霉菌的诱变育种

霉菌的诱变育种摘要：霉菌在紫外线的照射下，其DNA的转录和复制会受到严重的影响，从而引起突变或死亡。通过对诱变菌株的分离和筛选，能选出纯化了的突变株。关键词：霉菌，紫外线，诱变育种。一、实验目的1、了解微生物诱变育种的原理和方法2、掌握紫外线诱变的原理和操作过程二、实验原理紫外线的主要作用是使同链DNA的相邻胸腺嘧啶间形成共价结合的胸腺嘧啶二聚体，它的出现会减弱双链间氢键的作用，并引起双链结构扭曲变形，阻碍碱基间的正常配对，从而引起突变或死亡。在互补双链间形成嘧啶二聚体的机会较少，但一旦形成，就会妨碍双链的解开，因而影响DNA的复制和转录，并使细胞死亡。一、实验药品与仪器1、药品TOC\o"1-5"\h\z察氏培养基：葡萄糖30gNaNO32gK2HPO4-3H2O1gKCl0.5gMgSO4-7H2O0.5gFeSO4-7H2O0.01g琼脂15〜20g,蒸馏水1000ml,PH偏酸。氨苄青霉素2、仪器30培养皿，吸管，试管，漏斗，三角瓶，玻璃珠，离心管，紫外诱变箱，电磁搅拌器，离心机。二、实验步骤1、将培养皿、三角瓶、试管、移液管等仪器清洗干净，烘干后放入高压灭菌锅内灭菌。2、根据察氏培养基的配方配好培养基，与上述一起放入高压锅内灭菌。3、按照1：1000的比例将氨苄青霉素与察氏培养基充分混匀，然后倒入灭完菌的平皿内，尽量使每个平板的培养基一样，使培养基厚度一致。4、取已培养好的新鲜斜面菌种，用无菌生理盐水洗下，接于盛于有玻璃珠的100毫升三角瓶中，充分摇动10分钟，使菌体均匀分散，用滤纸过滤，即为菌悬液。5、取上述菌悬浮液计数，调整菌悬浮液密度为106/毫升。吸取1毫升菌悬浮液于9毫升无菌水中，稀释后再计数一次，，要求达到每平皿菌落数在300个。（应该是菌的数量吧，菌落是针对平板而言的。）6、在黑暗条件下进行紫外线照射处理。留下一个平板（皿）不进行紫外照射作为对照。7、照射处理前，先开紫外线灯20分钟，使灯的功率稳定（如灯的功率为15瓦，则照射距离为15-30厘米，灯的功率为30瓦，则照射距离为30-50厘米）。8、将待处理的菌悬液放于培养皿中，置于电磁搅拌器上，放在紫外线灯中下方，先将整个平皿照射1分钟后，打开皿盖，此时开始记时并启动电磁搅拌器，准确计算照射时间。9、上述菌液在经紫外线照射后，暴露在日光中一定时间，接着用剂量更大的紫外线继续照射，然后再让其光复活，经多次紫外线照射和光照复活交替，增加其变异率。10、稀释涂平板，经过一定时间照射处理后取样作适当的稀释后，每皿加0.1毫升，涂布后用报纸包好，外面再裹一层黑色塑料袋，置于30C（28C）恒温培养2〜3天，计数菌落。11、将照射后存活的斜面菌种（平板菌落）与未经照射的菌种（落）对照，计算经紫外线诱变后霉菌的致死率及突变率。12、作所需的各项性能测定，挑取疑似突变株的菌落进行纯种培养。即将突变菌落接于平板培养基上，置于30C（28C）恒温箱中培养2〜3天。13、观察突变菌落的生长情况，作所需的各项性能测定，确定突变菌的菌落，将该菌落接于斜面培养基上培养保种。14、观察斜面菌落的生长情况。四、实验结果记录记录各培养皿中菌落的致死率和突变率。突变后的一些实验数据的记录。实验安排第一天：配培养基，灭菌，制菌悬液。第三天：诱变，初筛。第六天：划平板进行纯种培养第九天：划斜面，保种。个人觉得对照组不能只做一个，因为一个有偶然性。说不定有的菌液没混合均匀之类的。最好是做三个吧。各项性能测定，主要是指哪些方面的呢？最好是要写出来。是各个方面的吗？比如说产脂肪酶，产淀粉酶，产蛋白酶等。我