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文档简介

细胞培养前需要准备的物品提前开启37℃水浴锅和超净台的紫外灯；灭菌吸头、1.5mL的离心管、空玻璃瓶；无菌的15mL、50mL离心管；10cm培养皿、16孔板、32孔板、96孔板、培养瓶等5mL、10mL的移液管；99。9%-100％CO2钢瓶70DMEM培养基(37℃提前温浴FBS（10,000Unit/mLpenicillin10，000ug/mLStreptomycin混合液、0.05%上述培养GIBCO的产品，国产的产品没有办法保证质量）细胞培养步骤DMEM培养液DMEM液体低糖培养基)FBS二抗,70%的酒精消毒;500mLDMEM55mLFBS血清,其中加入双抗生素，一般保证抗生素的单位达到即500mL5mL10,000单位的双抗生素，如果用于保藏的细胞培养最好不加4℃冰箱中保藏待用；细胞培养使用前培养基应先放入37℃杀菌,70％酒精后放入超净台中待用；从液氮中取出冻存管，立刻放入37℃溶解;5mL培养液，轻轻吹打混匀;500rpm/min5min.中进行培养。取出在培养箱中培养的细胞(一般BMSCs代3次左右就不太好了，所以较难培养显微镜下观察细胞的生长状态,在超净台中吸去表面的培养基,加入少量的培养基清洗一下,1—2ml00537℃1—2分钟使细胞与培养皿脱离。取出培养皿,1—2,使细胞悬浮。显微镜下观察细胞悬浮程度,聚集的现象可以用手动移液器进行吹打.8-9ml的培养基(此过程加入的培养基的量与加入细胞时所带入的培养基的量有关,10cm10ml基。向含有培养基的培养皿中加入1-2ml内注意事项:1.FBS血清时要考虑血清本身的体积,FBS10%；2。FBS血清和二抗生素提前1天放入4℃的冰箱中融化，可以用50mL无菌离心管分装，以免多次融化造成血清变性。每 50mL的离心管中最多装入40-

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