结核分支杆菌培养仪操作维护规程

BD960结核分支杆菌培养仪操作维护规程1技术参数物理参数高53inches(134.62cm)宽36inches(91.84cm)深28inches(71.12cm)周边应留空间左，后，右12inches(30.48cm)前48inches(121.9cm)重量（没有测试管）754lbs.(342kg)重量（有测试管）794lbs.(360.2kg)电气要求输入电压100–120或200–240VAC输入电流最大10.0Amp输入频率50or60Hz3Hz散热4000BTU/hr功耗2000Watts 环境要求非操作状态温度-17.8C--65.0C(0F–149F)湿度30%-80%RH,non-condensing操作状态温度24C-28C(66.2F–86F)湿度30%-80%RH,non-condensing定位水平放置，避免阳光直射，避免发热装置海拔高度海拔0--4,000M2适用范围适用于该仪器操作手册所列的分支杆菌的培养鉴定和药敏。3工作原理若接种的MGIT培养管中有分支杆菌生长，管中的营养成分和氧气将不断被消耗，MGIT培养管中的荧光显示剂将随着管内氧气浓度的变化而发生反应。一旦培养管内氧气被利用，管内荧光指示剂将在特定光源的激活下释放荧光。BACTECMGIT960荧光强度记忆探测器将每隔60min连续测定培养管内荧光强度，从而判断管内分支杆菌生长情况。4试剂（1）试剂名称：Middlebrook7H9培养肉汤，OADC营养添加剂，抑菌剂PANTA。（2）试剂生产厂家：xx生物技术有限公司（3）包装规格：7X100（4）试剂盒组成：培养肉汤，营养添加剂，抑菌剂5操作步骤（1）标本的采集和处理：吸1ml的痰液加1：1的4%的氢氧化钠消化15分钟，取消化液离心10分钟。弃去上清液，加入PH6.8的无菌PBS液5ml，温和混匀。再离心，弃去上清液，加入无菌PBS液1ml充分混匀。（2）胃液、脑脊液、骨膜液、胸膜液和膀胱穿刺尿等标本要先去污染处理。（3）在MGIT管标签上直接标记，在无菌条件下用滴管加入0.5mlMGITOADC营养添加剂；在无菌条件下加入0.1mlMGITPANTA抗菌素混合溶液。（4）加入0.5ml处理好的标本（注意：标本量超过0.5ml会增加污染机会）。（5）旋紧管盖、适当混匀。（6）将MGIT培养管置入BACTECMGIT960全自动分支杆菌培养仪孵育培养。（7）BACTECMGIT960荧光强度记忆探测器每隔60min连续测定培养管内荧光强度，从而判断管内分支杆菌生长情况。（8）阳性标本进行涂片，确认为分枝杆菌进行药敏试验后发出报告。样品要求：（1）标本类型：深部痰液。（2）标本采集：见标本采集手册（3）标本储存和运输：室温放置，室温运输并立即送检。（4）标本拒收状态：非无菌方式采集的标本。6药敏试验（1）试剂及试剂制备：MGITASTSIRE药敏试剂盒为冻干试剂，2～8℃保存，溶解后可-70℃保存6个月。建议溶解后立即使用。SM160ugINH20ugRFP200ugEMB700ug试剂制备方法：分别在每一抗菌素试剂瓶内加入4ml灭菌蒸馏水或去离子水后混匀，得到以下各试剂浓度。SM40ug/mlINH5ug/mlRFP50ug/mlEMB175g/ml（2）阳性管MGIT管的制备：MGIT阳性管1～3d的阳性培养物。如阳性管超过4d阳性的培养物，则需立即振荡MGIT管10s后，取1ml均匀培养物用4ml生理盐水稀释（1：5稀释）转种。（3阳性对照管的制备：①取未接种的MGIT培养管并除去管内肉汤。②将该空培养管标记为阳性对照管并标记配置日期。③配置0.4％亚硫酸钠（0.4g亚硫酸钠溶于100ml无菌蒸馏水或去离子水中）。④将5ml亚硫酸钠溶液加入管内，将盖旋紧。使用前至少应在室温放置1h。⑤阳性对照管能多次使用（4）药敏操作步骤：①将MGIT管分别标记生长对照（GC）,SM、INH、RFP、EMB等。②每管中分别加入0.5mlMGITOADC营养添加剂。③每管中分别加入对应量的已稀释的S、H、R、E，至终浓度为表1所示。表1抗生素终浓度抗生素名称终浓度SMINHRFPEMB0.8ug/ml0.1ug/ml1.0ug/ml3.5g/m④分别在5管中加入0.5ml1：5稀释的阳性培养菌液。⑤BACTECMGIT960全自动分支杆菌培养仪孵育。⑥取0.1ml1：5稀释的阳性培养菌液接种一血平板，装入一塑料袋中于35～37℃孵育。⑦48h后检查该平血平板是否有其它杂菌生长。⑧如血平板未见有杂菌生长则可以读取BACTECMGIT960结果。⑨如血平板有杂菌生长则需重复实验步骤。（5）判读MGIT管①MGITGC生长对照管和阳性对照管为阳性，阴性管为阴性。②当GC生长对照管为阳性时则开始判读药敏管，并且连续判读后续2d的结果。③耐药：药敏管和GC管在同一天被判读仪判读为结果阳性，或比GC管晚1～2d。④敏感：药敏管在GC出现阳性后2d内仍未见生长则为敏感。7MTC与MOTT鉴定法（1）凡制备作分支杆菌药敏实验的实验室均需进行分支杆菌菌种鉴定。①PNB培养基：PNB用二甲基甲酰胺或丙二醇溶解稀释后加入BBLMGIT分支杆菌生长指示管中，使最终浓度为0.5mg/ml，制备方法同药敏试验培养基配制法。②TCH培养基：TCH5mg溶于10ml无菌蒸馏水，取80ul加入BBLMGIT分支杆菌生长指示培养管中，使最终浓度为5ug/ml，制备方法同药敏试验培养基配制法。③接种方法：与药敏试验相同，且与药敏试验同步进行。（2）结果与报告见表2表2：分支杆菌菌种初步鉴定PNBTCH牛分支杆菌-人型结核分支杆菌-MOTT+-++8注意事项环境要求：BACTECMGIT960全自动分支杆菌培养仪，应安放在稳固工作台上，保持通风，避免震动，避免阳光直射，避免灰尘，避免无线电波干扰，电源条件应满足117/2