药物的杂质专业知识讲座

有效性

针对一些药效进行检验项目利福平结晶度，影响生物利用度均一性

含量均一性如“含量均匀度”试验安全性

异常毒性、热原、降压物质和无菌等纯度要求

对杂质限量进行检验

药物的杂质专业知识讲座第1页§1药品杂质及其起源杂质（impurity):药品中存在无治疗作用影响药品稳定性和疗效，对人体健康有害物质;药物的杂质专业知识讲座第2页一.药品纯度药品纯净程度；外观性状、理化常数、杂质检测和含量测定等综合评定控制药品纯度主要方面—杂质检验（纯度检验）药物的杂质专业知识讲座第3页二.杂质起源与分类1.杂质起源主要起源生产过程中引入贮藏过程中引入药物的杂质专业知识讲座第4页（1）生产过程中引入原料药不纯原料反应不完全反应中间体或副产物在精制时未除净生产中所用溶剂、试剂残留与生产器皿接触可能带入杂质化学原料精制不完全植物原料中结构类似物分离不完全由动物脏器提取生物药品中一些组织分离不完全药物的杂质专业知识讲座第5页如：甾体激素类药品由甾体母核或结构类似其它甾体激素经结构改造制备可能带入原料、中间体、异构体、降解产物及残留溶剂

如：肾上腺素合成经过中间体肾上腺酮，精制时酮不能除尽。药物的杂质专业知识讲座第6页（2）贮存过程中引入

贮存时间过长包装及保管不妥

如：青霉素遇碱易水解为青霉噻唑酸，受热深入分解为青霉胺和青霉醛使青霉素失效。药物的杂质专业知识讲座第7页2.杂质分类（1）按杂质理化性质分为

无机杂质：Cl－、、S2－、CN－、重金属等有机杂质：有机药品中引入原料、中间体、副产物、分解物、异构体、残留溶剂等；

化学结构与活性成份类似—相关物质（relatedsubstance）残留溶剂（residualsolvents）：生产过程中使用有机或无机液体；含有已知毒性药物的杂质专业知识讲座第8页（2）按起源分为普通杂质：各种药品生产或贮存过程中易引入杂质。如：酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、重金属、砷盐、硫化物、氰化物、铁盐、铵盐、易炭化物、干燥失重、炽灼残渣、溶液颜色与澄清度、有机溶剂残留量等。特殊杂质：该药品生产或贮存过程中，据药品性质、生产方法和工艺条件，有可能引入杂质；随药品不一样而改变如：胰岛素中含氮量、多糖类物质中单糖等。药物的杂质专业知识讲座第9页

⑶按杂质毒性分为毒性杂质：如重金属、砷盐信号杂质：普通无毒，含量多少反应药品纯度药物的杂质专业知识讲座第10页三.药品杂质限量药品杂质含量越少越好。药品中杂质完全除去，造成生产上操作困难，降低收率，增加成本。药品效用、调制和贮藏考虑没必要。不对人体有害标准下，允许药品中存在一定量杂质，其最高量—“杂质限量”。药物的杂质专业知识讲座第11页1.杂质检验方法限量检验（limittest）：检验杂质是否超出限量杂质定量测定药物的杂质专业知识讲座第12页对照法：两支纳氏比色管平行试验样品管：一定量供试品对照管：程度量待检杂质对照品比较两管药物的杂质专业知识讲座第13页2.杂质限量药品中所含杂质最大允许量，即：

L：杂质限量；S：供试品量；C,V：标准溶液浓度,体积；

药物的杂质专业知识讲座第14页§2药品中杂质检验方法药品与杂质物理性质差异：挥发性、颜色、溶解性、光学、色谱行为杂质检验原理药品与杂质化学性质差异：酸碱性、氧化-还原性、杂质专属反应（颜色，沉淀或气体）药物的杂质专业知识讲座第15页一.化学法利用药品和杂质在化学性质上差异来进行。如阿司匹林中游离水杨酸检验1.检验原理阿司匹林+Fe3+—→×（无酚羟基）水杨酸+Fe3+—→紫堇色（有酚羟基）药物的杂质专业知识讲座第16页

30内比色，预防操作时间过长造成阿司匹林水解；对照液中加1mL冰醋酸:与样品液条件一致。

3.杂质限量2.操作方法药物的杂质专业知识讲座第17页二.色谱法（TLC）

较灵敏、简便、快速，不需特殊设备，各国药典用于杂质限量检验1.杂质对照品法：已知杂质并能制备杂质对照品供试品溶液;一定浓度杂质对照品溶液;分别点样于同一硅胶薄层板上，展开、定位、检验；供试品中含杂质斑点≯对应杂质对照斑点；须杂质对照品，应用上受限制。药物的杂质专业知识讲座第18页2.供试品本身对照法:杂质结构不确定或无杂质对照品供试品溶液按限量要求稀释至一定浓度作为对照溶液；供试品溶液和对照品溶液分别点样于同一硅胶薄层板上，展开、定位、检验；供试品溶液所显杂质斑点≯对照溶液所显主斑点颜色；简便易行，不需制备对照品；可配制几个限量对照品溶液，使用率很高。药物的杂质专业知识讲座第19页如：吡罗昔康中相关物质检验供试液：20mg/mL对照液：0.2mg/mL(供试液稀释100倍)供试液与对照液点于同一薄层板;判断:供试品溶液杂质斑点颜色≯对照液主斑点颜色药物的杂质专业知识讲座第20页3.对照药品法：与供试品相同药品作对照品。供试品与其相同药品对照品分别点样于同一薄层板上，展开显色，供试品杂质斑点≯对照药品中杂质斑点数，颜色不得更深。对照品与供试品相同，克服2法中对照品与杂质斑点有时不可比性。药物的杂质专业知识讲座第21页HPLC检验相关物质20世纪90年代末期，多数化学药品用HPLC替换TLC进行相关物质检验UVorDAD,LC-MS,LC-NMR药物的杂质专业知识讲座第22页相关物质检验用HPLC方法建立了解原料药品合成路线或制剂工艺仿制药：在各国药典中检索，以药典方法为模板药典收载该药品或制剂HPLC含量测定方法，据原料药合成路线或制剂工艺，对该含量方法改进药典或药品标准不收载该药品，文件中选一个较通用方法新药或仿制药，文件中无HPLC法检验相关物质，据药品结构选取与该药品结构类似药品分析方法为模板对选定色谱条件进行系统适用性试验药物的杂质专业知识讲座第23页相关物质检验用HPLC方法系统适用性试验指标：理论塔板数、分离度、拖尾因子和重现性国内药品标准中多以理论塔板数为评价标准原料药：据药品合成工艺对主成份与起始原料、各中间体、副产物间分离度进行考查制剂：各辅料是否干扰对杂质检出，如有干扰，用其它无干扰辅料替换或对色谱系统调整（流动相中水相和有机相百分比，流动相pH)药物的杂质专业知识讲座第24页供试品溶液稳定性将样品在溶液中降解产物错判为样品中相关物质样品在溶液中稳定性影响相关物质检验优化流动相条件，选择稳定分离系统较低柱温：溶液稳定性与温度成正比样品在反向色谱系统中不稳定，采取正相色谱系统分离；优化流动相下，采取较短色谱柱、较高流速以降低分析时间临用现制多份样品溶液，每份样品进样一次药物的杂质专业知识讲座第25页氧氟沙星中相关物质检验检验氧氟沙星在生产和贮藏过程中可能引入副产物及结构不清相关物质Ch.P采取HPLC法供试品溶液：1.2mg/mL；对照溶液：2.4μg/mL。C18；NH4Ac,NaClO4(pH2.2)－乙腈(85:15)；294nm；10μL单个杂质峰面积≯对照溶液主峰面积(0.2％)；各杂质峰面积和≯2.5倍对照溶液主峰面积(0.5％)药物的杂质专业知识讲座第26页药物的杂质专业知识讲座第27页

三.光学法1.UV药品和杂质对光选择吸收差异；地蒽酚中二羟基蒽醌检验二羟基蒽醌：λmax432nm；地蒽酚：该波长下无吸收。药物的杂质专业知识讲座第28页二羟基蒽醌

要求：A432≯0.12；杂质限量≤2.0%。药物的杂质专业知识讲座第29页2.IR药品中无效或低效晶形检验晶形结构不一样，键长、键角发生不一样程度改变一些特征峰频率、峰形和强度差异。药物的杂质专业知识讲座第30页四．药品中杂质检验示例（无机杂质和残留溶剂）（一）氯化物检验法

1.原理

（白色浑浊）

与一定量标准NaCl溶液同条件下产生AgCl比较浑浊程度;标准氯化钠溶液浓度：10gCl/mL药物的杂质专业知识讲座第31页2.操作方法样品管对照管

药物的杂质专业知识讲座第32页3.注意事项及讨论(1)平行试验(2)反应最正确条件①硝酸酸性②氯化物检测范围:50mL供试液中含Cl0.05～

0.08mg（相当标准NaCl溶液5.0～8.0mL）(3)观察比较

①衬于黑色背景自上而下观察；②暗处放置。药物的杂质专业知识讲座第33页二.重金属检验法1.重金属概念试验条件下,与硫代乙酰胺或硫化钠作用呈色金属。如：Ag、Pb、Hg、Cu、Cd、Bi、Sb、Sn、As、Ni、Co、Zn试验条件：溶液pH。硫代乙酰胺为显色剂：溶于水、稀酸、乙醇药品，pH3.0～3.5；硫化钠为显色剂：溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中产生沉淀药品；检验重金属时以Pb为代表。药物的杂质专业知识讲座第34页2.检验原理Ch.P要求四种重金属检验方法。第一个适用溶于水、稀酸、乙醇药品，最惯用方法。原理：

（黄色到棕黑色）与一定量标准铅溶液同法处理所呈颜色比较药物的杂质专业知识讲座第35页3.操作方法样品管对照管药物的杂质专业知识讲座第36页4.讨论（1）标准铅溶液：Pb(NO3)2配制贮备液；加硝酸防铅盐水解；临用前稀释成10μgPb/mL。（2）硫代乙酰胺试液试验条件下硫代乙酰胺水解产生H2S（3）溶液pHpH3.0～3.5，呈色较完全；（4）观察比较：白色背景由上向下观察。

药物的杂质专业知识讲座第37页

三.砷盐检验法（古蔡氏法）1.原理金属锌与酸作用产生新生态氢，与药品中微量砷盐反应生成挥发性砷化氢，遇溴化汞试纸产生黄色至棕色砷斑，与同条件下一定量标准砷溶液所生成砷斑比较。反应式以下：药物的杂质专业知识讲座第38页2.操作：砷盐检验在检砷瓶中进行。

HgBr2试纸PbAc2棉花样品(or标准砷溶液),KITS、酸性SnCl2TS、HCl、Zn粒样品对照药物的杂质专业知识讲座第39页3.讨论(1)标准砷溶液As2O3配制贮备液，临用前稀释成1μgAs/mL(2)试剂作用