大白鼠骨髓细胞染色体的制备方法课件_第1页
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文档简介

大白鼠骨髓细胞染色体的制备实验目的1、初步掌握大鼠骨髓细胞染色体标本制备方法，了解操作步骤原理2、了解常用实验动物染色体的数目及特点实验原理1、骨髓细胞的有丝分裂指数相当高，可以从活体动物细胞骨髓中直接得到大量处于分裂中期的细胞2、秋水仙素可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，此时染色体达到最大收缩，具有典型形态3、此法不需体外培养和无菌操作，易于推广3、Giemsa原液（pH6.8）：1gGiemsa染粉+33mL甘油+45mL甲醇4、2%柠檬酸钠溶液：2g+100ml水5、0.4%KCL：0.4g+100ml水6、Carnoy固定液（100ml）：3份95%酒精和1份冰醋酸7、0.067mol/L磷酸缓冲液（pH6.8，500ml）：11.94gNa2HPO4.12H2O+4.536gKH2PO4+500ml水8、1:10Giemsa磷酸缓冲液染液（pH6.8）实验方法1、秋水仙素处理：实验前3-4h，按动物每克（160g）体重4μg/g的剂量，腹腔注射秋水仙素2、取股骨：颈椎脱臼法处死大白鼠，剪开后腿上的皮毛，取出股骨和胫骨，剔除上面的肌肉，洗净3、收集骨髓细胞：剪去两端，将1ml2%的柠檬酸钠溶液注入骨髓腔，将骨髓细胞先冲入小碟内，反复吸打骨髓细胞，使细胞团块分散，转入15ml离心管4、低渗处理：视骨髓量的多少加入0.4%KCL溶液8—10ml，然后将离心管置37℃水浴中低渗10min5、固定：以1000r/min离心8min，弃上清液，沿离心管壁缓缓加入新配的固定液，注意不要冲动细胞团块。加完后用吸管将细胞轻轻吸打均匀，静置固定20min，反复2—3次，每次20min6、制细胞悬液：固定的细胞经离心后，吸去上层固定液，视管底的细胞多少加少量新配制的固定液，将细胞团块轻轻吸打成悬液7、滴片：在事先在冰水中预冷的载玻片，从高处向载玻片上滴1~2滴上层细胞悬液（使细胞分散良好，以便观察），酒精灯上文火烘干8、染色：将玻片平放，细胞面朝上，每片滴加1:10Giemsa磷酸缓冲液染液3~4mL，染色10min9、在自来水下细流冲洗数秒，去掉Giemsa磷酸缓冲液染液，擦干玻片底面和四周，镜检（染色体为紫红色）。实验结果作业1、记录所观察大白鼠骨髓细胞染色体的数目和形态。2、绘制染色体图思考题1、你制备的大白鼠染色标本，分裂相是否多，染色体分散程度如何？有

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