糖链结构测定及糖的提取分离课件

分子量及分子式的测定

质谱分析测定分子量和分子式。苷类化合物一般极性较大，无挥发性，遇热气化时易于分解，采用电子轰击质谱(EI—MS)常常不能获得分子离子峰。

现多采用化学电离质谱(CI-MS)、场解吸质谱(FD-MS)、快原子轰击质谱(FAB-MS)和电喷雾质谱(ESI-MS)等方法来获得分子离子蜂，尤其是ESI-MS及FAB-MS两种质谱法更是目前测定苷类分子量常用的方法。七、糖链结构的测定

组成苷的苷元和单糖的鉴定将苷用稀酸或酶进行水解，使生成苷元和各种单糖

苷元的结构鉴定在有关章节中逐一介绍。

组成苷中糖的种类鉴定通常采用PC、TLC等方法对水解液进行鉴定。

糖类的PC常用的展开剂大多为含水的溶剂系统，如正丁醇-醋酸-水(4:1:5)，EtOAc-吡啶-水(2:1:2)等，其Rf值与溶剂的含水量有关。七、糖链结构的测定苷中糖的数目的测定质谱：苷分子量-苷元分子量，求出糖的数目。核磁：氢谱中端基质子信号数(5ppm左右)，碳谱中端基碳信号的数目(90-112ppm)。七、结构的测定糖与糖的连接位置的确定全甲基化物进行甲醇解，分析其甲醇解产物。七、糖链结构的测定采用的方法通常是将这些甲醚化的单糖进行了TLC鉴定，并与标准品对照。近来亦有用GC-MS联用仪对其进行鉴定的报道。全甲基化甲醇解：七、糖链结构的测定

七、糖链结构的测定

如：已知某二糖甲醇解后得到下列产物，请推测该二糖的结构（连接位置）全甲基化甲醇解

甲基化反应

(1)Haworth法：用硫酸二甲酯和氢氧化钠(或碳酸钠、碳酸钾)，可使醇羟基甲基化。其缺点是甲基化能力较弱，如果欲进行全甲基化反应，必须进行多次反应才能达到目的，

(2)Purdie法：用碘甲烷和氧化银为试剂(一般可在丙酮或四氢呋喃中进行)，可使醇羟基甲基化，但因氧化银具有氧化作用，只能用于苷的甲基化．而不能用于还原糖的甲基化。

七、糖链结构的测定

此法反应迅速、完全、无需特殊装置、可在室温下连续反应，是目前最常用的全甲基化方法。但因在反应中，所用二甲亚砜和NaH均呈强碱性，故分子中有酯键的苷类不宜用本法。七、糖链结构的测定酶水解转化糖酶--------水解β-果糖苷键麦芽糖酶--------水解α-葡萄糖苷键杏仁苷酶--------水解β-葡萄糖苷键,专属性较低纤维素酶--------水解β-葡萄糖苷键NMR谱法测定利用端基质子的偶合常数如：5ppm(1H,d,J=7Hz)为下面哪个结构？七、糖链结构的测定-苷键构型的确定八、糖及苷类的提取和分离化合物的极性功能基的种类：(-COOH)>(-OH)>(–C=O)>(-COOR)>-O->(-CnHm)极性功能个数分子内氢键降低极性化合物大小

小分子的极性大于大分子的极性常用溶剂极性：水>甲醇>乙醇>丙酮>乙酸乙酯>氯仿>乙醚>己烷H2O>MeOH>EtOH>CH3COCH3>EtOAc>CHCl3>EtOEt>CH3(CH2)4CH3流程图八、苷类的提取和分离糖和苷的提取分离药材水水提液3倍量以上乙醇醇水溶液沉淀（苷）（多糖）(四)离子交换纤维素(DEAE-纤维素)进行初步分离一般选用DE-52型离子交换纤维素（二乙氨基乙基纤维素52）

<1>柱的预处理

加蒸馏水浸泡过夜，期间换几次水，每次除去细小颗粒，用0.5mol/LHCl溶液浸泡1~2h,蒸馏水漂洗至中性；再用0.5mol/LNaOH溶液浸泡1~2h,蒸馏水漂洗至中性。

<2>洗脱

样品浓度在20mg/ml左右。先用水洗脱，再用NaCl梯度洗脱，小试时的梯度应密集一些，0.05,0.1,0.3,0.5mol/L洗脱，每瓶8ml,10min左右一瓶即可。根据紫外检测的结果，再进行梯度的修改。

<3>合并流分

硫酸-蒽酮法结合紫外检测

（1）硫酸-蒽酮试剂的配制

称取0.

1g蒽酮至容量瓶中，加少量浓硫酸，搅拌使其溶解，加浓硫酸至50ml摇匀，得0.2%的硫酸-蒽酮试剂，尽量现配先用。

（2）方法

馏分隔管检测，每管取0.5ml，在冰浴中加入2ml硫酸-蒽酮试剂，然后在沸水中煮10~15min,自来水冷却，放至室温。

（3）紫外检测

主要看610nm出吸收值，合并馏分。

（五）