放线菌分枝中脂阿拉伯甘露糖状lipoglycan的鉴定

放线菌分枝中脂阿拉伯甘露糖状lipoglyca的鉴定摘要放线菌的细胞信封包含lipidatedmacroamphiphiles,其中最广泛的特点是分枝杆菌和有关细菌lipoarabinomannans。我们已经研究了烟酸含放线菌大头bronchialis并确定了脂阿拉伯甘露糖般lipoglycan存在。根据磷酸肌醇甘露糖苷性质提出提取和纯化回收的程序与建议，第二个大头两亲一小部分与其他物种的研究是一致的。关键词放线菌糖脂Lipoglycan北脂磷壁酸结核分枝杆菌北磷脂甘露糖苷红球菌介绍细胞信封通常是革兰氏阳性细菌，它包含macroamphiphiles两性分子的聚合物，其大致可以分为脂磷壁酸或lipoglycans两类。Lipoglycan中已分离出支原体和放线菌的细菌，其中最广泛的研究的是lipoarabinomannans和其亲属的分枝杆菌。分枝杆菌林在磷脂酰环己六醇（PI）结构上锚带有甘露聚糖核心，这反过来又属于阿拉伯（糖）聚糖范围。此外，阿拉伯（糖）聚糖领域可能携带各种取代基及封盖图案。LAM是通过一种独特的LM伴随在分支杆菌的细胞膜上，它们依附在同一个PI-甘露聚糖核心结构上，这两个lipoglycans是生物合成性的相互关联。除了LM和LAM，分支杆菌的细胞膜磷脂含

有的甘露糖（PIMS）与LM和LAM.Mycobacterial的锚定单位在结构上有联系。分支杆菌属LAM可以看成是LAM状的lipoglycans家族代表，包括大量的阿拉伯聚糖领域和所谓的在单一阿拉伯聚糖分枝PI=甘露聚糖核心锚上的LAM的代表。结构多样性的了解可能会引起对LAM功能的讨论。大头菌属作为病原体微生物有着重大的生物学意义和重要性。在这项研究中，我们研究了macroamphiphile在放线菌大头bronchialis中的性质。材料与方法使用标准热酚水隔离macroamphiphiles过程提取冻干G.bronchialisN654T细胞。如前面所述，从水相萃取透析和冷冻前的疏水作用层析（HIC纯化干）中获得粗分离物。在酸催化转甲基作用分离脂肪酸甲酯后用先前描述的气相色谱（Sutcliffe,2000）来分析脂肪酸。在糖类的分析中，样品需要在（2MHCl,110_C,4h条件下水解，并且将分离物衍生为糖醇醋酸酯以便利用气相色谱法研究。为了使用气相色谱质谱法分析收益产品，糖连锁分析采用连续permethylation，酸水解和乙酰化作用。如前所述使用了聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹（萨特克利夫2000年）。

结果和讨论拥有高含量LAM-likelipoglycan早被确定为由PIM-like片断伴随的G.rubropertincta,相比之下，苯酚萃取用于从G.bronchialisN654中获取两亲组件，利用疏水作用层析法提纯。正如先前对G.rubropertincta的观察（弗莱厄蒂和Sutcliffe1999），与异丙醇的辛基-琼脂糖柱梯度洗脱允许两个两亲碳水化合物组分的鉴定，（从42分数中共收集馏分29-32[HIC1]和34-36[HIC2];数据没有显示）。每7mg干材料产生的最大值表明每个两亲分子相当于G.bronchialis干细胞重的0.6%。这两种制剂已经过初步化验。脂肪酸的分析报告（Table1）说明脂肪酸在这些存在两性分子中的棕榈酸，heptadecanoate，和10-甲基十八碳羧酸中占主导地位。侧面反映了在所有细胞中脂肪酸占了很重要的地位，虽然不饱和酸的含量比例降低了，正如以前所观察到的（弗莱厄蒂和Sutcliffe1999;加顿等人，2002年）。脂肪酸剖面与以前报道为G.bronchialis型菌株一致（克拉特等人。1996年）。经酸水解释放的碳水化合物成分分析显示含有碳水化合物的HIC1部分在甘露糖，阿拉伯糖和纤维糖中占首要地位，那就是LAM-likelipoglycan一个典型的组成成分，然而，HIC2部分在丙醇梯度洗脱后阿拉伯糖的含量最低。尽管在本研究中用了大量的肌醇来观察，这些数据都与以前对LAM-likelipoglycanofG.rubropertincta的报道非常相似（弗莱厄蒂和Sutcliffe1999）。聚丙烯酰胺凝胶电泳用于进一步分析这些两亲分子。当碳水化合

物的组成成分能被高碘酸染色检出(Table1),从HIC1部分中获得了高达ca.24-30kDa的可见的分子量波段，然而，在HIC2中检测到的波段小T15kDa。在Westernblotting中，只有HIC1中的高峰物质才与1祯多克隆抗体反应。这些数据与以前对G.rubropertincta的报道非常相似(弗莱厄蒂和Sutcliffe1999年)。这些数据(Table1)累计表明G.bronchialis中HIC1部分包含了一个LAM-likelipoglycan。这些庞大的阿拉伯糖含量和与多克隆抗体的交叉反应是与阿拉伯聚糖领域一致的。从初步糖连锁反应试验的证据还证明这个观点。HIC1中的样品被酸水解，乙酰化后用气相色谱质谱分析。大量光谱显示产物沿着1一2和1,2，5阿拉伯糖链与1一5阿拉伯糖链一致。峰值与1一6,1，2,6分枝和被检测出的甘聚糖峰值一致。1一4己糖链峰值也被记下，这是在LAMorLAM-likelipoglycans中甘露聚糖领域没有报道过的一个不寻常的发现。(Nigou等人。2003年)。LiH<<1Ch.gUcrisliL%ot'lhtamphiphiin:cnrupuncR^piirilialbyHIChllau'ingphtncll-wdlcrdlracliorM(i.hranchiaiisFn)pcrt)HEl'lfniliclnHIC?pcitkIhcljunCiirkih)<lnikturluilGlyCiTdt1.4%Ciiycerul4J%Arabi邮£4B.7%AnhinuscM%Maunus?§33%Mun叩就67.5%In如e!]6.7%血而L'uL'r此ilWer烦ionC16:(ICl做Cl7：0CIH(WC照〕[担％CIS：]C1K:14.2%TuhcnciilDslcLiiilc['LkrciLk^lcanlt24.J%n;cbitit,(rirjcdix!u<i?dfmmpri?kin,曲讪mnix)243(：kDd55kDuCrms-ruaciiofiwith澳)don刑anti-LAWairfb丽yP。血杜通过HIC在高浓度丙醇梯度洗脱恢复的第二高峰与两亲物一致。电泳分析和这个片段的大量PIM-like分子化学成分更深一步支持了这个结论，就像以前对G.rubropertincta的预言。在这方面，值得注意的是另外一种菌属，G.sputi，最近也被验证合成特殊的PIM，磷脂酰环己六醇(PIM8,Furneauxetal.2005)。这个数据表明尽管分支杆菌细胞膜含有LAM,LM和PIM，Gordoniae的细胞膜含有LMA-likelipoglycans和PIM，包括大量的oligomannosidePIM。参考文献Arensko…tterM,Bro…kerD,Steinbu…chelA(2004)BiologyofthemetabolicallydiversegenusGordonia.ApplEnvironmMicrobiol70:3195-3204FischerW(1994)Lipoteichoicacidsandlipoglycans.In:GhuysenJ-M,HakenbeckR(eds)Newcomprehensivebiochemistry:bacterialcellwall.Vol27.Elsevier,Amsterdam,pp199215FlahertyC,SutcliffeIC(1999)Identificationofalipoarabinomannan-likelipoglycaninGordoniarubropertincta.SystApplMicrobiol22:530-533FurneauxRH,LandersjoCL,McCulloughJL,SevernWB(2005)Anovelphosphatidylinositolmanno-oligosaccharide(dPIM-8)fromGordoniasputi.CarbohydrRes340:1618-1624GartonNJ,GilleronM,BrandoT,DanHH,GiguereS,PuzoG,PrescottJF,SutcliffeIC(2002)AnovellipoarabinomannanfromtheequinepathogenRhodococcusequiStructureandeffectonmacrophagecytokineproduction.JBiolChem277:31722-31733GilleronM,GartonNJ,NigouJ,BrandoT,PuzoG,SutcliffeIC(2005)CharacterisationofatruncatedlipoarabinomannanfromtheactinomyceteTuricellaotitidis.JBacteriol187:854-861KlatteS,KroppenstedtRM,SchumannP,AltendorfK,RaineyFA(1996)Gordonahirsutasp.nov.IntJSystBacteriol46:876-880NigouJ,GilleronM,PuzoG(2003)Lipoarabinomannans:fromstructuretobiosynthesis.Biochimie85:153-166SutcliffeIC(1994)ThelipoteichoicacidsandlipoglycansofGrampositivebacteria:achemotaxonomicperspective.SystApplMicrobiol17:467-480SutcliffeIC(2000)Characterisationofalipomannanlipoglycanfromthemycolicacid