全身用药的毒性研究VIP

全身用药的毒性研究全身用药的毒性研究第1页第一节新药急性毒性试验急性毒性试验

毒性反应类型定性出现和消失时间可能靶器官和死亡原因致死量定量最大给药量半数致死量全身用药的毒性研究第2页一、目标和意义

1、了解新药急性毒性强弱

LD50ED50

治疗指数（LD50/ED50）

相对毒性

安全系数（LD5/ED95）全身用药的毒性研究第3页

2、为长久毒性试验和特殊毒性试验剂量设置提供依据

致突变作用评价为核试验最高剂量为1/2半数致死量。生殖毒性试验中，雌性动物最高量为急毒中最大耐受量。长久毒性试验中为急性毒性最大耐受量。全身用药的毒性研究第4页

3、获取新药毒性反应信息

毒性反应症状、靶器官、致死原因等

普通情况毒性大小有显著种属差异特殊情况无显著种属差异对一期临床指导意义

4、为新药药学研究提供参考

全身用药的毒性研究第5页二、试验方法（一）半数致死量（LD50)测定试验方法

1、试验动物选择啮齿类动物动物非啮齿类动物动物性别、年纪、数量。

全身用药的毒性研究第6页

2、动物随机分组

按性别、体重采取分层随机法

3、剂量设计

预试验得出0-100%死亡剂量范围内，设计5-6个剂量组。各剂量组间距为1:0.65-0.85,高剂量70%死亡率以上，低剂量死亡率30%以下。

全身用药的毒性研究第7页

4、给药两种给药路径

5、观察观察时间及观察内容

6、结果处理与评价

对数据进行科学全方面分析，概括出药品急性毒性总体情况。全身用药的毒性研究第8页（二）最大给药量试验在受试药品合理最大容积和最大浓度条件下，单次给予试验动物不产生死亡最大给药量试验。（三）最大耐受量试验单次给药引发动物出现显著中毒反应而未发生死亡剂量。普通使用20只动物，连续观察7-14

天。全身用药的毒性研究第9页（四）固定剂量试验试验不以死亡为观察终点，而以显著毒性体征为评价指标。据资料，用5、50、500和mg/kg4个国定剂量中一个做初试剂量，单次给药。给药前禁食6-12小时，给药后禁食

3-4小时。全身用药的毒性研究第10页（五）近似致死剂量试验主要用于非啮齿动物誓言。常见

Beagel犬或猴。

1、预计可能致死范围。

2、按50%递增法，设计10-20个剂量序列表。

3、在剂量序列表中找出可能致死剂量范围。全身用药的毒性研究第11页（六）其它方法1、上下法（阶梯法、序贯法）

2、累积剂量设计法（金字塔法）全身用药的毒性研究第12页三、急性毒性试验中常见LD50计算方法

1、Bliss法

2、寇氏法

3、改良寇氏法

4、何尔恩法

全身用药的毒性研究第13页第二节新药长久毒性试验长久毒性试验对动物重复屡次连续给药毒性试验。长久毒性试验目标

1、重复屡次给药情况下，试验动物出现毒性反应、量效关系、主要靶器官、损害程度及其可逆性。

2、取得重复给药情况下，试验动物能耐收剂量范围及完全无毒性反应安全范围。全身用药的毒性研究第14页一、普通标准1、动物选择及分组啮齿类非啮齿类溶剂对照组高剂量组给药试验组中剂量组低剂量组全身用药的毒性研究第15页2、试验室条件应尽可能符合GLP标准。3、剂量设计低剂量组-无毒剂量（临床用量2-3倍）中剂量组-高、低剂量几何平均数高剂量组-毒性剂量4、给药路径拟推荐临床用药路径全身用药的毒性研究第16页5、给药容量应依据体重增加情况调整给药量，按等量不一样浓度法配制药品。6、试验周期临床试验用药动物试验用药

＜

5天2周

＜

2周4周

2-4周3个月

1-3个月6个月

＞

3个月啮齿类6个月、非啮齿类9个月普通给药时间为临床给药试验周期3-4倍时间全身用药的毒性研究第17页二、检测项目（一）普通观察外观体征和行为活动，流涎等腺体分泌、粪便性状与颜色、毛色、行为、给药局部反应、食量及体重改变。对死亡动物应进行系统病理学检验。全身用药的毒性研究第18页（二）血液学指标

红细胞、网织红细胞计数血红蛋白血液学指标白细胞总数级分类血小板凝血时间全身用药的毒性研究第19页（三）血液生化指标

天门冬氨酸氨基转换酶(AST)

丙氨酸氨酸氨基转换酶(ALT)

碱性磷酸酶(ALP)血液生化指标尿酸氮(BUN)、总蛋白(TP)

白蛋白(Alb)、血糖(ALU)

总胆红素(T-BIL)、肌酐(Crea)

总胆固醇(T-CHO)全身用药的毒性研究第20页（四）特殊检验

可能引发眼、耳毒性药品，应增加眼、耳毒性检验。有些药品尚需研究对酸碱平衡、水盐代谢影响。全身用药的毒性研究第21页（五）系统尸体解剖1、脏器系数

心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、甲状腺、睾丸、子宫、脑等

2、组织学检验内容为：脑、脊髓、视神经、眼、垂体、心脏、肝、脾、肺、肾、肾上腺、甲状腺、睾丸、子宫等。全身用药的毒性研究第22页三、检测指标时间（一）检验间隔（给药期间检验间隔）全身用药的毒性研究第23页（二）恢复性观察最终一次给药后24小时，每组活杀部分动物监测各项指标。留下个别动物，根据药品特点和毒性情况，继续观察2-4周，以了解毒性反应可逆性和可能出现延迟性毒性。全身用药的毒性研究第24页四、资料整理要求1、首页写明试验题目，试验单位，课题负责人署名、试验参加人名单，职称，试验开始即结束时间，试验原始资料保留地点，申请注册单位等。2、第二页试验摘要

全身用药的毒性研究第25页3、内容试验汇报内容包含试验方法、目、供试品（品名、批号、生产单位、规格、包装情况、性状等等。），试验动物情况（起源、数量、品系、雌雄、动物证、试验环境温湿度、饲料起源等），试验方法，结果，结论，参考文件等。4、要客观描述大致解剖及病理学检验结果，提供病理照片材料。全身用药的毒性研究第26页五、结果评价1、试验结果数据进行统计学处理。2、依据试验目标，结合所观察到毒性表现作出恰当评价。3、对取得数据进行科学全方面地分析。4、对于一些项目标试验，可安排在该试验中同时观察，并提供符合要求试验结果。全身用药的毒性研究第27页第三节制剂全身毒性试验一、静脉注射制剂全身毒性试验血管刺激性试验体外溶血试验全身毒性试验过敏性试验热原试验全身用药的毒性研究第28页一）血管刺激性试验1、目标-观察静脉注射剂屡次给予后对血管刺激性情况。2、动物-家兔（每组最少3只动物）3、方法-分成两组（阴性对照组、给药组）分别对家兔耳缘静脉注射给药，连续5次，末次注射后24小时处死个别动物，肉眼观察并对组织进行病理学检验；余下动物14天后进行一样检验。4、判定方法5、结果评价全身用药的毒性研究第29页家兔耳缘静脉血管全身用药的毒性研究第30页二）体外溶血试验1、目标-静脉注射剂对红细胞状态影响2、动物-家兔1只3、方法

1）2%红细胞悬液制备

2）受试物制备-临床使用浓度

3）试验方法全身用药的毒性研究第31页体外溶血试验加样表试管号12345672%红细胞2.52.52.52.52.52.52.5

生理盐水2.02.12.22.32.42.5

蒸馏水2.5

受试物0.50.40.30.20.14、判定方法-溶血、无溶血、红细胞凝聚5、结果评价-3小时内无溶血，能够注射使用全身用药的毒性研究第32页三）过敏性试验1、目标-观察供试物对动物有没有过敏反应2、动物-雄性豚鼠18只（三组-每组6只）3、方法溶剂组-生理盐水或葡萄糖注射液

1）分组阳性组-1%新鲜鸡蛋清给药组-受试物

2）每组分别腹腔注射，隔日一次，共三次，首次注射第14日、21日每组取3只动物静脉注射，观察过敏反应。全身用药的毒性研究第33页4、判定方法豚鼠过敏反应判定标准反应级数反应症状0无显著反应1有轻微抓鼻、颤动或竖毛2有几次咳嗽、抓鼻、颤动或竖毛3屡次或连续咳嗽、伴有呼吸困难或痉挛、抽搐等4痉挛、抽搐、大小便失禁、休克死亡5、结果评价

反应级数2级（包含2级）为阳性全身用药的毒性研究第34页四）热原试验1、目标-判定受试物是否有致热作用2、动物-家兔3、方法

3只家兔，侧正常体温，注射药品，每小时测体温一次，共3次。最高一次温度减正常体温。如三只家兔中有一只升温超过0.6℃或三只家兔升温总和超出1.4℃时;

应另取5只家兔复试，方法通上。全身用药的毒性研究第35页4、判定方法

1）3只家兔升温总和不超出1.4℃而且每只家兔升温不超出0.6℃。

2）5只家兔升温总和不超出3.5℃而且升温超出0.6℃家兔不超出1只。5、结果评价全身用药的毒性研究第36页二、局部用药全身毒性试验

主要讨论皮肤用药、眼科用药、滴鼻剂、吸入剂及直肠、阴道制剂等引发全身毒性试验。见第十九章。全身用药的毒性研究第37