γ谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)说明书_第1页
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文档简介

第第1页，共3页： 样γ 谷氨酰半胱氨酸连接酶（微量法

）L说明书注意：正式测定之前选择2 个预期差异大的样本做预测定。义：是L 合成的限速酶，

有L反馈抑制作用。

基L因表达受多种因素调节，如氧化剂、抗氧化剂、生长因子和炎症因子等。原理：

活L性高低对 含量和 比值有重要影响。在 和 2存在下，

催L化谷氨酸和半胱氨酸合成γ 谷氨酰半胱氨酸；同时 去磷酸化产生无机磷分子，通过测定无机磷增加速率，即可计算出自备仪器和用品：

活L性。冷冻离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计酶标仪、微量酸和水。试剂组成和配制：剂：液1，4存。剂：剂1，4存。用前加6水分。

6、剂：剂1，4存。用前加水15剂：液1，存。

L分。剂：剂×1，存。用前加2 水，分，加400µL酸（自备），边加边搅拌。粗酶液提取：组织：按照组织质量（）：剂积 为1：51的比例（建议称取约0组织，加1L剂）进行冰浴匀浆。8000，4离心10 ，取上清，置冰上待测。细菌、真菌：按照细胞数量（04个）：剂积（）为0：1的比例（建议万细胞加1）超声波破碎细胞（00超声秒，间隔7）；然0，4，离心0，取上清置于冰上待测。血清等液：直接测定。操作：分光光度计酶标仪预热 0，调节波长到660，水调零。15L72µL52µL剂12µL7水浴准确反应15 ；再加剂60µL，混匀，（2左右）0，离心0 ，取上清100µL，加剂100µL，混匀盖紧，45水浴10 ，冷却测定660处光收，记为空白。15L48µL52µL12µL24µL，混匀盖紧， 7水浴准确反应15 ；再加剂60µL，混匀，（25左右）8000，离心0 ，取上清，加剂，混匀盖紧，5水浴0 ，冷测定处光吸收，记为测定。注意：空白只需测定次。公式：=0.1422=0.99.11μ

L1μ m m =0.142× × ÷2

=.

1μ

L1μ m=2× ×÷= 1041μ

L1μ

4 1=0.142× ×样4

=

1μ

L1μ

=m0.142× = 10.142L6上清m L 加入中上清L×0L提取L；时间1m。.96孔板=0.012=0.9911μ

L1μ m m=01× × ÷621μ

L1μ m= 0.01×÷=.×041μ

L1μ m 4 =01× ×样= 41μ

L1μ

=m0.01× =.6×0.01mL196µL=0.196mL上清蛋质浓度m

mL

加入中上清L×02L提取1L时间1m。如果是匀浆避免复冻融。所有试剂配制完后除表明4保存外请于1天内用完。实验过请带手套试剂三中有强质要上内。4时请于后14内完。取1实验如用试剂理使得在标准曲线范围内哺乳动组织和血。6试剂三配制过中可能会黑色固其影

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