细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座

细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第1页

第七章细菌与病毒微生物学检验法微生物学教研室Jiz-Zhaoj12zhao@细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第2页教学纲领掌握内容标本采集和送检标准病原菌检验程序细菌感染血清学诊疗及惯用方法了解内容病原体抗原成份、核酸及其它成份检测方法细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第3页病原学检验目标进行病因学诊疗指导合理用药观察治疗进行传染病流行病学调查细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第4页标本采集和送检六标准※无菌操作：防止杂菌污染不一样期不一样标本用抗生素以前采集病变显著部位运输注意保留采集双份血清细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第5页第一节细菌感染微生物学检验法细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第6页可疑细菌感染采集标本血清学试验双份血清直接形态学检验细菌成份检测特异性抗体检测细菌分离培养判定形态学检验生化学检验血清学判定药品敏感试验动物（毒力）试验抗原检测核酸检测直接凝集试验协同凝集试验乳胶凝集试验免疫荧光检测ELISA等核酸杂交聚合酶链反应（PCR）DNA芯片凝集反应沉淀反应补体结合试验中和试验ELISA等细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第7页细菌学诊疗

检测病原菌成份检测患者血清中特异性抗体细菌病原学检验法形态学检验分离培养,纯培养生化试验血清学判定药品敏感试验毒力试验动物试验抗原核酸细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第8页一、细菌学诊疗细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第9页（一）形态学检验光学显微镜检验法：细菌染色检验法革兰染色法抗酸染色法负染法暗视野检验：用于检验活菌、螺旋体及其动力荧光显微镜细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第10页脑脊液直接涂片染色-肺炎链球菌细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第11页链球菌细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第12页淋病奈瑟球菌-脓液直接涂片细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第13页结核分枝杆菌细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第14页霍乱弧菌细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第15页暗视野显微镜钩端螺旋体细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第16页肺炎双球菌细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第17页病原菌分离培养/直接涂片大小形态颜色表面性状透明度溶血性Flamesterilizewireloop,metalforceps,etcbeforeandafteruseinahoodedBunsenburner细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第18页细菌动力检测细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第19页化脓性球菌葡萄球菌链球菌细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第20页肠道杆菌大肠埃希菌沙门氏菌志贺菌细菌形态无特异性可采取生化学检验法-判别细菌主要方法细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第21页（二）生化试验

糖发酵试验H2S试验枸橼盐利用试验细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第22页判定中最主要生化反应※乳糖发酵试验肠道非致病菌（埃希菌属）发酵乳糖、产酸产气＋肠道致病菌（志贺菌属、沙门菌属等）不发酵乳糖—细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第23页（三）血清学判定利用含已知特异性抗体免疫血清，检测未知细菌抗原，对细菌进行种判定志贺菌属、沙门菌属惯用方法是玻片凝集试验细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第24页测定抗生素或其它抗微生物制剂在体外抑制细菌生长能力方法：扩散法、稀释法（四）药品敏感试验细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第25页MIC&MBC最低抑菌浓度，MIC最低杀菌浓度，MBC细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第26页全自动分析仪全自动细菌判定仪全自动生化分析仪细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第27页（五）检测毒力-动物试验1.惯用动物

Mouse

GuineaPig

RabbitDogMonkey细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第28页接种路径皮内皮下腹膜内静脉颅内椎管内鼻内灌胃细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第29页毒力检测半数致死量

LD50半数感染量

ID50细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第30页二、检测病原菌成份抗原检测核酸检测细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第31页（一）抗原检测利用已知特异性Ab检测Ag方法惯用方法有玻片凝集协同凝集试验ELISA免疫荧光法细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第32页ELISA细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第33页（二）核酸检测方法聚合酶链反应（PCR）核酸杂交技术SouthernblotNorthernblotDotblotInsituhybridization基因芯片(Genechip)16SrRNA细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第34页16sRNA基因序列分析只存在于原核细胞型微生物染色体基因中16sRNA，23sRNA,5sRNA可变区和保守区保守区：全部细菌所共有可变区：属和种特异性细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第35页PCRGeneChip细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第36页细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第37页三、抗体检测用已知细菌或其Ag检测对应特异性Ab及其量多少，作为一些病原菌感染辅助诊疗急性期和恢复期双份血清，恢复期效价升高≥4倍有诊疗价值方法玻片或试管凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、冷凝集试验、ELISA局限难以早期诊疗细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第38页第二节病毒感染微生物学检验法形态学病毒分离判定在培养细胞中增殖判定指标病毒成份检测病毒抗体检测细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第39页细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第40页（一）病毒形态学检验

电子显微镜（EM）

免疫电镜,IEM光学显微镜（CM）包涵体内基小体（Negribody）HAVNegribody细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第41页动物接种：动物模型鸡胚接种：9～14d组织培养器官培养组织培养

细胞培养

原代细胞培养二倍体细胞培养传代细胞培养三大培养方法（二）病毒分离培养方法细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第42页血凝抑制试验中和试验PCR检测病毒分离培养及鉴细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第43页细胞病变（cytopathy)

※红细胞吸附(hemadsorption)病毒干扰作用(viralinterference)中和试验(neutralizationtest,NT)空斑形成试验(plaqueformation)病毒在培养细胞中增殖判定指标※细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第44页细胞病变—细胞病变效应※

（CPE）

细胞病变效应（CPE）A：未感染病毒HeLa细胞；B：被柯萨奇病毒B3感染后，细胞变圆、皱缩，细胞折光性减弱；C：被腺病毒感染后，细胞肿胀，折光性增强，呈葡萄状排列。200

50%组织细胞感染量TCID50:依据有没有细胞病变来判断病毒感染性和毒力指标细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第45页细胞病变红细胞吸附：血凝素（HA）病毒干扰作用中和试验病毒数量及感染性检测空斑形成试验红细胞凝集红细胞吸附病毒在培养细胞中增殖判定指标plaque细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第46页空斑形成试验用于病毒浓度准确定量和测定抗病毒药品作用一个空斑是由一个病毒大量复制而成，称为空斑形成单位（Plaqueformingunit，PFU）。病毒感染量用PFU/ml表示细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第47页（三）病毒成份检测病毒抗原检测:ELISA病毒核酸检测核酸杂交、PCR、基因芯片细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第48页病毒成份检测细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第49页（四）病毒抗体检测中和试验（NT）血凝抑制试验（HT）补体结合试验（CF）ELISA法蛋白印迹技术细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第50页小结细菌感染微生物学检验法病原体检验核酸检测抗原、抗体检测病毒感染微生物学检验法电镜及免疫电镜病毒分离培养和判定核酸检测抗原、抗体检测细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第51页小结抗细菌免疫固有免疫※取得性免疫抗病毒免疫固有免疫干扰素※取得性免疫细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第52页问题采集标本标准？病毒在培养细胞中增殖判定指标？干扰素概念及其抗病毒机制细菌和病毒的微生物学检查法专家讲座第53页自检内容1.机体抗结核分枝杆菌感染免疫主要依赖A.屏障结构B.细胞免疫C.抗体中和作用D.非特异性免疫分子E.吞噬细胞吞噬作用2.灭活和去除游离病毒主要依靠A.干扰素B.抗体C.