梅毒的实验室检查与技术规范课件

梅毒的实验室检查与技术规范

朱穗兰2013年3月2日主要内容梅毒概述梅毒血清学检测方法梅毒检测技术规范梅毒概述（一）性接触是主要的传染途径未经治疗的患者在感染后的1年内最具有传染性随着病期的延长，传染性越来越小到感染后2年，通过性接触一般无传染性母婴传播在妊娠7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传染未经治疗者，虽已无性传播（病期>2年），但妊娠时仍可传染给胎儿,病期越长，传染性越小;梅毒概述（二）一期梅毒硬下疳和(或)腹股沟淋巴结肿大二期梅毒

可有一期梅毒史，病期在2年以内有多形性皮疹、扁平湿疣等三期（晚期）梅毒可有一期或二期梅毒史，病期在2年以上皮肤黏膜损害等，包括神经梅毒、心血管梅毒隐性（潜伏）梅毒早期：病期在2年以内；晚期：病期在2年以上。无任何梅毒性的症状和体征胎传（先天）梅毒早期：在2岁前发生；晚期：在2岁以后发病。胎传隐性梅毒：无临床表现梅毒概述（三）疑似病例、确证病例诊断依据：病史症状实验室检查梅毒的实验室检查结果对诊断有决定性意义梅毒实验室检测技术病原学检测血清学检测梅毒血清学检测方法梅毒血清学检测分类(1)非梅毒螺旋体抗原血清学试验（非特异性梅毒抗体）(2)梅毒螺旋体抗原血清学试验（特异性梅毒抗体）两类方法。为什么梅毒实验室诊断需要两类血清学检测方法？非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理人体感染了梅毒螺旋体后，组织受到破坏，释放出来的一种类脂成分，与梅毒螺旋体结合形成完全抗原，刺激机体在3周-4周产生类脂质抗体（反应素）。主要是IgM和IgG混合抗体。抗体的作用无保护作用，治疗监测。未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性。临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么有定性和定量两种检测法？非梅毒螺旋体抗原血清学试验所有非梅毒螺旋体抗原血清试验的抗原基本成分都是一样方法包括：（1）快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)（2）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）（3）性病研究实验室试验(VDRL)等。基本成分是心磷脂卵磷脂和胆固醇抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见上述方法的敏感性和特异性都基本相似试验特点点原理和成成分与试试验相同同血清不需需要灭活活不需要显显微镜观观测结果果可作定量量试验有现成的的试剂盒盒携带方方便操作简单单价格便宜宜操作要点点仪器：水平旋转转仪。定性实验验加样：吸吸取50ul血血清(浆)放在卡片片圈中，，并均匀匀地涂布布在整个个圈内加抗原：：将抗原原轻轻摇摇匀，用用9号针头加加1滴抗原反应：将将卡片置置水平旋旋转仪旋旋转8分钟，立立即在亮亮光下观观察结果果3.定量试验验稀释夜准准备：在在圈内加加入50uL生理盐水水（根据需需要确定定稀释度度），勿勿将盐水水涂开。。加样：吸吸取50uL血清（浆浆）与各各圈中盐盐水作系列列稀释，，并涂布布整个圈圈内。下同定性性试验。。非梅毒螺螺旋体抗抗原血清清学试验验结果判判断RPRTRUST非梅毒螺螺旋体抗抗原血清清学试验验临床意意义早期梅毒毒硬下疳疳出现1周-2周后，，血清可可呈阳性性。经治疗后后血清滴滴度可下下降并转阴性，故故可作为为疗效观观察、判判愈、复复发或再再感染的的指征。。为什么要要做定量量检测？？非梅毒螺螺旋体抗抗原血清清学试验验临床意意义一期梅毒毒1年后后转为阴阴性二期梅毒毒2年后后转为阴阴性。晚期梅毒毒治治疗后血血清滴度度下降缓缓慢，2年后约约50%病人血血清反应应仍为阳阳性。TRUST结果果解释示示意图假阳性问问题假阳性：非梅毒毒患者的的血清反反应呈阳阳性①技术性假假阳性由于标本的的保存不当当（如细胞胞污染或溶溶血）、试试剂质量差差或过期、、或实验室室操作错误误所造成。。②生物学假阳阳性是由于患者者有其他疾疾病或生理理状态发生生变化，使使梅毒血清清试验出现现阳性某些疾病：：结核、疟疟疾、肝病病、红斑狼狼疮、流感感、肺炎、、类风湿性性关节炎、、风湿性心心脏病、风风疹、系统统性硬化症症等，疾病病发展过程程中释放心心磷脂到血血液中呈假阳性。老年人。生理机能发发生变化：：少数孕妇妇也可发生生生物学假假阳性。梅毒假阳性性反应的处处理技术性假阳阳性反应一一般是由于于操作错误误引起的假假阳性反应应，经过重重复试验即即可除外。。对生物学假假阳性反应应，应做TPHA（（TPPA）等试验验进行排除除。前带现象指非梅毒螺螺旋体抗原原血清试验验中，有时时血清中存存在高浓度度的抗体时时出现的弱弱阳性、不不典型或阴阴性反应的的结果，而而临床上又又象二期梅梅毒，此时时将血清稀稀释后再进进行试验，，出现了阳阳性的结果果，该现象象称为前带带现象。处理：将血清稀释释后再进行行试验。耐血清性（（血清固定定）指经抗梅毒毒治疗后，，非梅毒螺螺旋体抗原原血清试验验在一定时时期内不阴阴转。早期期的耐血清清性常与治治疗量不足足或不规则则治疗、复复发、再感感染或有神神经系统梅梅毒等因素素有关。梅毒螺旋体体抗原血清清学试验梅毒螺旋体体抗原血清清学试验方方法梅毒螺旋体体颗粒凝集集试验(TPPA)梅毒螺旋体体血球凝集集试验(TPHA)梅毒酶联免免疫吸附试试验（ELISA））梅毒免疫层层析法-梅梅毒快速检检测(RT)荧光螺旋体体抗体吸收收试验（FTA-ABS）化学发光免免疫分析法法（CLIA）梅毒螺旋体体蛋白印迹迹试验（WB）TPPATPPA试试验用梅毒毒螺旋体致致敏明胶颗颗粒，此致致敏颗粒与与人血清中中的抗梅毒毒螺旋体抗抗体结合，，产生可见见的凝集反反应，具有有较高的敏敏感性和特特异性。TPPA是是目前WHO认可的的梅毒抗原原血清学试试验的“金金标准”，，常用于新新方法、新新试剂评价价的参照标标准。TPPA(TPHA)试验原理示示意图梅毒螺旋体体抗原血清清试验的临临床意义一般情况下下，一旦梅梅毒患者梅梅毒螺旋体体抗原血清清试验呈阳阳性，即使使经过正规规有效治疗疗治，仍将将终身阳性性。所以TPPA等等试验不能能作为疗效效观察的指指标。作为非梅毒毒螺旋体抗抗原血清试试验初筛阳阳性标本的的确证试验验。TPPA等等阳性不能能区分既往往感染和现现症感染，，应结合非非梅毒螺旋旋体抗原血血清试验结结果进行诊诊断。TPPA结结果解释示示意图梅毒血清学学试验结果果解释梅毒血清学学试验结果果解释梅毒检测技技术规范简简介全国梅毒检检测技术规规范第一章梅毒检测样样品的采集集和处理第二章梅毒血清学学检测第三章梅毒病原体体显微镜检检测第四章梅毒病原体体核酸检测测第五章实验室生物物安全第六章梅毒检测实实验室质量量管理第一章样样品的采集集和处理血清、血浆浆、全血及及脑脊液:梅毒血清学学检测或核核酸检测皮损部位组组织液、淋淋巴穿刺液液:梅毒病原体体检测或核核酸检测。。梅毒血清学学试验适用用范围第二章梅梅毒血清学学检测检测目的:临床诊断、、血液筛查查、流行病病学监测以临床诊断断为目的的的检测是为为了确定梅梅毒感染的的状况。以血液筛查查为目的的的检测是为为了防止梅梅毒的经血血传播。以流行病学学监测为目目的的检测测是为了调调查梅毒血血清学感染染率和发病病率。梅毒实验室室检测策略略选择根据目的选选择检测方方法及检测测策略。可采用任何何一类梅毒毒血清学检检测方法作作为筛查试试验。以临床诊断断为目的检检测策略一一以临床诊断断为目的检检测策略二二策略一和策策略二比较较第三章梅梅毒体病原原学检测检测方法暗视野显微微镜检查镀银染色检检查第四章梅梅毒核酸检检测可对血浆、、血清、皮皮损部位组组织液、淋淋巴穿刺液液及脑脊液液等标本的的梅毒螺旋旋体核酸检检测在早期梅毒毒、神经梅梅毒和先天天梅毒等诊诊断，以及及螺旋体现现症感染和和既往感染染鉴别诊断断中具有一一定的价值值可应用于梅梅毒螺旋体体的耐药性性监测、菌菌株流行病病学分型。。第五章实实验室生物物安全梅毒的生物物危害梅毒螺旋体体属第三类类病原微生生物，一般般情况下对对人、动物物或者环境境不构成严严重危害，，传播风险险有限，实实验室感染染后很少引引起严重疾疾病，是有有有效治疗疗和预防方方法的致病病微生物梅毒相关检检测的生物物安全级别别为了保证安安全，对临临床和现场场未知样本本的梅毒血血清学检测测应在符合合Ⅱ级生物物安全实验验室（BSL-2））要求的实实验室中进进行。如有有艾滋病检检测实验室室，可以在在艾滋病抗抗体检测实实验室中进进行。第六章实实验室质量量管理质量保证质量评估试剂评价质量保证检测方法和和试剂的选选择用于临床诊诊断的检测测方法应使使用经国家家食品药品品监督管理理局注册批批准的试剂剂，应选择择敏感性高高、特异性性好的试剂剂。性病参参比实验室室和省级性性病中心实实验室应定定期组织开开展梅毒诊诊断试剂的的临床质量量评价和新新方法与技技术的评估估。质量评价所有梅毒检检测实验室室应参加外外部质量评评价省级中心实实验室应参参加国家级级职能工作作考核和PT其他实验室室应参加省省级职能工工作考核和和PT。质量评价考评组织单单位根据PT考核结结果、职能能工作评价价结果及对对部分实验验室现场评评价情况，，汇总各实实验室的最最终考评结结果，上报报相关机构构。考评评单单位位应应将将考考评评得得分分及及扣扣分分原原因因反反馈馈各各参参评评实实验验室室，，以以适小结结1、、非非梅梅毒毒螺螺旋旋体体抗抗原原血血清清学学试试验验阳阳性性往往往往是是梅梅毒毒现现症症感感染染者者，，临临床床上上即即可可开开展展治治疗疗。。2、、非非梅梅毒毒螺螺旋旋体体抗抗原原血血清清学学试试验验定定量量试试验验可可作作为为疗疗效效观观察察的的指指标标。。3、、完完善操操作作的的标标准准化化，，杜杜绝绝有有个个人人特特点点的的操操作作。。4、、根根据据目目的的选选择择检检测测方方法法及及检检测测策策略略。。可可采采用用任任何何一一类类梅梅毒毒血血清清学学检检测测方方法法作作为为筛筛查查试试验验。。5、、临床9、静静夜夜四四无无邻邻，，荒荒居居旧旧业业贫贫。。。。12月月-2212月月-22Wednesday,December28,202210、雨中黄黄叶树，，灯下白白头人。。。21:26:3221:26:3221:2612/28/20229:26:32PM11、以我独沈沈久，愧君君相见频。。。12月-2221:26:3221:26Dec-2228-Dec-2212、故人江海别别，几度隔山山川。。21:26:3221:26:3221:26Wednesday,December28,202213、乍见翻疑梦梦，相悲各问问年。。12月-2212月-2221:26:3221:26:32December28,202214、他乡生白白发，旧国国见青山。。。28十二二月20229:26:32下下午21:26:3212月-2215、比不了了得就不不比，得得不到的的就不要要。。。十二月229:26下午午12月-2221:26December28,202216、行动出成果果，工作出财财富。。2022/12/2821:26:3221:26:3228December202217、做做前前，，能能够够环环视视四四周周；；做做时时，，你你只只能能或或者者最最好好沿沿着着以以脚脚为为起起点点的的射射线线向向前前。。。。9:26:32下下午午9:26下下午午21:26:3212月月-229、没有有失败败，只只有暂暂时停停止成成功！！。12月月-2212月月-22Wednesday,December28,202210、很多多事情情努力力了未未必有有结果果，但但是不不努力力却什什么改改变也也没有有。。。21:26:3221:26:3221:2612/28/20229:26:32PM11、成功就是日日复一日那一一点点小小努努力的积累。。。12月-2221:26:3221:26Dec-2228-Dec-2212、世世间间成成事事，，不不求求其其绝绝对对圆圆满满，，留留一一份份不不足足，，可可得得无无限限完完美美。。。。21:26:3221:26:3221:26Wednesday,December28,202213、不知香积积寺，数里里入云峰。。。12月-2212月-2221:26:3221:26:32December28,202214、意志坚强的的人能把世界界放在手中像像泥块一样任任意揉捏。28十二月月20229:26:32下午21:26:3212月-2215、楚塞三三湘接，，荆门九九派通。。。。十二月229:26下午午12月-2221:26December28,202216、少年年十五五二十十时，，步行行夺得得胡马马骑。。。2022/12/2821:26:3221:26:3228December202217、空山新雨雨后，天气气晚来秋。。。9:26:32下下午9:26下下午21:26:3212月-229、杨柳柳散和和风，，青山山澹吾吾虑。。。12月月-2212月月-22Wednesday,December28,202210、阅阅读读一一切切好好书书如如同同和和过过去去最最杰杰出出的的人人谈谈话话。。21:26:3221:26:3321:2