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文档简介

实验七

酵母菌的形态观察及

血细胞计数板计数一、目的要求1.观察酵母菌的形态特征及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。2.掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。3.明确血细胞计数板计数的原理，并掌握用其进行微生物计数的方法。二、基本原理-形态观察

酵母菌是单细胞真菌，圆形、卵圆形或圆柱形，细胞大小约为1~5μmＸ5~30μm，多数以出芽方式进行无性繁殖，有性繁殖是通过子囊孢子的方式进行。美蓝染液的氧化型为蓝色，还原型为无色。由于酵母细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色。如何鉴定死活细胞二、基本原理-计数用血细胞计数板计数是一种常用的微生物计数方法。该计数板是一块特制的载玻片，由四条槽构成三个平台，中间较宽的平台被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格框共分为九个大方格，中间的大方格即为计数室。计数室的刻度有两种规格：25x16；16x25。计数室的容积为0.1mm3（万分之一毫升）

。计数时，先数五个中方格的总菌数，求得每个中方格的平均值，再乘以25或16，得出大方格的总菌数，再换算成1ml菌液中的总菌数。三、器材1.菌种酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae)平板菌落及菌悬液

2.溶液或试剂

吕氏碱性美蓝染液3.仪器及用具

显微镜血细胞计数板无菌毛细滴管载玻片盖玻片双层瓶擦镜纸四、操作步骤（一）酵母菌形态观察1.在载玻片中央滴一滴0.1%吕氏碱性美蓝染液，然后按无菌操作挑取少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。2.用镊子取一盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。3.将制片放置约3min后镜检，先用10X，再用40X观察酵

母的出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。4.染色约0.5h后再次进行观察，注意死细胞数量是否增加。Attention：

a.光线的强弱适当；

b.一般样品稀释度要求每小格内约有5~10个菌体；

c.每个计数室选5个中格中的菌体进行计数，位于格线上的菌体一般只数上方和右边线的；

d.芽体大小达到母细胞的一半时，即作为两个菌体计数；

e.从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量。5.清洗使用完毕后，将计数板在水龙头上用水冲

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