DB5206T01-2018铜仁市猪人工授精技术操作规程

的的ICS.65.020B43铜仁市DB5206地方标准DBT8代替DB522200/T114-2011铜仁市猪人工授精技术操作规程s铜仁市质量技术监督局发布IDB5206/T01-2018前言本标准按照GB/T1.1－2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。本标准代替DB522200/T114—2011《铜仁地区猪人工授精技术操作规程》。本标准与DB522200/T114—2011相比除编辑性修改外主要差异如下：——修改了本标准适用范围见1；——修改了种公猪来源见2.2；——增加了已本交配种的公猪可进行采精调教见3.1；——修改了种公猪的调教时间见3.3；——增加了假母猪台安全栏的设置见4.1.1；——修改了种公猪的准备见4.1.5；——修改了种公猪的采精方法见4.2；——增加了精子活力压片检测方法操作要求见5.5；——修改了精液的分装见6.2；——修改了精液的保存见6.3；——修改了输精前的准备见7.4；——修改了输精方法见7.5。本标准由铜仁市农业委员会提出并归口。本标准起草单位：铜仁市畜牧技术推广站、松桃县、思南县、碧江区、印江县、玉屏县、万山区、江口县、德江县、沿河县、石阡县畜牧技术推广站。本标准主要起草人：毛同辉、李华磊、龙真权、冉隆权、郑晓刚、任明晋、樊蓉、石建华、黄仁芳、郭义军、裴毅敏、王华、熊凤兰、袁豪、张长军、姚建军、崔宇林、刘运飞、杨礼、邓万红、杨小碎。本标准的历次版本发布情况为：——DB522200/T114-20111DB5206/T01-2018铜仁市猪人工授精技术操作规程1范围本标准规定了猪人工授精技术各个环节，包括种公猪的品种与来源、调教、采精，精液的品质检查、稀释、分装、保存、运输和输精。本标准适用于铜仁市猪人工授精站(点)、养猪场(大户)。2种公猪的品种与来源2.1品种国外引进品种:杜洛克猪、大约克猪、长白猪等；地方优良品种：江口萝卜猪、黔东花猪、黔北黑猪等。2.2来源种公猪必须从取得《种畜禽生产经营许可证》的种猪场或有资质的种猪测定站引进，经种猪测定站或县以上畜牧行政主管部门审定及检疫符合种公猪标准，并有种猪合格证、免疫证、检疫证和系谱卡。3种公猪的调教3.1调教年龄国外引进品种7~8月龄，地方优良品种5~6月龄，已本交配种的公猪也可进行采精调教。教3.2调教方法3.2.1刺激法在假母猪台后端涂抹发情母猪的阴道分泌物、尿液等，以诱发公猪性欲。训练人员发出仿声信号，并辅以阴囊按摸，诱导公猪爬跨并完成射精。3.2.2观摩法调教好的公猪采精时，让待训公猪观摩，激发性欲，待前者采精完后，再调教待训公猪爬跨。3.2.3诱导法用麻袋覆盖发情母猪，不露肢体，只露外阴户，激发公猪性欲，待公猪性欲高涨后，迅速赶开母猪，诱导公猪爬跨假母猪台并辅以阴囊按摸，完成射精。3.3调教次数每日早、晚各调教一次，每次调教的时间10min~15min。3.4种公猪的利用年限用于人工授精的种公猪一般利用年限为3~4年。2DB5206/T01-20184采精4.1采精前的准备4.1.1采精室的准备采精室要求长4m~4.5m、宽3m~3.5m，水泥地面，并进行过防滑处理；室内设立假母猪台以及喷洒消毒和紫外线照射杀菌设备；假母猪台两边各设置安全栏。采精室不能堆放其他杂物，应保持清洁、卫生、安静、蔽光。4.1.2假母猪台的准备假母猪台自制。自制假母猪台可用一个直径为20~25cm、长120~125cm的圆木，两端削成弧形，安装四条腿，在木头上面铺一层稻草或旧棉胎等有弹性的软物，外面包一层软胶皮或猪皮(亦可用铁支焊接为半圆，四条腿能活动的假母猪台)。组装后假母猪台前高60~70cm，后高50~60cm。4.1.3器械的清洗和消毒猪人工授精常用器械见附录A。胶质器械用洗涤剂洗净晾干后，使用前用75%的酒精消毒。玻璃、搪瓷、金属等器械用洗涤剂晾干后，置于160℃~200℃干燥箱消毒30min~60min。集精杯在采精前用稀释液冲洗一次，然后在集精杯上覆盖四层纱布，用橡皮筋套牢，置于37℃恒温箱中备用。4.1.4采精人员的准备采精人员应身体健康，采精前剪短指甲并磨平，用肥皂洗手后擦干并消毒，穿上洁净工作服，戴上一次性塑料手套。4.1.5种公猪的准备采精之前，剪去公猪包皮部的长毛，防止操作时抓住阴毛和阴茎而影响阴茎的勃起，用0.1%高锰酸钾溶液对包皮进行消毒并用毛巾擦干，避免采精时残液滴入或流入精液中导致污。4.2采精方法采精人员左手持集精杯站在假母猪台的左后方，右手挤出公猪包皮积尿，待种公猪爬上假母猪台，伸出阴茎时，立即用右手握住种公猪阴茎前端螺旋部，并顺势将阴茎抽出包皮，然后用生理盐水将阴茎冲洗干净，用拇指按摩阴茎前端以增加快感，当种公猪静伏射精时，右手应有节奏地加压刺激种公猪性欲。种公猪最先射出的精液混有尿液等污物，不要收集，等射出乳白色精液时即可收集。采精中间种公猪会稍停1min~2min，然后又接着射精，种公猪射精一般分2~3个阶段完成，种公猪射精的过程约需5min~10min。采精操作要持续到公猪阴茎缩回并自行退下假母猪台为止，中途不能终止操作，切忌粗暴推下或抽打。4.3采精时间和频率4.3.1采精时间一般情况下早上进食前或进食后1小时采精。盛夏中午不采，严冬早晨不采。4.3.2采精频率经训练调教后的种公猪，一般一周采精一次，12月龄后每周采精可增加至2次，成年3DB5206/T01-2018后每周采精2~3次。5精液的品质检查5.1采精量采集精液后以量筒测量精液体积，成年种公猪一次射精量为100mL~500mL。5.2颜色正常精液颜色为乳白色或灰白色；其它颜色的精液为不正常精液，应废弃。5.3气味正常精液略带腥味，如有异常气味不可用于输精。以PH计或PH试纸测量，正常范围7.0~7.8。5.5活力精子活力的评定采取显微镜下目力估测，一般按0.1~1.0的十级评分法评分。直线前进运动的精子占100%则评为1分，90%评分为0.9分，80%评分为0.8分，以此类推。用于输精的精液精子活力要求不低于0.7。检查活力时载玻片和盖玻片都应在37℃恒温箱中预热。压片检测法精液干燥较快，检查须迅速完成。5.6密度指每毫升精液中所含的精子数，是确定稀释倍数的重要标准。可用血细胞计数板计数或精子密度测定仪测定。用于输精的精液精子密度以不低于1亿个/mL为宜。5.7畸形率指异常精子的百分率。畸形精子种类很多，如：巨型精子、短小精子、双头或双尾精子，顶体膨胀或脱落、精子头部残缺或尾部分离、尾部变曲。用于输精的精液精子畸形率要求不超过18%。畸形率的测定可用普通显微镜，但需伊红染色或姬姆萨染色，相差显微镜可直接观察精子畸形率。精液品质检查完成后，填写种公猪精液品质检查登记表见附录B。6精液的稀释、分装、保存和运输6.1精液的稀释6.1.1稀释液的配制g蒸馏水100mL。配方2：葡萄糖6g，柠檬酸钠0.35g，碳酸氢钠0.12g，乙二胺四乙酸二钠0.37g，蒸上述各稀释液按配方先将葡萄糖、柠檬酸钠等溶于蒸馏水中，过滤后蒸气消毒30min，取出冷却至30℃~35℃时，加入卵黄，然后以每100mL加入青霉素、链霉毒各5万IU，搅拌均匀备用。稀释液保存在4℃的冰箱中，不超过24小时。6.1.2精液的稀释4DB5206/T01-2018精液采集后应尽快稀释，原精保存不超过30分钟。稀释液与精液要求等温稀释，两者温差不超过1℃，即稀释液应加热至33℃~37℃，以精液温度为标准，来调节稀释液的温度，绝不能反过来操作。精液的稀释倍数为1:1~1:2，稀释时将稀释液沿集精杯壁缓慢加入到精液中，然后轻轻摇动或用消毒玻璃棒搅拌，使之混合均匀。稀释倍数的确定：要求每个输精剂量含有效精子数30亿以上，输精量为80mL~100mL确定稀释倍数。6.2精液的分装稀释后的精液，用一次性输精瓶分装，分装量为一份输精的用量(80mL~100mL)，盖紧瓶盖，标明种公猪品种、耳号、生产日期、保存有效期等。6.3精液的保存分装好的精液应用毛巾毛巾包严置于17℃的恒温箱中保存，每隔12h轻轻翻动1次，防止精子沉淀而引起死亡。稀释后的精液保存时间一般为3-5d，应尽快使用。6.4精液的运输精液运输时应置于保温效果较好的容器内，保持在15℃~25℃，运输过程中避免强烈震动。7输精7.1母猪发情鉴定母猪从性成熟开始，每间隔21天左右发情一次，发情持续期为3~4天。发情时鸣叫、站卧不安、食欲减退、爬跨、外阴红肿有分泌物流出。7.2适时输精母猪适宜配种时期以发情期的后期为宜，即发情开始后36~48小时内，此时母猪阴户红肿刚减退(打皱)，粘液由稀变浓，燥动稍减，按压其臀部站立不动(即静立反应)，这时输精最适宜。7.3精液检查从17℃的恒温箱中取出精液，轻轻摇匀，用微量移液管取1滴放于预热的载玻片，置于37℃的恒温箱上片刻，用显微镜检查活力，精子活力在0.7以上，方可使用。7.4输精前的准备输精人员洗净手，把输精器材用少量稀释液冲洗一遍，用0.1%高锰酸钾溶液冲洗、擦干母猪外阴部。7.5输精方法输精所用器械最好用一次性的，输精方法有注射法和自然法两种。输精前应使母猪保持自由站立状态。输精时，用注射器吸取精液，再将它连接胶管(自然法直接将精液容器连接胶管)，然后把输精胶管从母猪阴户徐徐插进去，沿母猪阴道上壁缓缓前进，当插不动时，可稍退再进，直到输精管插入20cm~30cm为止，动作要轻，输精员用手或左(右)脚踏在母猪腰背部，左手拉住尾巴，右手持注射器，按压注射器柄，精液便流入子宫内。输精时，最好将输精管左右轻微旋转，用右手食指按摸阴核，增加母猪快感，刺激阴道和子宫的收缩，5DB5206/T01-2018避免精液外流。输完精后，把输精管向前或左右轻轻转动2分钟，然后轻轻拉出输精管。为保证输精效果，可进行两次输精，两次输精时间不低于8小时。输精完成后，登记母猪输精记录表见附录C及母猪输配记录表见附录D。6DB5206/T01-2018(资料性附录)猪人工授精常用器械表表A.1猪人工授精常用器械表品名单位数量品名单位数量温度计支5集精杯个2双蒸水器台1水浴锅台1电冰箱个1恒温箱个1酒精灯个2微量移液器支2普通显微镜或相差显微镜台1干燥箱台1架盘天平台1磁力搅拌器台1消毒柜个1精子密度测定仪台1试管刷把5量杯个3量筒个5个1血细胞计数板个2本若干载玻片、盖玻片片计数器个1精液保温箱个1精液分装瓶个按用量计医用剪刀把2保鲜薄膜袋卷若干玻璃注射器支5医用纱布或滤纸卷若干一次性输精管支按用量计一次性塑料手套双若干7DB5206/T01-2018(资料性附录)表B.1种公猪精液品质检查登记表采精公猪耳号采精员采精量(mL)颜色气味PH值活力评分密度(亿/mL)畸形率(%)总精子数(亿)检验员8DB5