临床分子生物学检验学技术

临床分子生物学检验学技术【名词解释】基因组：是一个细胞或一种生物体的整套遗传物质，包括基因和非编码DNA。单核苷酸多态性(SNP)：主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。动态突变(dynamicmutation)：DNA串联重复序列，尤其是基因编码序列或侧翼序列的三核苷酸重复次数增加所引变效应，所以被称为动态突变。限制性片段长度多态性(RFLP):是根据不同个体基因组的限制性内切酶的酶切位DNA变性DNATm增反应的模板。内含子(intron)：断裂基因中不编码的间隔序列称为内含子，内含子是在mRNA被转录后的剪接加工中去除的区域。外显子(exon)：mRNA的区域。要对参与杂交反应的核酸分子进行标记，这一段被标记的核酸分子就是探针。酸形成双链杂交体的过程称作核酸分子杂交。DNA阵列，以获得蛋白质的表达、结构、功能和相互作用的信息。检测每个探针分子的杂交信号强度，进而获取样品分子的数量和序列信息。化过程中高度稳定，对细胞无害，而且在控制细胞生长和分化中起重要作用。抑癌基因(anti-oncogene)：为一类可以编码对肿瘤形成起阻抑作用的蛋白质的基因，正常情况下抑制细胞增殖，促进细胞分化。最佳条件下的变异(OCV)：是指在某一实验室内，在最理想和最恒定的条件下，达到的精密度的最高水平。常规条件下的变异(RCV)：是指在某一实验室内常规条件下，对同一质控品进行20起的疾病。mtDNA链及能量代谢障碍所致的以脑和肌肉受累为主的多系统疾病。肽段质量图谱，呈现独特的指纹特征。全基因组关联分析单核苷酸多态性，从中筛选出与疾病相关的位点。Tm特点设计的一种检测核酸突变和多态性的技术。PCRDNADNAPCR：是对靶DNA21物。(通常设计两对引物)循环数(Ct过的循环次数。【填空题】整性排除其他分子的污染，保证核酸样品的纯度)。PCR反应中,Mg++是个至关重要的因素，浓度(过低度(过高)又会导致非特异性扩增。用于核酸杂交的普通硝酸纤维素膜最大的优点是(本底低交信号，缺点是(脆性大)易破裂，且对<500bp整个核酸杂交反应主要由(预杂交)、(杂交洗脱)三个步骤组成。步的固定，常用的固定方法是(烘烤紫外线固定)和(碱固定)。【简答题】一、原癌基因激活机制：①点突变②易位激活③原癌基因扩增④癌基因甲基化的程度降低二、抑癌基因失活方式：①由于DNA点突变或缺失导致一个等位基因失活，如Rb、p53、WT1。②由于DNA甲基化和组蛋白去乙酰化等表观遗传学机制抑制一个等位基因的表达，最终导致肿瘤的发生。三、病毒病的检出策略：DNARNA，染以及被何种病毒感染，是快速诊断病毒病的首选方法。分析。四、细菌感染的检出策略：五、PCR引物设计原则列互补。20~30二级结构:两条引物自身或引物之间一般不应存在互补序列，避免形成二级结构或引物二聚体，影响引物与模板的正确结合。4.应随机分布、组成平衡，避免出现嘌呤嘧啶碱基堆积。TmTm2~5°C。3'3'对，不能进行任何化学修饰。同时引物3'端最后一个碱基最好不落在密码子的5'端可加修饰成分，如酶切位点、突变位点等。六、水解探针技术TaqMan探针原理反应体系除了有一-对引物外,还需要一条荧光素标记的探针，探针的5'标记荧R，3’Q。根据荧光共振能量传递RQRQ，TaqDNA沿着模板移动合成新链，当移动到与模板互补的探针处时，TaqDNA5'-3'5'QRQR基团的抑制而发射出荧光，仪器的检测系统便可检测到荧光信号。七、简述探针的种类和优缺点答:1)cDNAcDNAcDNA目前应用最为广泛的一种探针.大量扩增,纯化，切取插入片段，分离纯化为探针.DNA酸片段作为探针.RNARNARNA八、蛋白质芯片及原理将蛋白质或多肽大规模的固定在固相载体表面，形成"集成电路(电子芯片)样"的微阵列,以高通量的获得蛋白质的表达、结构、功能和相互作用的信息。原理:将已知的蛋白质固定在经特殊化学处理的固相载体上，根据这些生物分子的识别特性(如抗原与抗体、受体与配体、酶与受体)与特异性的待测蛋白反应，从而检测未知蛋白质的表达水平和结构。九、核酸的分离纯化步骤DNARNA,酸结构的完整性。目前核酸的分离纯化主要包括4个步骤:①制备细胞及破碎细胞;②消化蛋白质，去除与核酸结合的蛋白质、多糖及脂类等生物大分子;③去除其他不需要的核酸分子;④沉淀核酸，去除盐类、有机溶剂等杂质。十、双向凝胶电泳原理双向凝胶电泳(two-dimensionalelectrophoresis2-DE是利用蛋白质的电荷数和分电泳(iso-electricfocusing,IEF)pHXY的蛋白质。十一、16SrRNA基因序列分析鉴定细菌原理及优点细菌16SrRNA基因结构特征：16SrRNA基因编码原核生物核糖体小亚基rRNA(16SRNA),长度约1500bp,存在于所有细菌及衣原体、立克次体、支原体、1011无差别；可变区因细菌而异，变异程度与细菌的系统发育密切相关。2.16SrRNA16SrRNA基因被称为细菌的“分子化石”。16SrRNA3得针对该基因的分子生物学检测具有较高的灵敏度;②多信息:由可变区和保守1500bp,16SrRNAPCR炎及慢性前列腺炎等细菌感染性疾病的检测。十二、荧光原位杂交技术(FISH)技术的原理FISH测，再用与荧光素分子耦联的单克隆抗体与探针分子特异性结合，来检测DNA记好的核酸探针变性，然后与被检标本上已变性的靶核酸在退火温度下进行复不变的情况下，对待检靶核酸序列进行定位、定性和相对定量分析。十三、DNA芯片的原理和应用:①DNADNADNA，RNA②应用:在肿瘤基因表达谱差异研究、基因突变、基因测序、基因多态性分析、微生物筛选鉴定、遗传病产前诊断等方面应用广泛，为疾病诊断、治疗、预防和机制研究等提供了有力工具。基因表达分析。c.疾病诊断。ef.预防医学。十四、α珠蛋白生成障碍性贫血分类十五、原核生物基因组特征1.原核生物基因组较小原核生物的类核结构原核生物的操纵子原核生物的结构基因具有编码同工酶的基因DNA十六、病毒基因组的特征1.基因组的碱基组成基因组的核酸类型基因组中有重