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文档简介

紫外分光光度法测定提纯病毒的浓度一、目的由核蛋白组成的病毒有特有的紫外吸收峰，通过紫外分光光度计使用，掌握其测定原理、操作方法及病毒纯度与定量的方法。二、主要仪器、用具及药剂紫外分光光度计、石英比色皿、移液管、吸管、试管、缓冲液、镜头纸。三、实验材料TMV或CMV等病毒提纯样品悬浮液。四、实验步骤准备好提纯品及参比溶液，倒入石英比色杯。打开稳压电源及751分光光度计，将比色杯装入样品槽。按附录操作程序使用紫外光测量样品在波长260nm及280nm处的光吸收值(以A或0D值表示)记录数值。每种病毒的蛋白与核酸含量有固定比例(附表)，用本次试验吸收光谱比值(A260/A280)与标准比值比较。用A260值计算病毒的浓度及产量病毒浓度(mg/ml)=A260X稀释倍数/E0.1%1cm260nm,E为消光系数，即在波长260nm时，浓度为0・1%(1mg/ml)的悬浮液，光程为1cm时的光(光密度)吸收值。对已知病毒可以从附表中查到；对未知病毒要想定量病毒，先把病毒纯品干燥称重，配成已知浓度的病毒悬液,在260nm下测其光密度，并折算成E0.1%1cm。病毒产量(mg/kg)=浓度X提纯总ml数X1000/组织重(g)［注意：测量时所用测量杯的宽度应是1cm，若杯宽为0.5cm，则所得光密度值应乘以2］。由于光散射的影响，所测定的光密度大于病毒实际上的吸收光密度，因而存在误差。因此，准确测定常常对测定的光密度进行校正(见附录)。附表：几种植物病毒的消光系数(E值)和A260/A280值病毒种类E0.1%1cm260nmA260/A280(TMV)31119烟草花叶病毒••(CMV)50165黄瓜花叶病毒••(TYMV)96151无青黄色花叶病毒••Y(PVY)28128马铃署病毒••X(PVX)297119

马铃署病毒•(TNV)56170烟草坏死病毒•(TRV)30188烟草脆裂病毒•(TEV)

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