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QQ1019057849QQ1019057849尿素氮（BUN）试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义尿素是生物体内含氮化合物分解的终产物，在尿酶催化下分解转化成氨。血液尿素氮是肾功能的主要指标之一。测定原理样本中尿素氮在氯化高铁一磷酸溶液中与二乙酰一肟和硫胺脲共煮，生成一种红色的二嗪化合物，其颜色的深浅与尿素氮含量成正比，采用二乙酰一肟法测定尿素氮含量。自备实验用品及仪器天平、研钵、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。试剂组成和配制试剂一：液体6mL×1瓶，4℃避光保存，试剂二：液体60mL×1瓶，4℃避光保存。样品处理组织：按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL蒸馏水）加入蒸馏水，匀浆后于25℃，10000g离心10min，取上清待测。细胞：按照细胞数量（104个）：蒸馏水体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL蒸馏水），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。血清或其它液体：直接检测。测定操作空白管测定管样品（μL）20H2O（μL）20试剂一（μL）5050试剂二（μL）500500混匀，沸水浴10min，冷却后，540nm下测定吸光值。△A=A测定-A空白。空白管只要做一管。

尿素氮含量计算：a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准条件下测定回归方程为y=2.048x+0.0229，R2=0.9943；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。1、按照血清（浆）或者细胞培养液体积计算尿素氮含量(mg/mL)=(△A-0.0229)÷2.048=0.4882×(△A-0.0229)2、按照样本质量计算尿素氮含量mg/g鲜重)=(△A-0.0229)÷2.048×V样总÷W=0.4882×(△A-0.0229)÷W3、按照蛋白浓度计算尿素氮含量(mg/mgprot)=(△A-0.0229)÷2.048÷Cpr=0.4882×(△A-0.0229)÷CprV样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；b.用96孔板测定的计算公式如下标准条件下测定回归方程为y=1.024x+0.0229，R2=0.9943；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。1、按照血清（浆）或者细胞培养液体积计算尿素氮含量(mg/mL)=(△A-0.0229)÷1.024=0.9766×(△A-0.0229)2、按照样本质量计算尿素氮含量(mg/g鲜重)=(△A-0.0229)÷1.024×V样总÷W=0.9766×(△A-0.0229)÷W3、按照蛋白浓度计算尿素氮含量(mg/mgprot)=(△A-0.0229)÷2.048÷Cpr=0.9776×(△A-0.022

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