实验一细胞形态课件

坎坎坷坷细胞生物学实验

实验一细胞形态、细胞器的显微结构的观察一、实验目的1.了解普通光学显微镜的工作原理，掌握光学显微镜的使用方法。2.熟悉光学显微镜下细胞的基本形态与结构。经物镜形成倒立实像，经目镜进一步放大成像。显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数，还与显微镜的分辨力有关。制作光学镜头所用的玻璃折射率为1.65~1.78，所用介质的折射率越接近玻璃的越好。对于干燥物镜来说，介质为空气，镜口率一般为0.05~0.95；油镜头用香柏油为介质，镜口率可接近1.5。普通光线的波长为400~700nm，因此显微镜分辨力数值不会小于0.2μm，人眼的分辨力是0.2mm，所以一般显微镜设计的最大放大倍数通常为1000X。显微镜的分辨率:也称为分辨力，它是指能把两个物点辨清的最小距离，分辨距离越大，则分辨率越低。所以，分辨率是以分辨距离来表示的。其计算公式为:D=0.61λ/N·AN·A·=n·sina/2

式中D为分辨率，A为光波波长，n=介质折射率；α=镜口角（标本对物镜镜口的张角），

N·A·为物镜的数值孔径(镜口率)。镜口角总是要小于180˚，所以sina/2的最大值必然小于1。

厚标本和薄标本4-5um2um基础知识基础知识三、显微镜概述

显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光（紫外线显微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。1.光学显微镜普通生物显微镜由3部分构成：①照明系统：包括光源和聚光器。②光学放大系统：由物镜和目镜组成，是显微镜的主体。③机械装置：用于固定材料和观察方便，包括镜台(载物台)、调节器和、物镜转换器(旋转器)等。尼康E-600显微镜

数码互动显微镜3.荧光显微镜

尼康E800荧光DIC显微镜

荧光显微镜照片（微管呈绿色、微丝红色、核蓝色）

荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别：1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上。2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜。3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人目。4.激光共聚焦扫描显微镜（具有高分辨率可进行显微断层扫描）

LCSM照片蓝色为细胞核，绿色为微管

7.偏光显微镜（对于双折射物质进行结构研究）

偏光显微镜（polarizingmicroscope）用于检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。8.微分干涉差显微镜（图像具有浮雕感）

DIC显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微镜相比，其标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。

DIC显微镜下的硅藻（伪彩色）

9.倒置显微镜（组织培养中长工作距离的）组成和普通显微镜一样，只不过物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在载物台之上（右图），用于观察培养的活细胞，具有相差物镜。10.显微操作技术

尼康NT-88NE显微操作/注射仪

五、

实验步骤

(一)显微镜的使用1.观察前的准备工作

(1)观察者要养成显微镜镜检的工作习惯，观察时要双眼同时睁开，一边观察一边进行记录或描绘。

(2)观察时所用的材料、药品和各种器具要预先准备好。

(3)显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否完整和正常，并对载物台、目镜、物镜以及聚光器上端透镜进行必要的清洁工作。然后进行合轴调节。

学生操作规程及注意事项一、观察前准备检查：底座右侧的光源亮度旋钮是否在“1”位置，即顺时针选到最底位。开机：1.打开后座主电源开关——绿色按钮

2.打开后座CCD电源开关——红色按钮白平衡调整：不放切片，在10倍物镜下将电源调整到最亮，然后按底座右方的白平衡按钮（红色）3－5秒之后将光源亮度调回到适中状态。二、观察操作放上切片，将光源调到自己习惯的亮度。视度补偿：调节目镜双筒找到自己的瞳距，此时两眼镜下的图象重合在一起，横拉板上的数字（例如：64）就是自己的瞳距，然后将两只目镜外侧的刻度线调到瞳距的数字的位置。调焦：将绿色光标移至视野中央，开始观察，如需提问，按呼叫按钮。瞳距调节2.显微镜的调节屈光度调节调节孔径光栏调节N.A聚=(0.6-0.8)N.A物孔径光栏开度与图象100%70%30%六、注意事项1.低、高倍镜的使用。七