醇10020烟酸0.50.1盐酸吡哆醇0.50.1烟酸硫胺素0.50.1甘氨酸20.4附 录 D（资料性）接种室消毒灭菌每天清洁接种室地面、窗台、超净工作台等，去除灰尘、杂质、污物。每15m2配置1根30w紫外灯，每1g臭氧杀菌20m3，每天操作前应用紫外灯照射杀菌15min-30min，杀菌时禁止进入。每周用75%酒精溶液作喷雾降尘处理1次，用84消毒液拖地消毒1次。2个月~3个月清洁超