普生实验报告

叶绿体色素的提取分离、理化性质①提取与分离实验原理叶绿体中许多色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故用乙醇等有机溶剂提取。可用薄层色谱法加以分离和鉴别。薄层层析色谱法是将吸附剂均匀地涂在玻璃板上成一薄层。把待分离的样品溶液点在薄层板下端，然后用一定量的溶剂作为流动相，将薄层板的下端浸入到展开剂当中。流动相通过毛细管作用由下而上逐渐浸润薄层板，并带动样品在板上也向上移动，样品中各组分在吸附剂和展开剂之间发生连续不断的吸附、脱附、再吸附、再脱附的过程。由于吸附剂对不同物质的吸附能力大小不同，吸附力强的物质移动慢一些，而吸附力弱的物质则移动快一些，从而使各组分有因移动速度不同而彼此分开。实验仪器和材料新鲜菠菜叶片体积分数为95%的乙醇，CaCO3粉末，展开剂研钵，漏斗，三角瓶，剪刀，点样毛细管，层析缸，硅胶预制板，滤纸实验步骤（一）色素提取液的制备之后，用铅笔标出展开剂前沿，测算各色素带的Rf值。②理化性质实验原理叶绿素是由叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，可与碱起皂化反应而生成甲醇和叶绿醇及叶绿酸盐，产生的盐能溶于水中，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开。叶绿素的化学性质不稳定，容易受强光破坏，而类胡萝卜素较稳定。与铝塑中的镁可以被H+取代而成褐色的去镁叶绿素。去镁叶绿素遇铜则成为铜代叶绿素，铜代叶绿素很稳定。叶绿素吸收光量子而转变成不稳定的激发态，当它变回到基态时会发射出红光量子，产生荧光。实验材料与试剂1新鲜菠菜叶2刻度试管，小试管，试管架，水浴锅，10ml移液管3体积分数为95%的乙醇，苯，醋酸铜粉末，质量分数为5%的吸烟栓，醋酸-醋酸铜溶液，氢氧化钾-甲醇溶液。（一） 光对叶绿素的破坏作用Parti:取2支小试管，各加2.5ml叶绿体色素乙醇提取液，并用体积分数为95%的乙醇稀释一倍。其中1支放在直射日光下，另外1支用锡箔纸伯颜，40分钟后对比观察颜色变化。Part2:取本实验中用薄层层析分离成的硅胶色谱板，按长度方向将一半用黑色纸包住，放在直射日光下，30分钟后比较色谱板上的各色素的颜色的变化。（二） 皂化作用取1支10ml刻度试管加入3ml叶绿体色素乙醇提取液，加入1ml氢氧化钾-甲醇溶液，充分摇匀。之后加入3ml苯，摇匀，在沿试管壁慢慢加入1ml蒸馏水，轻轻混匀，然后放到试管架上静置分层。（三） H+&C*+对叶绿体分子中Mg2+的取代作用Part1:取两支试管，第一只加叶绿素提取液5ml作为对照；另一只加叶绿体色素提取液5ml后，再加入质量分数为5%的HCl数滴，摇匀，观察溶液颜色变化。变褐后，再加入少量醋酸铜粉末，60r水浴加热，观察溶液颜色变化，并同对照试管比较。Part2:取新鲜菠菜叶2片，放入试管中，加醋酸-醋酸铜溶液并没过叶片，90r水浴加热，随时观察叶片颜色变化直至颜色不再变化为止。（四） 荧光现象的观察取一支小试管加入3ml叶绿体色素乙醇提取液，在直射光下照射，比较溶液的透射光与反射光有何不同。实验结果①提取与分离我们组分离效果较好，每一条色带都很齐，各色带间很清晰地分开。从上往昔依次为橘黄色的胡萝卜素，蓝绿色的叶绿素a，黄绿色的叶绿素b，纯黄色的叶黄素。溶剂前沿到原点距离H=8.80cm色素名称斑点中心到原点的距离hRf值（R尸h/H）胡萝卜素8.40cm8.4/8.8=0.955叶绿素a6.65cm6.65/8.8=0.756叶绿素b6.25cm6.25/8.8=0.710叶黄素5.95cm5.9/8.8=0.676②理化性质（一） 光对叶绿素的破坏作用用锡箔纸包严的溶液保持原先中等深度的绿色，而受到直射阳光的溶液颜色变浅，呈黄绿色硅胶色谱板上所有受直射光的胡萝卜素带以及叶黄素带均被破坏，颜色消失；而叶绿素a、b则基本未受破坏，颜色只是稍微变淡。（二） 皂化作用溶液分为清晰地三层：上层为黄色的苯溶液，其中溶有胡萝卜素和叶黄素；中层为偏深的绿色，溶有皂化的叶绿素a、b；底层为乳白色。（三） H+&C*+对叶绿体分子中Mg2+的取代作用同对照试管比较后，发现经水浴加热后的溶液颜色更深，为深绿色经水浴加热后的溶液颜色先变黄，后变深绿色。（四） 荧光现象的观察溶液的透射光为绿色光，反射光为紫红色实验讨论1用点样毛细管划线时，与其“划”线，不如用毛细管把提取液“点”在硅胶预制板上，因为“划”容易使硅胶破损，而且容易使线上各处的提取液量不够均匀。采用“点”的手法，可使提取液在线上分布均匀而且不破坏硅胶的完整性。2开始不清楚加CaCO3的原因，后来才知道CaCO3稳定pH值，防止某些成分被破坏。3不同色素爬升至不同的高度，反映了色素的极性大小不同。极性大，被硅胶吸附就牢，爬升的相对慢；反之会快一些。故胡萝卜素、叶绿素a，叶绿素b，叶黄素的极性依次增大。4溶解样品的溶剂之所以不用水，是因为水溶液点样是易扩散；而乙醇这样的有机溶剂容易挥发，并能减少空气中水蒸气对薄层吸附剂的影响。5我们组的受直射光的叶绿素体色素乙醇提取液颜色变淡不明显，推测是当是光不够强。但这也证明了如果光过强，反而会破