药物研究的动物实验方法专家讲座

第七章药品研究动物试验方法药物研究的动物实验方法专家讲座第1页第一节药品试验剂型、剂量与样本数确定一、受试物剂型配制

在药品研究动物试验中，需要用溶剂、助溶剂或赋形剂将受试物配制成一定剂型后给动物使用。

溶剂、助溶剂要求：无毒性、与受试物无反应、制成溶液稳定。

惯用溶剂：水、生理盐水、植物油等。

惯用助溶剂：吐温-80药物研究的动物实验方法专家讲座第2页二、给药路径与剂量

各种药品试验都应采取两种给药路径为宜。一个与临床给药路径相同，另一个以注射给药。

（一）、动物用药量确实定1、先用小鼠粗略地探索中毒或致死剂量，然后用小于中毒量剂量，或取致死量若干分之一为应用剂量，普通可取1/10-1/5。2、植物药粗制剂剂量多按生药折算。3、化学药品可参考化学结构相同已知药品，尤其是化学结构和作用都相同药品剂量。药物研究的动物实验方法专家讲座第3页4、确定剂量后，如第一次试验作用不显著，动物也没有中毒表现（体重下降、精神不振、活动降低或其它症状），能够加大剂量再次试验。如出现中毒现象，作用也显著，则应降低剂量再次试验。在普通情况下，在适宜剂量范围内，药品作用常随剂量加大而增强。所以有条件时，最好同时用几个剂量作试验，方便快速取得关于药品作用较完整资料。如试验结果出现剂量与作用强度之间毫无规律，则更应慎重分析。5、用大动物进行试验时，开始剂量可采取给鼠类剂量十五分之一~二分之一，以后可依据动物反应调整剂量。药物研究的动物实验方法专家讲座第4页6、确定动物给药剂量时，要考虑给药动物年纪大小和体质强弱。普通说确定给药剂量是指成年动物，如是幼小动物，剂量应降低。如以狗为例：6个月以上狗给药量为1份时，3-6个月给予1/2份，45-89日1/4份，20-44日给1/8份，10-19日给1/16份。7、确定动物给药剂量时，要考虑因给药路径不一样，所用剂量也不一样，以口服量为100时，灌肠量应为100-200，皮下注射30-50，肌肉注射25-30，静脉注射为25。药物研究的动物实验方法专家讲座第5页

(二)、试验动物用药量计算方法动物试验所用药品剂量，普通按mg/kg体重或g/kg体重计算，应用时须从已知药液浓度换算出相当于每kg体重应注射药液量（ml数），方便给药。例：计算给体重1.8kg家兔，静脉注射20%氨基甲酸乙酯溶液麻醉，按每kg体重1g剂量注射，应注射多少ml？药物研究的动物实验方法专家讲座第6页(三)、人与动物及各类动物间药品剂量换算方法1、人与动物用药量换算人与动物对同一药品耐受性相差很大。普通说来，动物耐受性要比人大，也就是单位体重用药量动物比人要大。可按以下百分比换算：人用药量为1，大、小鼠为25-50，兔、豚鼠为15-20，狗、猫为5-10。可采取人与动物体表面积计算法来换算：（1）人体体表面积计算法：东亚人：许文生氏公式：体表面积（m2）=0.0061x身高（cm）+0.0128x体重（kg）-0.1529如：身高168cm，体重55kg，体表面积为1.576m2药物研究的动物实验方法专家讲座第7页（2）动物体表面积计算法：由体重推算体表面积时，Meeh-Rubner氏公式较适用，

（体重，以g计算）2/3A（体表面积，以m2计算）=K×——————————

10000K为一常数，随动物种类而不一样，小鼠和大鼠9.1、豚鼠9.8、家兔10.1、猫9.8、狗11.2、猴11.8、人10.6，为一粗略估算值。如：家兔1.5kg，则A=0.1324m2药物研究的动物实验方法专家讲座第8页2、人及不一样种类动物之间药品剂量换算（1）直接计算法例：某利尿药大鼠灌胃剂量为250mg/kg，粗略预计狗灌胃剂量？大鼠体重以200g计，则A1=0.0311m2

250mg/kg剂量如改以mg/m2表示：250*0.2/0.0311=1608mg/m2狗体重以10kg计,则A2=0.5198m2狗剂量:

1608*0.5198/10=84mg/kg药物研究的动物实验方法专家讲座第9页（2）转换因子计算按mg/kg折算mg/m2转换因子计算：大鼠为6，狗19，小鼠3，豚鼠8，家兔12，猫14，猴12，人35。250x6/19=79mg/kg（3）每kg体重占有体表面积相对比值计算小鼠1.0(0.02kg)，大鼠0.47(0.20kg)，豚鼠0.40(0.40kg)，家兔0.24(2.0kg)，猫0.22(2.5kg)，狗0.16(10.0kg)，猴0.24(3.0kg)，人0.08(50kg)。

250*0.16/0.47=85mg/kg药物研究的动物实验方法专家讲座第10页（4）按人和动物间按体表面积折算等效剂量比值计算（5）按人和各种动物间每千克体重剂量折算系数计算（W）药物研究的动物实验方法专家讲座第11页在新药研制过程主要分临床前试验研究、临床人体试验研究、新药同意上市后不良反应监测等三个阶段。这三个阶段都包括药品安全性评价问题。在临床前试验研究中，主要是在试验室应用试验动物进行药品安全性评价。试验动物质量及其规范化管理与药品安全性试验结果科学性和可靠性息息相关，因而，试验验动物规范化是GLP一个主要组成部分。药物研究的动物实验方法专家讲座第12页第二节药品急性毒性观察动物试验方法急性毒性试验(AcuteOralToxicity)：一次或在24h内屡次经口给予试验动物受试样品后动物在短期内出现健康损害效应。经口半数致死剂量OralMedianLethalDose:经口一次或24h内屡次经口给予受试样品后引发试验动物总体中半数死亡毒物统计学剂量以单位体重接收受试样品质量(mg/kg或g/kg)来表示。试验目标：1、观察急性中毒表现，寻找靶器官。2、测定毒性参数。3、为长久毒性、蓄积毒性等试验给药剂量设计提供依据。药物研究的动物实验方法专家讲座第13页一、试验要求

1、动物选择：小鼠，体重18-22克，雌雄各半。

2、给药路径和容积：两种路径，注意容量。

3、给药剂量与分组：首先进行预试验。动物分4-6组，每组最少10只以上。给药剂量按等比级数增减。

4、观察统计：即刻观察动物反应，统计中毒症状、体征和死亡情况。观察周期为两周。

5、解剖统计：动物死亡应及时进行剖检。药物研究的动物实验方法专家讲座第14页二、急性毒性试验LD50LC50计算方法

1、改进寇氏法

要求：每组动物数相等；剂量按等比级数；Pn<0.2Pm>0.8

依据试验条件及试验结果，选取LD50计算公式

此法易于了解计算简便可信限不大结果可靠尤其是在试验前对受试样品急性毒性程度了解不多时尤为适用2、概率单位-对数图解法

预试验以每组2~3只动物找出全死和全不死剂量。动物数普通每组不少于10只各组动物数量不一定要求相等。剂量及分组普通在预试验中得到两个剂量组之间拟出等比六个剂量组或更多组此法不要求剂量组间呈等比关系但等比可使各点距离相等有利于作图。作图计算三、测定LD50应注意几个问题

1、测定前，应进行预试验。

2、注意动物原因对试验结果影响。

3、注意环境原因影响。

4、注意操作原因影响。

5、注意试验条件一致性。

6、观察时间普通为14天。

7、普通情况下，各剂量组死亡分布有一定规律。药物研究的动物实验方法专家讲座第15页第三节药品长久毒性观察试验方法长久毒性试验就是对动物重复屡次给药，观察药品对动物毒性反应，普通是指连续14天以上。

长久毒性试验目标：寻找可能靶器官及停药后组织和功效损害是否可逆情况，为临床安全用药剂量设计提供参考依据，为临床毒副作用反应监测提供依据。药物研究的动物实验方法专家讲座第16页一、试验要求

1、动物选择和喂养管理

2、受试药品

3、给药路径：普通要求与临床给药路径相同。

4、给药剂量与分组：三个试验组，一个对照组。每组动物20只，雌雄各半。二、观察指标

1、普通性指标：外观体征和行为观察、采食情况、体重。

2、化验指标：血液、尿液

3、病理检验：尸检、脏器系数、病理切片

4、特殊指标：药物研究的动物实验方法专家讲座第17页三、指标检测时间与恢复期观察

1、指标检测时间：

大鼠：最终一次给药后24小时内和恢复期结束各进行一次。

犬：在试验前应检测正常值2次，给药后1个月检测一次，停药时检测1次，恢复期结束时检测一次。

2、恢复期观察：

最终一次给药后24小时每组处死2/3-1/2动物，检测各项指标。留下动物继续观察2-4周后处理检验，以了解毒性反应可逆程度和可能出现蓄积毒性反应。在此期间，除不给受试物外，其它观察内容与受试物期间相同。药物研究的动物实验方法专家讲座第18页第五节制剂常规安全性评价动物试验方法异常毒性检验法

本法系将一定剂量供试品溶液注入小鼠体内或口服给药，在要求时间内观察小鼠死亡情况，以判定供试品是否符合要求一个方法。

供试用小鼠应健康无伤，体重17～20g,在试验前及试验观察期内，均应按正常喂养条件喂养。作过本试验小鼠不得重复使用。

供试品溶液配制：除另有要求外，用氯化钠注射液按各药品项下要求浓度制成供试品溶液。

药物研究的动物实验方法专家讲座第19页检验法

除另有要求外，取上述小鼠5只,按各药品项下要求给药路径，每只小鼠分别给予供试品溶液0.5ml。给药路径分为以下几个。

静脉注射：将供试品溶液注入小鼠尾静脉，应在4～5秒匀速注射完成。

腹腔注射：将供试品溶液注入小鼠腹腔。

皮下注射：将供试品溶液注入小鼠腹部或背部两侧皮下。

口服给