标准解读

《GB/T 38165-2019 人体外周血中循环游离DNA浓度检测 基于Alu序列实时荧光PCR法》是一项国家标准，旨在规范通过Alu序列实时荧光定量PCR技术对人体外周血中的循环游离DNA（cfDNA）进行浓度测定的方法。该标准适用于临床实验室、科研机构等需要对血液样本中的cfDNA含量进行准确测量的场合。

根据此标准，首先需准备合适的实验材料与试剂，包括但不限于：外周血样本、DNA提取试剂盒、特异性针对人类基因组Alu序列设计的引物和探针以及用于实时荧光PCR扩增的相关耗材。接着，按照规定步骤从全血样品中分离出无细胞DNA，并利用特定的Alu引物及探针体系，在荧光定量PCR仪上完成目标片段的扩增过程。通过比较未知样品与已知浓度标准品之间Ct值的关系，可以计算得到待测样本中cfDNA的具体含量。

整个检测流程强调了操作过程中质量控制的重要性，如设置空白对照、阳性对照及内参等措施来确保结果准确性；同时对于数据处理也给出了具体指导，比如如何利用标准曲线法求得样本浓度值等。此外，还详细描述了可能影响实验结果的因素分析及其应对策略，帮助实验人员更好地理解和掌握该方法的应用条件和技术要点。

本标准为我国在循环游离DNA领域提供了统一的技术规范，促进了相关研究工作的标准化发展。


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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2019-10-18 颁布
  • 2019-10-18 实施
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GB/T 38165-2019人体外周血中循环游离DNA浓度检测基于Alu序列实时荧光PCR法_第1页
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文档简介

ICS07080

A40.

中华人民共和国国家标准

GB/T38165—2019

人体外周血中循环游离DNA浓度检测

基于Alu序列实时荧光PCR法

Detectionofcirculatingcell-freeDNAconcentrationinhumanperipheralblood—

Real-timePCRmethodbasedonAlusequence

2019-10-18发布2019-10-18实施

国家市场监督管理总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T38165—2019

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由全国生化检测标准化技术委员会提出并归口

(SAC/TC387)。

本标准起草单位成都中医药大学四川省肿瘤医院上海市计量测试技术研究院

:、、。

本标准主要起草人何洋肖洪涛宋瑱李燕闻艳丽冷平刘刚李东梅

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T38165—2019

人体外周血中循环游离DNA浓度检测

基于Alu序列实时荧光PCR法

1范围

本标准规定了人体外周血中循环游离脱氧核糖核酸基于序列的实时荧光聚合酶链式

(DNA)Alu

反应定量检测方法

(PCR)。

本标准适用于循环游离样品中序列的定量检测

DNAAlu。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

实验室生物安全通用要求

GB19489

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件

。

31

.

循环游离DNAcirculatingcell-freeDNAcfDNA

;

血液中来源于细胞凋亡和坏死的细胞外游离状态的短片段

DNA。

32

.

实时荧光PCRreal-timePCR

在反应体系中加入荧光基团通过荧光信号的积累实时监控整个扩增过程实现对起始

PCR,PCR,

模板的定量及定性分析

。

33

.

Ct值cyclethreshold

每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数

。

34

.

Alu序列Alusequence

散在分布于灵长类动物基因组中的中度重复序列

。

注序列具有同源性占人类基因组序列的每个元件长度约为

:Alu70%~98%,5%~10%,300bp。

4原理

以提取的外周血循环游离作为检测目标样品以符合要求的人基因组定量标准物质为

DNA,DNA

标准品采用实时荧光技术设计特异性引物分别扩增序列中长度为和的片

,PCR,Alu115bp219bp

段以标准品起始模板浓度的对数为横坐标值为纵坐标制作标准曲线根据标准曲线方程

,DNA,Ct,。

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