微生物实验3课件

医学微生物学实验

综合性实验一脓汁和粪便标本中病原菌的检测（三）空气、手指皮肤细菌学检查结果分析菌落特征观察P11细菌纯培养P10（纯培养不得超过18小时）脓汁和粪便标本检验（录像）肠道致病菌的分离与鉴定（录像）油镜使用方法（讲解）空气的细菌学检查组号时间地点菌落形成单位(CFU)1152153154155156157158159151015CFU/m3＝50,000N÷AT≈86N(直径7cm平板）N：平板上的菌落数A：平板面积(38.5cm2)T：采样时间(15分钟)CFU：colonyformingunit医院各类房间空气中细菌总数要求细菌数分级细菌总数/M3病房类型最低细菌数＜10器官移植、心血管手术室、制剂室。低细菌数＜200无菌室或其他手术室、婴儿室、产房、术后恢复室、供应室。一般细菌数200～500普通病房、治疗室、放射科、按摩室。★注1：以上为世界卫生组织建议标准。★注2：我国卫生部要求，手术室、产房及婴儿室空气中细菌总数不得超过500个/M3。132

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4手指皮肤的细菌学检查第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。

2人1块平板甲、丙→常规洗手乙、丁→标准洗手甲（丙）乙（丁）丙丁手指皮肤细菌学检查结果分析第1格为洗手前：+第2格为洗手后常规(甲、丙)洗手方法：?标准(乙、丁)洗手方法：?第3格为消毒后：±第4格空白对照：-细菌在固体培养基中的生长现象菌落定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性.菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。细菌的纯培养挑选单菌落:脓汁标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落，菌落的色素是脂溶性的，是细菌本身的颜色。菌落直径2mm左右、圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明。粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落，菌落颜色是水溶性的，不是细菌本身的颜色，颜色的产生是因为大肠埃希菌分解乳糖产酸，酸使伊红与美蓝结合，形成紫黑色具有金属光泽、大而隆起、不透明的菌落；菌落直径2～3mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈伊红的颜色，很淡的粉红色，半透明，直径1～2mm。选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落，进行接种。斜面接种法P10甲→黄色,乙→白色,丙→紫黑,丁→粉红。标记：组号，颜色安全警告接种环接种斜面一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。气溶胶粒径＞100um沉降很快,＜50um在0.4s内扩散开,＜5um通过呼吸道直接到达肺泡。Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。实验时应坐着，在酒精灯半径20厘米范围内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。奥林巴斯CX21型生物显微镜（实验柜内，每人一台）注意：只能横放，不得竖放。使用须知显微镜是精密光学仪器，请不要让其受到撞击，请小心操作。在搬运显微镜时，请按右图所示，以双手抓住镜臂孔的两侧，小心搬运。★如果拿住载物台①和镜筒②等部位搬运的话，有可能会造成损坏。显微镜各部件名称载物台位置刻度载物台上的刻度方便确定标本位置，标本移动后可以快速回到原位。水平刻度的标识位置以机械载物台的①位置来读取。垂直刻度的标识线以②的位置来读取。聚焦从显微镜的侧面观察，按箭头方向转动粗调旋钮①，使物镜③尽可能接近标本。一边看目镜，一边慢慢逆箭头方向转动粗调旋钮①，使载物台下降。看到标本以后，用微调旋钮②来正确对焦。★10倍物镜的工作距离（WD，从物镜到标本的距离）为10.5mm。★油镜的WD为0.13mm。调整瞳距调整瞳距是调整双目间的距离，使两眼同时看到一个显微镜像，能防止观察时的疲劳。方法：一边看目镜，一边移动双目镜筒，让左右的视野一致。标识●的位置表示瞳距。请记住自己的瞳距值，以便下次观察时调整。调整屈光度数调整观察者左右视力。以右眼看右侧的目镜，旋转粗微调旋转盘，对好焦距。以左眼看左侧的目镜，旋转屈光度调整环①，对好焦距。调整聚光镜位置和孔径光阑用聚光镜上下移动旋钮①，将聚光镜转到最上面。在孔径光阑环②上刻有物镜倍率（10倍，100倍等），观察时将与使用物镜相对应的倍率放到正面。转换物镜旋转物镜转盘①，将希望使用的物镜（10倍、100倍）转到标本的上方。100倍浸油物镜使用方法油镜放入光路之前，一定要在标本的观察部位上加一滴浸油。旋转物镜转盘，使油镜进入光路，用微调旋钮对好焦距。如果浸油内有气泡，会影响观察，可稍微旋转物镜转盘，使油镜来回通过1～2次浸油，排除油内气泡。显微镜油镜的使用P1310×物镜→标本位置→滴加香柏油→100×油镜→浸泡油中,几乎与标本接触（工作距离0.13mm）→细调节调焦，观察物像→记录结果→关闭电源。油镜处理：擦镜纸拭去香柏油→擦镜纸沾少许乙醇和乙醚（7:3）混合液擦拭→擦镜纸擦拭油镜。显微镜罩上防尘罩→横放在实验柜内。★实验台两侧的电源插座，只能插入一个插头，请使用离你最近的电源插座。细菌的显微镜检查法显微镜：光学显微镜目镜：10倍物镜：油镜头（90或100倍）放大倍数：10×90或100＝900或1000镜油：香柏油或石蜡油香柏油折射率（n＝1.515），玻片折射率（n＝1.52），石蜡油（n＝1.46），空气（n＝1.00）。★油镜使用完毕必须擦拭油镜头。油透镜光线载玻片思考题在微生物学实验中,怎样才能避免杂菌的污染?空气的卫生标准规定如何?你的实验结果说明了什么问题?怎样从医务人员手指上分离和鉴定金黄色葡萄球菌?菌落特征主要描述哪几方面问题？任何挑选单菌落？医学微生物学实验

综合性实验一脓汁和粪便标本中病原菌的检测（三）空气、手指皮肤细菌学检查结果分析菌落特征观察P11细菌纯培养P10（纯培养不得超过18小时）