十八种实验室常用的克隆感受态细胞

感受态种类应用DH5a实验室最常用的感受态细胞，转化效率高，可用于蓝白斑筛选TOP10常规实验用克隆感受态细胞，生长速度快，转化效率高，可用于蓝白斑筛选JM109提取高质量DNA的理想菌株，可用于构建克隆，蓝白斑筛选实验Mach1-T1生长速度快，转化效率高！具有噬菌体抗性JM110甲基化基因dam,dcm缺失菌株，只适用于质粒的转化，一般不用于质粒构建XL1-Blue可提取高纯度质粒DNA，能保证高拷贝质粒稳定复制，可用于蓝白斑筛选XL1-BlueMRF'Kan菌株来源于XL1-Blue株系，是限制酶系统缺失型，且具有卡那霉素抗性XL2-Blue适用于大质粒DNA和重组产物的转化，降低片段大小的偏爱性，多用于文库构建DB3.1适用于构建或扩繁含有ccdB基因的质粒载体XL10-Gold特异性用于大质粒或珍贵连接产物转化或构建文库的超级感受态细胞TG1生长速度最快的克隆用大肠杆菌菌株之一，主要用于噬菌体展示，也可用于普通质粒构建HB101可抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率Stbl2适合克隆不稳定插入片段，甲基化的基因组序列，以及慢病毒载体的构建Stbl3慢病毒载体系统推荐使用的菌株Stbl4慢病毒载体或逆转录病毒载体推荐使用的菌株，电转特别适合于文库的构建SURE菌株体内重组酶系统整条通路被破坏，提高外源甲基化DNA的克隆效率DH10B可提取高纯度DNA,适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNADH10BacDH10Bac菌株主要用于生产重组杆状病毒分子（Bac-to-Bac杆状病毒表达系统）DH5a:DH5a菌株是实验室最常用的感受态细胞。缺失核酸内切酶（endA），提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型（recA）减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性;lacZAM15的存在使DH5a可用于蓝、白斑筛选。DH5a感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率＞5x108cfu/ugDNA。TOP10：TOP10菌株来源于MC1061菌株，是目前实验室最常用的感受态细胞之一，基因型与DH10B高度类似（DH10B为galE15型，而TOP10为galU型）。TOP10生长速度快（比DH5a快，但比Mach1-T1生长速度慢）,10小时可见克隆，recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。可用于构建克隆，蓝白斑筛选等实验。TOP10感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率＞5x108cfu/ugDNA。JM109：JM109菌株来源于E.coliKstrain，是提取高质量DNA的理想菌株，recAI和endAI的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。携带hsdR17基因型背景，使得异源DNA不被内源核酸酶系统降解。laqIqZAM15的存在使JM109可用于构建克隆，蓝白斑筛选实验JM109感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率可达109cfu/pgDNA。Mach1-T1:Mach1-T1菌株由野生型non-K-12E.ColiW菌株改造而来，是目前生长速度较快的感受态细胞之一，在平板上8h可见克隆，缺失核酸内切酶(endA)，提高了质粒DNA的产量和质量;重组酶缺陷型(recA1398)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性;lacZAM15的存在使Mach1-T1可用于蓝、白斑筛选；tonA突变赋予Mach1-T1菌株对噬菌体T1和T5的抗性。Mach1-T1感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率＞3何/的DNA。JM110：JM110菌株具有硫酸链霉素抗性区卬；是甲基化基因damdcm缺失的菌株，提取得到的质粒DNA，可被对dam、dcm甲基化敏感的内切酶切割；ladqlacZAM15的存在使JM110可以进行蓝白斑筛选，但转化效率不高，一般不用于质粒构建，只适用于质粒转化。JM110感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率约107cfu/pgDNA。XL1-Blue:XL1-Blue菌株能保证高拷贝质粒稳定复制，recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。hsdR17突变导致EcoK核酸内切酶系统缺失，增强了外源DNA的稳定性和提取质量。lacIqZAM15的存在使XL1-Blue菌株可用于蓝、白斑筛选。此菌株具有四环素抗性。XL1-Blue感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率＞3何/的DNA。XL1-BlueMRF'Kan:XL1-BlueMRF'Kan菌株来源于XL1-Blue株系，是限制酶系统缺失型[A(mcrA)183,A(mcrCB-hsdSMR-mrr)173],,且具有卡那霉素抗性(KanR)，可转化具有氯霉素或四环素抗性的质粒。recAI和endAI的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。hsdR17突变导致EcoK核酸内切酶系统缺失，增强了外源DNA的稳定性和提取质量。ladqZAM15的存在使XL1-BlueMRF'Kan菌株可用于蓝、白斑筛选。XL1-BlueMRF'Kan感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率＞108cfu/pgDNA。XL2-Blue:XL2-Blue菌株来源于XL1-Blue菌株，为Hte(hightransformationefficiency)基因型，Hte是Stratagene开发的特异性提高感受态转化效率及大质粒转化能力的宿主菌基因型，已成功应用于40kd质粒的构建。Hte使得XL2-Blue适用于大质粒DNA和重组产物的转化，降低片段大小的偏爱性，多用于文库构建。recAI和endAI的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。hsdSMR突变导致EcoK核酸内切酶系统缺失，增强了外源DNA的稳定性和提取质量。lacZAM15的存在使XL2-Blue菌株可用于蓝、白斑筛选。此菌株具有四环素和氯霉素抗性。XL2-Blue感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率＞109cfu/ugDNA。DB3.1DB3.1大肠杆菌菌株基因组中含有gyrA462基因，赋予其对ccdB毒性基因的抗性，特别适用于构建或扩繁含有ccdB基因的质粒载体(例GATEWAYSystemvector)，此菌株具有链霉素抗性。DB3.1感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19检测转化效率＞108cfu/ugDNA。XL10-Gold：XL10-Gold是目前转化效率最高的感受态细胞，由Stratagene开发的特异性用于大质粒或珍贵连接产物转化或构建文库的超级感受态细胞。XL10-Gold菌株为Hte(hightransformationefficiency)基因型，Hte是Stratagene开发的特异性提高感受态转化效率及大质粒转化能力的宿主菌基因型，已成功应用于40kd质粒的构建。［A(mcrA)183△(mcrCB-hsdSMR-mrr)173赋予XL10-Gold缺失几乎所有已知的限制酶切系统；同时缺失核酸内切酶(endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型(recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性；TetR,CamR赋予菌株四环素和氯霉素抗性;lacIqZAM15的存在使XL10-Gold可用于蓝、白斑筛选。XL10-Gold感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>2x109cfu/ugDNA。转化方法：XL10-Gold感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。42℃水浴热激35秒(非常重要——Efficiencydecreasessharplywhencellsareheat-pulsedfor<30secondsorfor>40seconds.),迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。向离心管中加入7003不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。5000rpm离心一分钟收菌，留取1003左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。TG1：TG1来源于E.coliK-12菌株是目前生长速度最快的克隆用大肠杆菌菌株在平板上37℃,7h可见克隆。主要的噬菌体展示用菌株，同时也可用于普通质粒的构建，ladqZAM15的存在使其可以用于蓝白斑筛选等实验；但不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时推荐使用质粒提取试剂盒中去蛋白液以去除菌体内大量的核酸酶。TG1感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率＞109cfu/ugDNA。HB101：HB101菌株是E.ColiK12菌株和E.ColiB菌株的杂合产物同时也是Stbl3的原始菌株）。recA13突变可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率；但不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。hsdS20背景使HB101缺失内切酶系统，增强了外源DNA的稳定性和提取质量；此菌株具有链霉素抗性；不存在lacIqZAM15,不可用于蓝、白斑筛选。HB101感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率＞5x108cfu/ugDNA。Stbl2：Stbl2菌株来源于JM109E.colistrain,适合克隆不稳定插入片段（正向重复序列，逆转录病毒序列等）；mcrA突变和mcrBC-hsdRMS-mrrdeletion使该菌株更适于克隆甲基化的基因组序列；同时Stbl2也可用于慢病毒载体的构建。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。不存在lac!qZAM15，不可用于蓝、白斑筛选。Stbl2感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19检测转化效率可达109cfu/ugDNA。转化方法：.Stbl2感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀（避免用枪吸打）,冰中静置25分钟。42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。向离心管中加入0.9mL室温S.O.C.或LB培养基（S.O.C.营养丰富，可提高转化效率）。37℃,225rpm复苏60分钟或30℃,225rpm复苏90分钟。（当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化controlpUC19计算转化效率,则需37℃，225rpm复苏60分钟）5000rpm离心一分钟收菌，留取1003左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C.或LB培养基上。将平板倒置放于37℃或30℃培养箱过夜培养。（当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化controlpUC19计算转化效率,则需37℃培养过夜）Stbl3Stbl3菌株来源于HB101E.colistrain，是慢病毒载体系统推荐使用的菌株。基因组含有重组酶recA13突变，可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率；但不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。此菌株具有链霉素抗性，不存在lacIqZAM15，不可用于蓝、白斑筛选。Stbl3感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19检测转化效率＞108cfu/ugDNA。Stbl4Stbl4菌株来源于Stbl2E.colistrain，可用于慢病毒载体或逆转录病毒载体的构建。Stbl4菌株适合克隆不稳定插入片段（正向重复序列，逆转录病毒序列等）；mcrA突变和mcrBC-hsdRMS-mrrdeletion使该菌株更适于克隆甲基化的基因组序列。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。ladqZAM15标记使得Stbl4菌株可用于蓝、白斑筛选。此菌株具有四环素抗性。唯地生物生产的Stbl4感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率可达1x108cfu/ugDNA。使用方法：.Stbl4感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。向离心管中加入7003不含抗生素的无菌培养基（LB），混匀后37℃,200rpm复苏70分钟。当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化controlpUC19计算转化效率，则需37℃,225rpm复苏60分钟5000rpm离心1分钟收集菌体，留取1003左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上，平板倒置放于37℃培养箱过夜培养17-20小时或30℃培养箱过夜培养20-24小时。若转化controlpUC19计算转化效率，则需37℃培养过夜。5若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基中30度摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：500ml三角瓶中加入100mlTB营养液，经30度250rpm摇菌，可提取约100-200ugPUC19质粒）SURE真核生物DNA存在较多“十字型”、“Z字型”等二级或三级结构，这种DNA结构在利用传统大肠杆菌进行克隆时易被大肠杆菌体内的重组酶系统或其他防御系统识别并对其进行重组，删除等破坏，导致很难对这类DNA进行正确的克隆操作。SURE菌株可以解决这些问题：此菌株体内重组酶系统整条通路被破坏，并且（McrA-,McrCB-,McrF-,Mrr-,HsdR-）这些限制性突变的存在赋予此菌株无法对外源DNA进行标记、限制，提高了外源甲基化DNA的克隆效率，同时具有核酸酶（endA）突变、重组酶（recBrecJ）突变，增强了外源DNA的稳定性。存在于F'因子上的lacIqZAM15基因使此菌株可以进行蓝白斑筛选;Kanr,Tetr赋予菌株卡那霉素和四环素抗性。SURE感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达5x108cfu/ugDNA。DH10B：DH10B菌株来源于MC1061菌株，mcrA、mcrBC及mrr突变使DH10B菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA(Therefore,genomicDNA,bothprokaryoticandeukaryotic,canbeclonedefficientlyinDH10B)。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。^80lacZAM15marker的存在使DH10B可用于蓝白斑筛选，rpsL赋予其链霉素抗性。DH10B感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率＞108cfu/ugDNA。DH10Bac：DHIOBac菌株主要用于生产重组杆状病毒分子(Bac-to-Bac杆状病毒表达系统)。该菌株中含有父本杆粒bMON14272、辅助质粒pMON7124:父本杆粒bMON14272包含mini-F复制子，卡那抗性基因,attTn7位点和lacZa互补因子；辅助质粒pMON7124含有tnsABCD区(tnsABCDregionsuppliesthetranspositionproteinsrequiredforinsertionofthemini-Tn7fromthedonorplasmidintoitstargetsiteontheparentbacmid)，具有四环素抗性，在细胞扩增过程中丢失，但可提高供体质粒pFastBac(具有庆大霉素抗性)转化后的基因转座效率。mcrA、mcrBC及mrr突变使DHIOBac菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA(Therefore,genomicDNA,bothprokaryoticandeukaryotic,canbeclonedefficientlyi