基因工程第三章克隆载体2课件

第二节病毒载体virusvector什么是病毒?病毒：由DNA（或RNA）和外壳蛋白组成，经包装后成为病毒颗粒。1/311噬菌体的溶原性周期和溶菌性周期天然的转基因过程2/3121.λ噬菌体克隆载体λ噬菌体（Bacteriophagelambda）头部尾部尾丝3/313宿主细胞头部尾部尾丝λDNA5/3156/316（2）λDNA有56个限制酶识别序列，50个基因，左臂，右臂和中央片段，中央片段可以被替代。Cos头部合成尾部合成删除与结合重组DNA合成晚期控制阻遏阻遏早期控制溶菌成熟左臂leftarm右臂rightarm中央片段centralstuffer7/3171.2、λ噬菌体载体的构建（1）切去λDNA的中央片段BamHIsitesLeftarmRightarmCOSCOSBamHICOSCOSLRCOSCOSLR回收9/319（2）插入标记基因（markergene）例如：lacZ基因，转化的菌斑在含有X-gal的培养基因上表现篮色.10/3110（3）插入外源基因（foreigngene）可插入20kb的目的基因。11/3111（4）建立λDNA体外包装系统（packingsystem）包装后方可侵染.13/3113重组的噬菌体体外包装14/31142、柯斯质粒载体（Cosmidvector）2.1含义：含有λ噬菌体粘性末端（cos位点）的质粒，又称粘粒2.2特点：带有cos

位点4-6kb有标记基因常用于构建cDNA文库（cDNAlibrary）可携带大的基因片段，45kb。2.3构建过程15/3115第三节、染色体定位整合载体基因整合平台系统：包括整合平台和定位整合克隆载体。整合平台：受体细胞基因组上给定的一个DNA区域，是外源DNA定位整合的位置。定位整合克隆载体：质粒克隆载体，有一个或两个与整合平台DNA区域同源的DNA片段。17/3117一、定位整合模式ForeignDNAHomologoussequenceVectorDNAGenomeDNAofreceptorcellGenomeDNAofreceptorcellHomologoussequenceVectorDNA18/3118与受体细胞和同源序列长短有关，一般较低(10-7-10-3).会出现随机插入，筛选困难。二、定位整合效率19/3119是Yeast和E.coli.的穿梭载体(shuttlevector)YAC在E.coli.中按质粒形式复制，转入酵母菌后按染色体形式复制。穿梭载体:含有不止一个复制起始位点、能携带插入序列在不同种类宿主细胞中繁殖的载体21/3121着丝粒端粒自主复制序列22/31端粒E.coli.originofreplicationmarkergenesinyeastmarkergenesInE.coli.markergenesinyeast22外源基因EcoRI23/31YAC克隆载体的构建23一、启动子探针型载体质粒载体，含有一个检测部件（一个无转录功能的标记基因和克隆位点）第五节、特殊用途的载体25/3125ThegenewhichcannotexpressGFPgeneMultiplecloningsitesAMPr26/3126四、分泌型表达载体基因表达的蛋白可分泌到胞外，利于产物分离纯化。29/3129本章主要内容小结：常用质粒载体、Ti质粒载体。病毒载体染色体定位整合载体酵母人工染色体载体特殊用途的克隆载体上述载体的结构特点及构建方法及原理。课后到“生物工程学院网站主页”中精品课程中的基因工程原理网络课程中复习