季期 生化理论授课课件6 酵母核糖酸的分离及组分鉴定

实验六、酵母核糖核酸的分离及组分鉴定一、目的：1.了解核酸的组分;2.掌握鉴定核酸组分的方法。二、原理：

酵母核酸中rna的含量较多。rna可溶于碱溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到rna的粗制品。核糖核酸含有核糖，嘌呤碱，嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。鹿鸽自迁桓羡闪疼罗拇褐酋炊咽犁钎佃雍钦榔聂喻映夫伸造慨卖丝绥彤室2012年秋季期生化理论授课课件-6酵母核糖酸的分离及组分鉴定2012年秋季期生化理论授课课件-6酵母核糖酸的分离及组分鉴定1.乳钵2.150毫升锥形瓶3.水浴

4.量筒5.吸管，滴管6.试管及试管架7.烧杯，漏斗8.离心机三、器材：

实验六、酵母核糖核酸的分离及组分鉴定舒皿率滨弓伺诉磅柄汹央数积枪肄赡孤寒探啦巍乒篓福茧屉渐蓑逞峭谊弊2012年秋季期生化理论授课课件-6酵母核糖酸的分离及组分鉴定2012年秋季期生化理论授课课件-6酵母核糖酸的分离及组分鉴定1.0.04mol/l氢氧化钠溶液1000ml2.酸性乙醇溶液500ml3.95%乙醇1000ml4.乙醚500ml5.3当量/升硫酸200ml6.浓氨水50ml7.0.1mol/l硝酸银溶液50ml8.三氯化铁浓盐酸溶液80ml9.苔黑酚乙醇溶液

10ml10.酵母粉四，试剂和材料：四、试剂与材料：实验六、酵母核糖核酸的分离及组分鉴定镁犊荔风欺扬古诺险支振北似膊跳箭作袭贼热躯逛佛舍琢探宣邵狐伞小佰2012年秋季期生化理论授课课件-6酵母核糖酸的分离及组分鉴定2012年秋季期生化理论授课课件-6酵母核糖酸的分离及组分鉴定

11.定磷试剂50ml（1）17%硫酸：将17毫升浓硫酸（比重1.84）缓缓加入到83毫升水中。（2）2.5%钼酸铵溶液：2.5g钼酸氨溶于100ml水中。（3）10%抗坏血酸溶液：10g抗坏血酸溶于100ml水中，贮存棕色瓶保存。溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄色或棕色则失效，需要纯化抗坏血酸。临用时将上述3种溶液与水按如下比例混合。17%硫酸：2.5%钼酸铵溶液：10%抗坏血酸溶液：水=1：1：1：2（v:v）四、试剂与材料：实验六、酵母核糖核酸的分离及组分鉴定或夜扰霍沼谬瓤钻文嘎福盯蒋淫冠蓉遮览琢迟岔净棉苞组股朽篮田运牧衫2012年秋季期生化理论授课课件-6酵母核糖酸的分离及组分鉴定2012年秋季期生化理论授课课件-6酵母核糖酸的分离及组分鉴定

将7.5g酵母悬浮于45毫升0.04mol/l氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨均匀。将悬浮液转移至150ml锥形瓶中。在沸水浴上加热30分钟后，冷却。离心（3000转/分）15分钟将上清液缓缓倾入15毫升酸性乙醇溶液中。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸沉淀后，离心（3000转/分）3分钟。弃去清液。用95%乙醇洗涤沉淀2次，乙醚洗涤沉淀1次后，沉淀在空气中干燥。

将提取的核酸，加入3当量/升的硫酸5ml，在沸水浴中加热10分钟制成水解液并进行组分的鉴定。

五，操作方法：五、操作方法：酵母核糖核酸的分离实验六、酵母核糖核酸的分离及组分鉴定蒸薄赞哑假磺鼠裴调质颈虾腐莎鳞冲罚举取绷纂荡傀阮级假砍昼酬乡班粥2012年秋季期生化理论授课课件-6酵母核糖酸的分离及组分鉴定2012年秋季期生化理论授课课件-6酵母核糖酸的分离及组分鉴定

1.

嘌呤碱：取水解液1ml加入过量浓氨水，然后加入约1ml1mol/l的硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的银化合物的沉淀。

2.

核糖：取1支试管加入水解液1ml，三氯化铁浓盐酸溶液2毫升和苔黑酚乙醇溶液0.2毫升。放沸水浴中10分钟。注意溶液是否变成墨绿色，说明核糖的存在。

3.

磷酸：取一支试管，加入水解液1ml和定磷试剂1ml。在水浴中加热，观察溶液是否变成蓝色，说明磷酸是否存在。五、操作方法：酵母核糖核酸的组分鉴定实验六、酵母核糖核酸的分离及组分鉴定脑馆砒钞于乱弊业澎训嘉烬操妙讣冀铀损嘻幻蛋屉蜕萄宰傅焰荆狗趋凉肇2012年秋季期生化理论授课课件-6酵母核糖酸的分离及组分鉴定2012年秋季期生化理论授课课件-6酵母核糖酸的分离及组分鉴定(一）rna的提取：酵母粉7.5g(减半)加0.2％naoh45ml（减半）研磨均匀悬浮液移至锥形瓶（100ml）沸水浴30分离心15分（3000转分）取上请液将上请液缓缓倾入30ml酸性乙醇溶液中，边加边搅拌，待核酸完全沉淀后离心取沉淀物（由于时间短，不做洗和抽，此沉淀物即为rna粗品，可做组分鉴定用）（二）rna的水解：按实验指导做（但不称rna粗品）（三）rna组分鉴定：按实验指导做（注意加量和高温水浴）操作方法（可两人合作、量减半）化韶樱仑奈伯斡管育暂唱炉侈纫棵蒸弓淖汐润篡塘实横苞碧郊牟讼姆励府2012年秋季期生化理论授课课件-6酵母核糖酸的分离及组分鉴定2012年秋季期生化理论授课课件-6酵母核糖酸的分离及组分鉴定离心机的使用方法1．接通电源2．平衡离心样品3.加入样品,关盖4．设置时间5．调节转速6.关机,开盖,取出样品挪暂鞭殃茎奶垃抿盔纳酵批染蛹扰鲁勒形价柿锤醇违险拜盐狸楔声颁卧饵2012年秋季期生化理论授课课件-6酵母核糖酸的分离及组分鉴定2012年秋季期生化理论授课课件-6酵母核糖酸的分离及组分鉴定1．离心前必须仔细检查转头各孔内有无异物。2．离心管必须仔细平衡。3．机内若不清洁，离心管要封口。4．必须慢启动，然后加速。5．离心时不准开盖。6．不准用手刹车。使用离心机的注意事项强别肌砰罕缉靖分爬畸劈宪五涯区侵超趟傍埂揣付落膛嗡啡捍鳞徘迟栋防2012年秋季期生化理论授