洁净室沉降菌检测标准操作规程

目的建立洁净室沉降菌检测的标准操作程序，用以规范检测人员的检测操作。范围适用于洁净区沉降菌的检测。职责3.1质量部专职检验员负责洁净室沉降菌的检测。3.2质量监督员负责监督本规程的执行情况。内容4.1仪器设备及培养基4.1.1培养皿：玻璃培养皿或一次用无菌培养皿。4.1.2培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）。4.1.3仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅。4.2检测用培养基平皿的制备玻璃培养皿使用前应先灭菌，制备培养基平皿时注意无菌操作，每批次应设置对照平皿。制备好的培养基平皿在2〜8C的环境中存放。4.3采样4.3.1工作区采样点的位置离地0.8米〜1.5米左右（略高于工作面）。采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最少采样点数目，并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。图1采样点位置参考图4.3.2采样次数对任何小洁净室或局部空气净化区域，采样点不得少于2个，每个采样点一般采样一次。表1最少采样点数 表2最少培养皿数面积（m面积（m2）洁净度级别10010000100000<102〜322>10-<20422>20-<40822>40〜<1001642>100〜<20040103>200〜<40080206洁净度级别最少培养皿数100141000021000002注：表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风面积，对于非单向流洁净室，是指房间面积。4.4采样注意事项4.4.1测试用具要做无菌处理，以确保测试的可靠性，正确性。4.4.2采取一切措施，防止人为对样本的污染。4.4.3对培养基、培养条件及其它参数做相应的记录。4.4.4计数时一般用透射光对培养皿背面或正面仔细观察，不要漏记培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别。必要时，用显微镜鉴别。4.4.5采样前应仔细检验每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。4.5测试状态空态、静态和动态三种状态均可进行测试。空态或静态时，室内测试人员不得多于2人。确保静态测试时洁净室净化空调系统已处于正常运行状态，动态测试时洁净室已处于正常生产状态。测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度必须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。4.6测试时间对单向流，如100级净化房间及层流工作台，应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始；对非单向流，如10000级、100000级以上的净化室，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。动态测试时，须记录生产开始的时间及测试时间。4.7测试方法及培养计数4.7.1测试方法将已制备好的培养皿按采样点的布置要求逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养皿表面暴露0.5小时，再将培养皿盖盖上后倒置。4.7.2培养全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中30—35C培养，时间不少于48小时。4.7.3计数用肉眼直接点标记计数，然后用5一10倍放大镜检查，有无遗漏。若培养皿上有二个以上菌落重叠，可分辨时以二个以上菌落数计数。得出各个培养皿的菌落数，统计总菌落数及总皿数，求出1皿的平均菌落数。4.8结果评判平均菌落数要低于标准，若出现微生物超标的情〉兄，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。具体技术要求见表3和表4。表3洁净室静态沉降菌技术要求洁净级别CFU/皿，0.5小时检验频次100<11次/月10000<31次/月100000<101次/月表4洁净室动态沉降菌技术要求洁净级别CFU/皿，0.5小时检验频次100<11次/天10000<31次/天100000<101