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文档简介

实验五

微生物大小的测定和显微镜直接计数

1一、实验目的

1、学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法。2、学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。2二、实验材料酵母菌悬液载玻片盖玻片目镜测微尺镜台测微尺血球计数板

计数器显微镜3实验一：酵母菌细胞的大小的测定测定的工具：目镜测微尺镜台测微尺目镜测微尺每格实际代表的长度随物镜的放大倍数而改变，也会因使用不同的显微镜而产生误差，因此在使用前必须用镜台测微尺进行校正。

4步骤1：校正目镜测微尺(1)把目测尺放入目镜中；(2)镜台测尺放在载物台上；(3)在40×镜下，看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动载物台，使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合，然后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每格长10µm，所以可得:

目尺每格长度(µm)=（台尺格数×10）/目尺格数5制作一片酵母菌的盖片，取下镜台测微尺，将盖片置于载物台上，然后在40×镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。（与计数结合进行）步骤2：酵母大小的测定6实验二、微生物数量的测定

平板计数法；目测，比浊法（分光光度计）；

显微直接计数法。7酵母菌显微直接计数

方法：活菌计数法——平板菌落计数法；总菌计数法——血球计数板或霍瑟（PeroffHausser）细菌计数板。89不要从高处往下滴！10取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖血盖片。取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。用10×镜观察并将计数室移至视野中央。在40×镜下计数：计数5个中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上25就得出计数区总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。每个记数室体积为0.1立方毫米。注意事项：计上不计下，计左不计右。出芽计一半计数步骤：11注意事项：①

从盖玻片与计数室缝隙间滴进样品液；②

加样后静置3-5min，酵母菌均匀到一个水平上；※浊度：a、每格5—10个菌体为宜；

b、两个计数室计得的值来计算样品的含菌量。计算：通常数五个中方格的总菌数（A），然后求得每个中方格的平均值，再乘上25（25个中方格），就得出大方格中的总菌数，然后再换算成1ml菌液中的总菌数，乘上稀释倍数（B），即原液中的总菌数。总菌数（个/ml）=A/5×25×10000×B。

12实验报告1、结果记录在P92的表格：各中格中菌数AB二室平均值菌数/ml12345第一室第二室13思考题根据你的实验体会，说明血球计数板计数的误差主要来自哪些方面？显微测微尺上的刻度大小和放大倍数会影响到测量

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