白细胞介素-6 基因174G-C 多态性与广州地区 汉族儿童脓毒症的相关性分析

白细胞介素-6174G-C摘要］６（ＩＬ－６）基因－１７４Ｃ／Ｇ多态性与广州地区汉族儿童脓毒症的易感风险及预后的关联性。方法以人群为基础进行脓毒症病例对照研究，应用等位基因特异性扩增多聚酶链(AS-PCR)方法对广州地区汉148181AS－PCR检测未发现－１７４位点多态性。结论中国广州地区汉族人群ＩＬ－６基因可能不存在－１７４位点多态性,不宜选取该基因位点单核苷酸多态性作疾病的关联性分析。［关键词］脓毒症；白细胞介素６；多态性，单核苷酸；疾病遗传易感性CorrelationbetweenIL-6genepolymorphismsandsepsisofchinachildreninGuangzhouprovinceWeiYan-dan1,ZengHua-song2(1.HuaduDistrictMaternity﹠ChildHealthcareHospital2.GuangzhouWomenandChildrenMedicalCenter,Guangzhou510000china)[Abstract]objectivetoinvestigatethecorrelationbetween–174G/CpolymorphismsofIL-6geneandsepsisofChinesechildreninGuangzhouprovince[Methods]Apopulation–basedcase–controlstudyinvolving148patientswithsepsisand181healthvolunteers(control）wascarriedout,The174G/CpolymorphismsofIL-6geneWasanalyzedbyusingallelespecialpolymerasechainreaction(AS-PCR)amplification．[Results]Nowasfound-174site(GGgenotypeonly),andnosignificantdifferenceofallelefrequencyexistedbetweenpatientsandcontrols.Notobeselectedthegenesitsfordiseaseassociationanalysis.[Keywords]sepsis;interleukin-6;polymorphism;singlenucleotide；geneticpredispositiontodisease;children.脓毒症（Sepsis）是感染引起的全身炎症反应综合症(SIRS)。SIRS是机体对天六（ＩＬ－６）是脓毒症发生、发展中功能最为广泛的炎性细胞因子之一，其血清浓度与脓毒症的严重程度及预后有关［1］／Ｇ位点多态性基因分布特征并分析与脓毒症易感转归的相关性，为研究脓毒症的发病机制及个体化治疗提供依据。1.对象和方法1.1对象20074～12148例外周血标本,181.所有标本均采自广州市居住儿童。健康对照组为健康查体儿童,1月有发热,咳嗽,查体无心、脑、肺等器官异常,采血查血象在正常范围。脓毒症患儿为疾病组,其65837例最后12例。脓毒症疾病组入选标准按中华儿20068448(脓毒性休克)诊疗推荐方案中的诊断标准[2]。148例9454例,(32.4±20.4)181例，11467例，年龄（40.8±16.8）学意义(P0.9200.102)653629例，年龄（38.3±23.4）835627例，年龄（28.8±3.6）月。1.2方法1.2.1外周全血基因组DNA的提取1.0mLEDTA0.2～05mL,按QIAampDNABloodMiniKit(QiagenHilden,Germany)的操做指南进行外周全血基DNA提取;DNA-20℃.1.2.2PCR引物合成参照文献[3]IL-6-174PCR引物，G5-GCACTTTTCCCCCTAGTTGTGTCTTACG-3；C5-ATGACGACCTAAGCTTTACTTTTCCCCCTAGTTGTGTCTTGAC3共同下游引物为：5-ATAAATCTTTGTTGGAGGGTGAGG31.2.3PAI-1基因的PCR扩增GPCR250μL,Greenmastermix2×,(Promega，Madison,USA8.5μLG特异性引物及共同下游引物均为（0.8-1.0）μmol/L,200～250mg250μL(C上游引物与共同下游引PCR反应体系与之相同)。1.2.4PCR扩增程序为95℃10min,9435ses,6145ses,7245ses,30个循环,72℃5min。1.2.5PCR产物琼脂糖凝胶电泳,IL-6-174G/C多态性检测各取G、C等位基因PCR(10-15μL20g/L琼脂糖凝胶(05mg/LEtBr)EPS-300电泳仪（稳压稳流电泳仪，上海天能科技有限公司）中电泳(80～90V,30～45minDL200DNAMarkerGelDocEQ凝胶成像系统（bio-RADGelDocXR，USA）进行摄像分析。G/C基因型测定由两个泳道决定。G/GG121bpC/CC136bp条带；G/CGC两121bp136bp.（1）1：GG等位基因泳道；CC等位基因泳道，1-5抽取１510％产物直接测序（司），准确率均为１００％。２结果PCR300余例（正常健康对181148例）100%，未测及Ｃ等位基因。３讨论随着人类基因组学研究的深入，已认识到脓毒症是由环境因素(病原微生物等)和遗传因素共同作用的多基因征侯群，个体遗传学机制的差异性是脓毒症个体差异的内因物质基础[4]。促炎／抗炎反应失控与脓毒症的发生发展密切相关，而ＩＬ－６是脓毒症的主要炎性因子之一[5]，对其进行基因多态性研究，可为脓毒症易感人群的早期识别、预后分析和免疫治疗提供新的理论依据。－１７４Ｇ／Ｃ［7］处于连锁不平衡，C／C基因型的携带者血浆ＩＬ－６水平明显低于G／CG／G基因型个体[8]等的研究表明，ＩＬ－６基因－１７４Ｇ／2[3,9,10]SchluterG/CG/C基因与内毒素（LPS）刺激全血白细胞产生ＩＬ－６水平的能力也无差异[11]。1018个脓毒症相关基因进行单核苷酸多态性研究分析，结果显示，在我国人群中发生频率>5%918088%>10%6764个，96%10%未发现ＧＣ和ＣＣ基因型，与国外报道存在三种基因型有明显差异；表明在广州IL-6-174G/C多态性存在与欧美人种具有完全不同的频率分布特征。与国内某些地区如广西、河南、深圳的研究报道结果相同[13，14]，而我国其他地区的研究结果显示ＧＣ和ＣＣ基因型在人群分布频率极低，不足2%，而ＣＣ基因型则罕测及[15，16]。总之，本研究探索了ＩＬ－６－１７４Ｇ／Ｃ多态性与我国广州地区汉族儿童脓毒症的关联性，结果显示我国汉族人群IL-6-174C/G多态性基因型分布特征与欧美人种有明显差异性,可能不存在－１７４位点多态性，不宜选取该基因位点单核苷酸多态性作疾病的关联性分析。参考文献RemickDG,BologosG,CoperandS,etal.Roleofinterleukin-6inmortalityfromandphysiologicresponsetosepis[J].InfectImmun,2005,73（5）：2751-2757.樊寻梅等，儿科感染性休克（脓毒性休克）2006,17（8），596－598.[3]H.Schotte,B.schuter,S.Rust,etal.Interleukin-6promoterpolymorphism(-174G/C)inCaucasianGermanpatientswithsystemiclupuserythematosus.BritishsocietyforRheumatology,2001,40(13):393-400.姚咏明，柴家科，林洪远．现代脓毒症理论与实践[M]社，2005：341-361．2008,17(2)，117-118.学。2011,23(11)：699-702.TerryCF,LoukaciV,GreenFR.Cooperativeinfluenceofgeneticpolymorphismsoninterleukin6transcriptionalregulation[J].JBiolchem,2000,275(24):18138-18144.FishmanD,FauldsG,JefferyR,etal.TheeffectofnovelpolymorphismsintheInterleukin-6geneonIL-6transcriptionandplasmaIL-6level,andanassociationwithsystemic–onsetjuvenilechronicarthritis.JClinInvest,1998,102(7):1369-1376.AkiraS,IsshikiH,NakajimaT,etal.Regulationofexpressionoftheinterleukin6gene:structureandfunctionofthetranscriptionfactorNF-IL6[J].CibaFoundSymp,1992,167(17):47-62.José-ManuelFernández-Real,MontserratBroch,JoanVendrell,et,al.BriefGeneticsReportInterleukin-6GenePolymorphismandInsulinSensitivityDIABETES,MARCH2000.VOL.1997,49(35),:517-520.SchluterB,RaufhakeC,ErrenM,etal.Effectoftheinterleukin6promoterpolymorphism(-174G/C)ontheincidenceandoutcomeofsepsis.CritCareMed,2002,30(1):32-37.2005,21(1)：45-49.MarieBennermo,ClaesHeld,StenStemme,et.al.GeneticPredispositionoftheInterleukin-6ResponsetoInflammation:ImplicationsforaVarietyof